布鲁氏菌与单增李斯特菌牛奶双重PCR检测法

"牛奶中布鲁氏菌和单增李斯特菌双重PCR检测方法的建立 (2011年)" 本文是2011年发表在《西北农林科技大学学报（自然科学版）》上的一篇科研论文，研究目的是建立一种针对牛奶中布鲁氏菌和单增李斯特菌的双重PCR检测技术。布鲁氏菌和单增李斯特菌是两种对人类健康构成威胁的重要病原菌，它们能在食品，特别是乳制品中生存，导致人畜共患疾病。 研究方法采用了基于布鲁氏菌的IS711序列和单增李斯特菌的毒力因子HlyA序列设计的引物，以此构建双重PCR检测体系。首先，研究人员通过实验验证了该方法的特异性，确保了只有目标菌种的DNA才会被扩增，不会误判其他微生物。接着，他们评估了该方法的敏感性，结果显示单个PCR检测中，布鲁氏菌和单增李斯特菌的最低检测限分别为0.282 pg/μL和3.33 pg/μL；在双重PCR检测中，这两个值分别提高到2.82 pg/μL和33.3 pg/μL。这表明双重PCR检测仍然具有很高的灵敏度。 为了模拟实际样本的检测条件，研究者制备了污染模型乳，并通过直接检测、增菌后检测以及细菌富集后的增菌检测，进一步确定了最低检测限。结果显示，在未经增菌的污染模型乳中，布鲁氏菌和单增李斯特菌的最低检测限分别为10^4 CFU/mL和8×10^4 CFU/mL。经过24小时的增菌，可以检测到低至10 CFU/mL的布鲁氏菌，而12小时增菌后能检测到8 CFU/mL的单增李斯特菌。采用离心法富集细菌后，检测灵敏度显著提高，布鲁氏菌和单增李斯特菌的最低检测限分别降低到10 CFU/40mL和8 CFU/40mL。 这项研究的结论是，建立的双重PCR检测方法具有高度特异性和重复性，能够有效检测牛奶中的布鲁氏菌和单增李斯特菌，同时也适用于其他产品中这两种病原菌的检测。这种方法的建立对于食品安全监控和疾病预防具有重要意义，特别是在乳制品行业，能更早地发现并控制这两种病原菌的潜在风险。