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绿原酸的微波超声波联合提取及其抑菌作用
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徐跃成
,邓伟, 杨迎伍,李正国
重庆大学生物工程学院基因工程研究中心功能基因与调控新技术重点实验室,重庆
(400044)
E-mail:Xuyuecheng007@sina.com
摘 要:为了寻找更高效的绿原酸提取方法及进一步明确绿原酸的抑菌活性及抗菌谱,本
文以金银花为材料,通过对稀醇回流法、超声波提取法、微波辅助提取法等方法的考察发
现微波-超声波联合提取法的绿原酸提取率最高;正交实验得出其最佳工艺参数为:在250 W
功率下微波预处理3次,30 s/次;再按料液比(v/v,1/20)加入70 %乙醇,在功率18 W下超
声提取20 min,一次性提取率即达73%以上;各因素的影响大小分别为:超声功率>溶剂
倍量>超声时间。抑菌研究表明,绿原酸对革兰氏阴性菌的抑菌活性比革兰氏阳性菌更强,
绿原酸水溶液对志贺氏菌、沙门氏菌的最小抑菌浓度均为0.125 mg/ml,抑菌效果与0.1
mg/ml的卡那霉素的抑菌效果相当。
关键词:金银花;绿原酸;微波-超声波联合提取;抑菌活性
中图分类号: R282.71 文献标志码:B
1 引言
金银花(houneysuckle flowers)为忍冬科植物忍冬(Lonicera japonica Thunb)的干燥花蕾
或初开的花。金银花的特征活性成分为绿原酸
,具有抗菌、抗病毒、升高白细胞、免疫调节、
抗肿瘤、降血压、降血脂等作用
[1,2]
。Hideko M 等的研究结果认为, 绿原酸是很有希望的抗
艾滋病毒
(HIV)的先导化合物
[3]
。鉴于绿原酸的巨大开发价值,国内外已纷纷开展绿原酸提
取及其药理活性的相关研究,绿原酸的提取工艺也取得了一定的研究进展,但提取率低、能
耗大、耗时长、工艺复杂等问题一直未能有效解决。微波、超声波提取作为新型的提取技术,
具有被提取活性物质不被破坏,提取时间短等优点,在天然产物提取方面已得到广泛的应用,
然而目前只有少量应用微波、超声波提取技术提取绿原酸的报道
[4-11]
,且尚无将微波-超声波
联用提取金银花中绿原酸的报道。目前虽已有一些关于绿原酸抑菌活性作用的研究报道
[12-16]
,但绿原酸的抑菌作用机理及其抗菌谱尚不明了,尚无绿原酸关于志贺氏菌、沙门氏菌、
李斯特菌等几种常见致病菌的抑菌活性报道,为此,本文以重庆金银花为原料,以绿原酸提
取率为指标,采用UV光谱法、HPLC法定性定量分析方法,通过对70%乙醇回流提取法、超
声波提取法、微波辅助提取法与微波-超声波联用法进行比较研究;并研究了绿原酸对志贺
氏菌、沙门氏菌、李斯特菌的抑菌活性,以期优化绿原酸的提取工艺,明确绿原酸抗菌谱提
供参考。
2 材料与方法
2.1 材料、试剂与仪器
金银花取自重庆市秀山县,沙门氏菌、志贺氏菌、李斯特菌、金黄色葡萄球菌菌株为实
验室保存。
主要试剂:无水甲醇,冰乙酸为色谱纯;无水乙醇等购自重庆化学试剂公司,均为化学
纯;绿原酸标准品购自Sigma公司。
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本课题得到国家自然科学基金项目(No. 3471214),重庆市科委自然基金重点项目(No. 2007BA1005)资助。