大鼠心脏周细胞原代培养技术及鉴定研究

"大鼠心脏周细胞的提取、培养及鉴定" 本文主要介绍了卢彦昭、史立业和齐国先等人在研究大鼠心脏周细胞时采用的一种简便、高效且稳定的原代提取和培养方法。心脏周细胞是心脏血管系统中的重要组成部分，对心血管疾病的发病机制有深远影响。这项研究对于理解周细胞在冠心病等疾病中的作用，以及探索新的治疗策略具有重要意义。 实验过程涉及以下几个关键步骤： 1. **细胞提取**：使用健康雄性SD大鼠作为实验材料，通过酶消化法，利用特定的酶混合物如胶原酶或胰蛋白酶来分解细胞间的连接，使细胞从组织中分离出来。接着，通过过滤和离心进一步纯化细胞。 2. **细胞培养**：将提取的细胞接种于适当的细胞培养皿中，通常使用含有血清的培养基，如DMEM/F12或MEM，以支持细胞的生长和增殖。在倒置相差显微镜下，细胞在接种后24小时内呈现梭型或星芒状，经过3-5天的培养，细胞可达到高融合状态。 3. **细胞形态观察**：使用苏木素-伊红（HE）染色，可以观察到细胞形态，周细胞呈现不规则多边形，细胞质丰富，嗜酸性，细胞核位于中心，形状多样，有时可见双核，细胞排列可能会出现紊乱和交叉重叠生长，没有接触抑制现象，这是原代细胞的典型特征。 4. **细胞鉴定**：通过免疫荧光技术，鉴定细胞表面标志物，如PDGFR-β（血小板衍生生长因子受体β）、NG2（神经胶质瘤蛋白2）、CD146（细胞粘附分子-146）和COL4A5（胶原IVα5链）。结果显示，这些细胞对PDGFR-β、NG2、CD146呈阳性反应，而对CD31（内皮细胞标记物）呈阴性反应，这证实了所培养的细胞为周细胞。 5. **Western Blot定量分析**：进一步通过Western Blot技术验证了细胞标志物CD146、PDGFR-β和NG2的表达，而CD31未被检测到，这进一步确认了细胞的身份。 该研究成功地建立了心脏周细胞的原代提取和培养体系，为后续的心脏周细胞功能研究、病理生理机制探索以及可能的治疗干预提供了实验基础。这个方法的简便性和稳定性对于未来在心脏病学领域的工作具有很大的实用价值。