小鼠TLR2胞外区克隆表达与单抗制备：实验进展与应用

本研究论文深入探讨了小鼠TLR2胞外区（TLR2-ECD）的克隆表达以及单克隆抗体的制备过程，由林珩、孙巍、花芳和胡卓伟等人合作完成，发表于中国科技论文在线。研究的主要目的是在动物水平上进一步探索和理解TLR2受体的功能，这是免疫药理学领域的重要课题，特别是与肿瘤转移相关的研究。 首先，作者利用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术扩增了小鼠TLR2胞外区的基因，这一过程是基因工程的核心步骤，确保了目标蛋白的准确复制。接着，他们将扩增得到的基因片段插入到原核表达载体pGEX-4T-1中，构建了重组表达质粒pGEX-TLR2-ECD，以便于在大肠杆菌BL-21中高效表达。通过诱导剂IPTG的调控，实现了融合蛋白TLR2-ECD-GST的大规模生产，其分子量约为90千Dalton（kDa）。 为了获得特异性的抗TLR2-ECD的单克隆抗体，研究人员选择将纯化的重组蛋白TLR2-ECD-GST免疫Balb/c小鼠。随后，他们运用杂交瘤技术，即通过细胞融合的方式将小鼠B淋巴细胞与骨髓瘤细胞结合，形成既能无限增殖又能分泌特定抗体的杂交瘤细胞。经过一系列的筛选步骤，包括间接酶联免疫吸附试验（ELISA）的阴性和阳性筛选，最终得到了能够分泌特异性抗TLR2-ECD抗体的杂交瘤细胞株。 这项研究的结果表明，成功地制备出了能分泌小鼠TLR2-ECD单克隆抗体的细胞株。这一成果不仅提供了研究TLR2受体功能的新工具，而且验证了单克隆抗体作为标记物或治疗靶点的潜力，对于理解TLR2在肿瘤转移中的作用具有重要意义。此外，论文还强调了所制备的单克隆抗体具有高度的特异性，只识别TLR2胞外区，排除了与融合标签蛋白GST的交叉反应，保证了实验结果的准确性。 关键词：肿瘤转移、TLR2受体、单克隆抗体，以及中图分类号R392，揭示了研究的学术定位和重要性。这项研究在免疫学和生物技术领域具有较高的学术价值，为后续的TLR2相关研究奠定了坚实的基础。