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第 37卷 第 6 期
2013年 12月
南昌大学学报(理科版)
Journal of Nanchang University (Natural Science)
Vol. 37 No . 6
Dec2013
文章编号:1006-0464(013)06-0570-07
荷包红鲤自噬相关基因LC3B的克隆及
在重金属镉胁迫下的表达
高 典 〃 ,隗 黎 丽 2 , 许 珍 娥 1b , 刘 申 1 b , 乔 盼 盼 ib
( 1 南昌大学a.医学院;b.免疫与生物治疗研究所,江西南昌 330006;
2. 江西农业大学动物科学技术学院,江 西 南 昌 330045)
摘 要 :微管相关蛋白1 轻链3(microtubule-associated protein 1 light chain 3 ,L C 3 )是哺乳动物细胞中酵母自職相
关基因8 C A T G 8 ) 的同源物,其 L C 3 B 亚型的表达强度与自噬泡数量的多少成正相关,为自噬发生的标志蛋白之一。
应用R A C E - P C R 技术克隆了婺源荷包红鲤L C 3 B 基因的c D N A 全长序列,用 R T - P C R 方法检测了该基因在荷包
红鲤主要组织中的表达,并用Real-tme quantitative P C R 方法检测了该基因在镉胁迫下转录水平的变化,以初步揭
示该基因在镉胁迫下的作用。结果表明,荷包红鲤L C 3 B 基因c D N A 全长为2 138 b p ,其中开放阅读框长378 b p ,
编码1 2 5 个氨基酸,预测分子量为14. 73 k D a ,等电点为8. 76 。序列比对显示,其编码的氨基酸序列和斑马鱼L C 3 B
具有最高的一致性和相似性,并在系统发育树上聚为一支。该基因在荷包红鲤肌肉、脑、鳃、脾脏、肝脏、血液、头
肾、肾脏和心脏组织中均有表达;在镉胁迫下,镉诱导显著影响了该基因在肾脏组织中的转录水平。L C 3 B 基因参
与的自噬反应可能参与了抗镉毒性作用。
关键词:微管相关蛋白1 轻链3; 自噬;镉;重金属;荷包红鲤
中图分类号:Q958.8 文献标志码:A
Molecular cloning,characterization and expression analysis of LC3B
from purse red common carp (Cyprinus carpio) exposed to cadmium
G A O D i a n la* , W E I Lilt , X U Z h e n e lh,L I U S h e n lh Q I A O P a n p a n lb
(1a. Medical College of Nanchang University,Nanchang 330006,China;
lb. Institute of Immunotherapy,Nanchang University, Nanchang 330006 ,China;
2. College of Animal Science and Technology,Jiangxi Agricultural University,Nanchang 330045,China)
Abstract : L C 3 (microtubule-associated protein 1 light chain 3) , located in a u t o p h a g o s o m e m e m b r a n e s after
process ing ,serves as a majo r a u t o p h a g y marke r. In this s t u d y ,w e isolated i t s L C 3 B isform f r o m c o m m o n
carp (cyprinus carpio) ,o n e of the m o s t imp or tan t industrial aquatic animals i n C h i n a using rapid amplifica
tion of c D N A ends ( R A C E ) . T h e c D N A of L C 3 B g ene is 2138-nt in l engt h,containing a 378-nt o p e n read
ing frame. T h e putative L C 3 B en co des a peptide of 125 a m i n o acids, w i th a calculated molecula r w e i g h t of
14. 73 k D a a n d an isoelectric point of 8. 76. Multiple se qu enc e alignment s h o w e d that the d e d uc e d a m i n o
acid sequenc e of c o m m o n carp L C 3 B h a d the highest seque nce identity (95. 2 % ) a n d similarity (96. 8 % ) to
that of zebrafish. In a phylogenetic tree b ase d o n a m i n o acid sequences f r o m fish , m a m m a lia n , a v i a n a n d a m
phibian L C 3 genes, the L C 3 proteins f r o m different species w e r e divided into three s u b g r o u p s ( L C 3 A ,
L C 3 B a n d L C 3 C ) . T h e c o m m o n carp L C 3 B f o r m e d a phylogenetic cluster wit h zebrafish,the n other verte
brates. T h e m R N A transcript level of L C 3 B w a s detected in mus cle , brain, gills, spleen, liver, blood, h e ad
k idne y ,ki d ney a n d heart tissues b y R T - P C R analysis. L C 3 B m R N A transcript level in kidne y w a s found
收稿• 期:2013-09-30。
基金项目!国家自然科学基金项目(3 1 0 011 2 8 ) 江西省自然科学基金项目(2 n 0 G Q Y 0 2 0 9 );江西省科技支撑计划项目
(010 BSB0 3001 );江 西省教育厅科 学基金项目(GJJ1105 3) ;南 昌 大 学 (省级)创新创业训练计划项目
(201310403036)。
作者简介:高 典 (1979— ),男,博士,讲师。E-mail:gaodian@ncu. edu. cn。