"中国明对虾CrusFc-2基因的重组表达及抗血清制备 (2011年)"
这篇论文详细介绍了对中国明对虾CrusFc-2基因的重组表达过程及其抗血清的制备方法。CrusFc-2基因编码的蛋白质在对虾的免疫系统中可能扮演重要角色,因此研究其表达和功能对于理解对虾的免疫机制具有重要意义。
首先,研究人员使用聚合酶链反应(PCR)技术从中国明对虾的基因组中克隆了CrusFc-2基因的成熟肽编码序列。PCR是一种在体外扩增特定DNA片段的分子生物学技术,它依赖于设计的引物与目标DNA序列的互补配对,通过多轮循环反应来大量复制目标序列。
接下来,他们利用DNA重组技术将这个克隆的序列插入到一个原核表达载体pET-DsbA中。pET系列载体是常见的表达系统,尤其适用于在大肠杆菌(E.coli)中表达外源基因。在这个载体中,DsbA是一个促进蛋白质正确折叠的伴侣蛋白,它的存在有助于提高重组蛋白的活性和稳定性。
将这个改造后的载体转化到E.coli BL21(DE3)菌株中,通过添加诱导剂IPTG(异丙基-β-D硫代半乳糖苷)来启动CrusFc-2基因的表达。IPTG能激活T7噬菌体的lacUV5启动子,使得宿主细胞内的T7 RNA聚合酶开始转录插入的基因,从而产生重组蛋白。
表达的重组蛋白经过纯化处理,用于免疫新西兰大白兔以制备抗血清。抗血清是指含有特异性抗体的动物血浆,这种抗体能识别和结合特定的抗原,如这里的CrusFc-2蛋白。纯化的重组蛋白作为抗原刺激兔的免疫系统,使其产生针对CrusFc-2蛋白的抗体。
通过Western Blot分析,研究人员验证了CrusFc-2蛋白在对虾血细胞中的存在。Western Blot是一种基于蛋白质电泳和抗体结合的检测方法,可以用来识别和定量特定蛋白质。在这个实验中,他们发现抗血清能特异性地与对虾血细胞中的CrusFc-2蛋白结合,这表明该蛋白在对虾的血细胞中具有生物活性。
这项工作成功实现了CrusFc-2基因在大肠杆菌中的重组表达,并制备了相应的抗血清,为后续的生物学功能研究提供了重要的工具。这些研究成果对于了解对虾的免疫防御机制,以及可能应用于疾病预防和控制等领域具有潜在价值。