伏马菌素B1噬菌体抗体库构建与高效筛选策略

伏马菌素B1噬菌体抗体库的构建与筛选是一项重要的研究，主要由王莹、顾舒舒等人进行。该研究的背景是针对伏马菌素B1（FB1）这一真菌毒素的检测和防控需求。FB1是一种常见的食品污染物，对人体健康有潜在危害，因此开发针对其的特异性抗体成为关键。 首先，研究人员从一种名为F3的FB1杂交瘤细胞株中分离出编码抗体变量区（VH）和连接区（VL）的基因片段。这些基因片段对于抗体的特异性和识别能力至关重要。通过重叠延伸PCR（SOE-PCR）技术，将这些基因片段拼接在一起，生成了单链抗体（ScFv）基因。ScFv基因因其高度的特异性和小型化特性，是构建噬菌体抗体库的理想候选分子。 接下来，研究人员将ScFv基因克隆到了pCANTAB5E噬菌体载体上，这是一种常用于基因表达和噬菌体展示的技术平台。通过转化感受态大肠杆菌TG1，使得ScFv基因得以高效地插入并表达在噬菌体的外壳蛋白上。然后，通过辅助噬菌体M13K07的超感染，大规模地构建了一个含有FB1毒素抗性噬菌体单链抗体的库，ScFv基因的插入效率达到了100%，表明了这个步骤的成功。 筛选过程采用免疫亲和筛选和富集技术，确保了库中的噬菌体只携带能与FB1特异性结合的ScFv。最终，利用酶联免疫吸附测定（ELISA）方法，研究人员从库中成功筛选出了5株能够分泌带有阳性反应的噬菌体抗体的细菌，这标志着FB1噬菌体抗体库的构建工作已经取得了显著成果。 整个研究不仅提供了对抗FB1毒素的新策略，也为噬菌体展示技术在毒素检测领域的应用提供了新的思路。这项首发论文展示了高校博士学科点专项科研基金对这类基础研究的支持，同时也揭示了伏马菌素B1噬菌体抗体库在食品安全监控和农业生物技术方面的潜在价值。未来，这些抗体有望被应用于食品质量控制、饲料安全以及可能的临床诊断等领域。