草鱼TLR3基因BAC克隆筛选与表达研究
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更新于2024-08-12
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"草鱼BAC文库中TLR3基因的筛选及表达特征的研究 (2010年)"
本文是关于草鱼(Cyprinus carpio)BAC(细菌人工染色体)文库中TLR3(Toll-like receptor 3)基因的筛选和表达特征的研究。TLR3是一种模式识别受体,属于免疫系统的关键组成部分,能够识别病毒双链RNA,从而启动先天免疫反应。
研究目的旨在从草鱼的BAC文库中找到TLR3基因的阳性克隆,并研究此基因在草鱼体内的表达模式,为后续的免疫机制研究提供基础。研究人员采用放射性同位素P32标记的探针,对超过53,216个BAC克隆的DNA尼龙膜进行了杂交筛选,这是一种常见的基因定位和克隆鉴定技术。
通过半定量RT-PCR(逆转录聚合酶链反应),研究者分析了TLR3在草鱼九种不同组织(鳃、心脏、肠、肝胰脏、肌肉、皮肤、脾脏、头肾和中肾)的表达水平,发现该基因在所有检测的组织中都有表达,尤其在脾脏和皮肤中表达较高,这表明TLR3可能在这些组织的免疫防御中起着重要作用。
进一步,利用实时荧光定量RT-PCR技术,研究人员研究了草鱼在感染呼肠孤病毒(Enterovirus)后的TLR3表达动态。结果显示,在感染后24小时,草鱼的肝胰脏中TLR3的相对表达量显著增加,这可能是草鱼机体对病毒入侵的即时响应。然而,48小时后,其表达量恢复到正常水平,这可能反映了草鱼免疫系统的动态平衡过程,即初期的应急反应过后,逐渐恢复正常状态以避免过度免疫反应。
这项研究成功地筛选到了草鱼的TLR3 BAC克隆,并揭示了TLR3在草鱼不同组织中的广泛表达以及在抗病毒反应中的关键作用。这些发现对于理解鱼类免疫系统,尤其是对病毒感染的响应机制,以及可能的疾病防控策略具有重要意义。
2020-02-19 上传
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