草鱼TLR3基因BAC克隆筛选与表达研究

"草鱼BAC文库中TLR3基因的筛选及表达特征的研究 (2010年)" 本文是关于草鱼（Cyprinus carpio）BAC（细菌人工染色体）文库中TLR3（Toll-like receptor 3）基因的筛选和表达特征的研究。TLR3是一种模式识别受体，属于免疫系统的关键组成部分，能够识别病毒双链RNA，从而启动先天免疫反应。 研究目的旨在从草鱼的BAC文库中找到TLR3基因的阳性克隆，并研究此基因在草鱼体内的表达模式，为后续的免疫机制研究提供基础。研究人员采用放射性同位素P32标记的探针，对超过53,216个BAC克隆的DNA尼龙膜进行了杂交筛选，这是一种常见的基因定位和克隆鉴定技术。 通过半定量RT-PCR（逆转录聚合酶链反应），研究者分析了TLR3在草鱼九种不同组织（鳃、心脏、肠、肝胰脏、肌肉、皮肤、脾脏、头肾和中肾）的表达水平，发现该基因在所有检测的组织中都有表达，尤其在脾脏和皮肤中表达较高，这表明TLR3可能在这些组织的免疫防御中起着重要作用。 进一步，利用实时荧光定量RT-PCR技术，研究人员研究了草鱼在感染呼肠孤病毒（Enterovirus）后的TLR3表达动态。结果显示，在感染后24小时，草鱼的肝胰脏中TLR3的相对表达量显著增加，这可能是草鱼机体对病毒入侵的即时响应。然而，48小时后，其表达量恢复到正常水平，这可能反映了草鱼免疫系统的动态平衡过程，即初期的应急反应过后，逐渐恢复正常状态以避免过度免疫反应。 这项研究成功地筛选到了草鱼的TLR3 BAC克隆，并揭示了TLR3在草鱼不同组织中的广泛表达以及在抗病毒反应中的关键作用。这些发现对于理解鱼类免疫系统，尤其是对病毒感染的响应机制，以及可能的疾病防控策略具有重要意义。