构建与表达SDF-1/54R CXCR4拮抗剂的可溶性表达载体

本文主要探讨了曹园芝、杨飞华和马伟峰等人在生物医学领域的研究工作，他们构建了针对趋化因子受体CXCR4的特异性拮抗剂SDF-1/54R的原核可溶性表达载体。这项研究的目的在于通过将SDF-1/54R基因插入到带有GST（Glutathione S-transferase，谷胱甘肽转移酶）标签的pET-41a+可溶性表达质粒中，实现SDF-1/54R蛋白的高效表达和纯化，为后续的体内生物活性研究提供实验材料和技术基础。 首先，研究团队利用前期构建的SDF-1/54R/pET-30a+质粒作为模板，通过PCR技术扩增SDF-1/54R基因。扩增产物经过KpnI和EcoRI酶切后，成功地连接到pET-41a+质粒上，形成了重组质粒SDF-1/54R/pET-41a+。这个过程确保了目标基因的准确整合，并且引入了 GST 标签，有利于后续的纯化步骤。 接下来，他们将正确的重组质粒转化到大肠杆菌BL21（DE3）中，通过加入IPTG诱导表达。表达产物经过SDS-PAGE和Western blotting技术进行检测，结果显示SDF-1/54R蛋白在裂解菌液的上清中被成功表达，且在约30KD位置出现GST-SDF-1/54R的条带，这表明融合蛋白已形成。 为了去除GST标签并纯化SDF-1/54R蛋白，研究者使用了GST亲和层析系统。通过肠激酶进行酶切，将GST标签切除，得到的目标蛋白SDF-1/54R的纯度得到了显著提高，最终产品在约6KD的大小范围内，证明了纯化的有效性。 这项研究不仅构建了一种有效的SDF-1/54R表达系统，还为 CXCR4 拮抗剂的研发提供了关键技术，对于理解CXCR4受体功能及其在疾病治疗中的作用具有重要意义。此外，该成果也体现了作者在生物化学、分子生物学和蛋白质工程领域的专业知识与技能，对于相关领域的研究者来说，这篇首发论文提供了一个有价值的实验模型和方法参考。