家蚕触角结合蛋白ABP的原核表达与纯化研究

"家蚕触角结合蛋白（ABP）的表达纯化研究" 本文主要探讨的是家蚕触角结合蛋白（Antennal Binding Protein, ABP）的表达和纯化，这是一种属于气味结合蛋白（Odorant Binding Proteins, OBPs）的亚类。在昆虫的嗅觉系统中，ABP扮演着关键角色，它能够溶解并传输脂溶性的气味化合物，帮助这些化合物穿越亲水性环境，最终抵达嗅觉神经树突末端。这一过程对于昆虫感知周围环境中的气味至关重要。 研究人员通过生物信息学手段分析了ABP的结构，发现它包含一个21个氨基酸的信号肽以及6个α螺旋结构。在实验设计时，为了便于后续的表达和纯化，他们选择去除信号肽部分。接着，从家蚕蚕蛹的头部组织中提取总RNA，采用逆转录PCR技术扩增得到不含信号肽的ABP基因序列。然后，利用基因克隆技术，将这个基因插入到原核表达载体pET-32a的特定酶切位点，构建了重组载体pET-32a-ABP（无SP）。这个重组载体在大肠杆菌E.coli BL21（DE3）中诱导表达，并通过SDS-PAGE、Western blot及质谱鉴定，验证了表达的成功。 纯化是研究的关键步骤，文中提到表达的蛋白质经过Ni-NTA柱层析和凝胶过滤层析等方法进行纯化，得到了高纯度的重组ABP蛋白。此外，研究人员还尝试了悬滴法来探索ABP的结晶条件，这为进一步研究其结构和功能奠定了基础。这项工作不仅对理解家蚕触角结合蛋白的生理作用有重要意义，也为其他膜蛋白的表达提供了一种可能的方法。 关键词涉及了分子生物学、家蚕、膜蛋白、触角结合蛋白、原核表达和纯化等多个领域，表明该研究综合运用了多种生物学技术，旨在揭示家蚕嗅觉系统中的基本机制，并为相关领域的研究提供了有价值的参考。