家蚕杆状病毒表达系统中rhTNFR-Fc融合蛋白的表达与纯化

"重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白在家蚕杆状病毒表达系统中的表达及纯化" 本文详细介绍了如何在家蚕杆状病毒表达系统中成功表达和纯化重组人肿瘤坏死因子受体-Fc融合蛋白(rhTNFR-Fc)。rhTNFR-Fc是一种重要的生物药物，常用于治疗类风湿性关节炎和强直性脊柱炎，它能够特异性地结合并抑制体内的肿瘤坏死因子(TNFα)，从而缓解由过度免疫反应引起的关节炎症。 研究过程中，首先采用聚合酶链式反应(PCR)从pUC57-(rhTNFR-Fc)重组质粒中扩增目标基因rhTNFR-Fc。接着，将扩增得到的基因插入转移载体pFastBac1，形成pFastBac1-(rhTNFR-Fc)，并将此重组载体转化到DH10Bac感受态细胞中。通过转座元件，成功构建了含有rhTNFR-Fc基因的重组Bacmid，即Bacmid-(rhTNFR-Fc)。 接下来，将Bacmid-(rhTNFR-Fc)转染家蚕BmN细胞，使得重组基因在细胞内组装成重组杆状病毒vBm-(rhTNFR-Fc)。病毒在细胞中复制并扩增，然后使用第四代vBm-(rhTNFR-Fc)感染家蚕五龄幼虫和蚕蛹。实验结果显示，重组蛋白在家蚕五龄幼虫的血淋巴和蚕蛹中均有表达，这通过Western Blotting技术得到了验证。 为了纯化表达的rhTNFR-Fc融合蛋白，研究人员从发病蚕的血淋巴中提取原料，采用分子筛和亲和层析柱进行分离纯化。这种方法有效地纯化出了目标融合蛋白，证明在家蚕杆状病毒表达系统中可以高效表达和纯化rhTNFR-Fc。 这项研究不仅为rhTNFR-Fc蛋白的生产提供了一种新的生物制造途径，而且为在同种表达系统中表达其他Fc融合蛋白提供了参考。其成果对于优化生物药物的生产流程，降低生产成本，以及推动生物技术在医药领域的应用具有重要意义。此外，家蚕杆状病毒表达系统的应用也展示了其在生物制药中的潜力和灵活性，为未来研发更多生物治疗剂开辟了新的道路。