新型嵌合病毒Ad/AAV携带全长Cetuximab的构建与表达分析
"这篇论文是关于构建和分析携带全长抗体Cetuximab的新型嵌合病毒Ad/AAV的研究,旨在评估这种病毒在体外表达外源基因的能力。研究团队通过克隆Cetuximab(AT2)基因进入含有腺相关病毒ITR的穿梭质粒,并与骨架质粒共同转染HEK293细胞,从而包装出嵌合病毒A/V-AT2。他们使用PCR和TCID50法测量病毒滴度,随后用10个MOI的病毒感染293和NK92细胞,通过ELISA和Western Blot检测抗体AT2的表达情况。结果显示,病毒能够稳定地在细胞中表达抗体,浓度在8天内保持在110ng/ml左右,证明了新型嵌合病毒Ad/AAV有良好的外源基因长效表达能力,为后续的基因治疗研究提供了基础。" 该研究的主要知识点包括: 1. **嵌合病毒Ad/AAV**: 这是一种结合了腺病毒(Ad)和腺相关病毒(AAV)特点的新型病毒载体。嵌合病毒的设计目的是提高基因传递效率和稳定性,同时减少潜在的副作用。 2. **Cetuximab(AT2)**: Cetuximab是一种全长抗体,主要用于靶向EGFR(表皮生长因子受体),常用于癌症治疗。在这个研究中,Cetuximab基因被整合到病毒载体中,以探索其作为基因治疗工具的可能性。 3. **基因克隆技术**: 研究者将Cetuximab基因克隆到含有AAV ITR( inverted terminal repeats)的穿梭质粒中,这是构建重组病毒的关键步骤。 4. **HEK293细胞**: 这是一种常用的人类胚胎肾细胞系,常用于病毒包装和基因表达研究。在这项实验中,它们被用来进行基因转移和病毒生产。 5. **同源重组**: 细胞内的同源重组过程使得病毒穿梭质粒与骨架质粒结合,形成嵌合病毒A/V-AT2。 6. **PCR和TCID50法**: PCR(聚合酶链式反应)用于验证病毒基因组的正确性和纯度,而TCID50(组织培养感染剂量50%)法则用于测定病毒的滴度,即单位体积中能引起50%细胞感染的病毒数量。 7. **抗体表达分析**: 研究人员通过ELISA(酶联免疫吸附测定)来定量检测抗体AT2的浓度,通过Western Blot检测抗体的轻重链表达,以确认抗体的正确合成和成熟。 8. **长效表达**: 结果显示,病毒在感染的293和NK92细胞中可以持续表达AT2抗体,且表达水平稳定,这表明Ad/AAV嵌合病毒是一个有潜力的基因传递工具。 9. **基因治疗应用**: 这项研究为基于抗体的基因治疗策略提供了新的平台,可能在未来的癌症或其他疾病治疗中发挥作用。 10. **基金支持**: 研究得到了国家自然科学基金和上海市优秀学科带头人计划的支持,体现了该领域研究的学术价值和实际意义。
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