HCVp7基因启动子克隆与转录活性研究：p7TP2调控下的实验验证

该研究论文主要探讨了HCVp7下调基因p7TP2的启动子序列克隆及其转录活性检测。研究团队针对HCVp7TP2基因的翻译起始密码子ATG上游1203bp至下游147bp的基因组DNA序列进行了深入分析，将其认定为潜在的启动子区域。通过克隆技术获得了这段启动子片段，并将其构建入两种表达载体中，即pCAT3-p7TP2-p和pGLB-p7TP2-p。 pCAT3-p7TP2-p载体用于CAT（Chloramphenicol Acetyltransferase）表达系统的研究，这是一种常用的基因表达评估工具。通过将pCAT3-p7TP2-p转染到HepG2细胞中，结果显示其转染后的CAT表达活性显著高于对照组pCAT3-Basic细胞，达到了5.98倍的水平，表明克隆的p7TP2启动子在HepG2细胞中有较高的转录活性。 另一部分实验则利用pGLB-p7TP2-p载体和双荧光素酶（Dual Luciferase）系统来进一步验证转录活性。双荧光素酶系统是一种更为精确的转录活性测定方法，因为它同时监测两种报告基因的表达。结果表明，转染pGLB-p7TP2-p的HepG2细胞显示出9.67倍的双荧光素酶表达活性，进一步证实了克隆的p7TP2启动子具有实际的转录驱动能力。 整个研究的目的是深入理解HCVp7对p7TP2基因转录调控的作用，这对于揭示HCV感染机制以及可能的治疗靶点具有重要意义。作者们成功克隆出的p7TP2启动子序列不仅与预测序列相符，而且在体外实验中显示出了良好的转录活性，为后续的分子生物学研究和临床实践提供了有价值的基础数据。通过这些实验，研究人员可以进一步探究HCVp7如何影响宿主细胞的基因表达，从而为丙型肝炎的预防和治疗提供新的思路。