建立稳定表达甜味受体T1R2/T1R3的HEK293细胞系

"稳定表达甜味受体蛋白T1R2/T1R3的HEK293细胞系的建立 (2013年)" 这篇论文是关于工程技术领域的一个研究，主要涉及生物化学和分子生物学的内容。研究者们旨在构建一个稳定表达甜味受体蛋白T1R2和T1R3的HEK293细胞系，这在甜味识别机制的研究中具有重要意义。HEK293细胞是一种广泛用于生物医学研究的人类胚胎肾细胞，因其易于培养和转染而被广泛应用。 首先，研究者从小鼠舌组织中提取总mRNA，这是基因表达的基础材料。然后，他们利用逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）技术，用自设计的引物扩增出Gα15、T1R2和T1R3的目的基因片段。Gα15是一种G蛋白亚单位，与受体信号传导有关；T1R2和T1R3是甜味受体，它们的复合体能感知甜味分子。 接着，这些扩增的基因片段被分别插入不同的表达载体中，包括pEGFP-C1-Gα15、pDsRed1-N1-T1R2和pcDNATM6.2/N-YFP-DEST-T1R3。这些载体含有不同的标记基因，如绿色荧光蛋白（GFP）、红色荧光蛋白（DsRed）和黄色荧光蛋白（YFP），以便于检测基因的表达和定位。 通过脂质体介导的转染方法，这些重组质粒被导入HEK293细胞中。经过选择性压力（抗性筛选），研究人员能够得到稳定表达目的基因的细胞克隆。极限稀释法进一步确保了单一细胞克隆的纯度，从而保证了细胞系的均一性。 最后，通过RT-PCR、荧光显微镜和Western blot等实验方法，研究者在基因和蛋白质水平上对建立的细胞系进行了验证。RT-PCR用于确认基因的转录，荧光显微镜可以观察到细胞中的荧光表达，而Western blot则用于检测蛋白质的表达水平。所有这些结果都证实了Gα15、T1R2和T1R3基因在HEK293细胞中成功表达且稳定。 这个细胞系的建立为后续研究提供了重要的工具，特别是在细胞水平上探究甜味识别的机制，如甜味分子如何激活甜味受体，以及这些过程的动力学特性。此外，这个细胞模型也可用于药物筛选和食品科学中的甜味剂评估，对于理解和开发新型甜味剂具有实际应用价值。