家蚕SP2基因克隆与功能研究：抑制细胞凋亡的作用

"家蚕贮藏蛋白基因sp2的克隆表达及其功能研究" 本文详细探讨了家蚕贮藏蛋白2（SP2）基因的克隆、表达以及其生物学功能。家蚕贮藏蛋白SP2在生物体内的角色不仅限于作为生长发育过程中的主要能源物质，还展示出对细胞凋亡的抑制活性。研究团队首先从家蚕蛹的cDNA文库中成功克隆了SP2基因，该基因的GenBank登录号为DQ443358。随后，他们将SP2基因插入到pET-28a(+)表达载体中，构建了重组质粒，并将其转化到大肠杆菌BL21(DE3)中，以表达融合蛋白。 通过镍柱亲和层析纯化得到的融合蛋白，研究人员制备了多克隆抗体，用于后续的实验。通过Western blot技术，分析了SP2在家蚕不同发育阶段及五龄幼虫各组织中的表达模式。结果显示，SP2在蛹期和五龄幼虫的血淋巴中表达量较高，而在卵和蛾期则未检测到显著的SP2蛋白。 进一步，研究者使用Bac-to-Bac系统构建了含有sp2基因的重组杆状病毒表达载体，使得SP2蛋白在家蚕BmN细胞中大量表达，并带有6×His标签的融合蛋白。纯化的SP2蛋白被用于功能性研究，其中涉及到星孢菌素诱导的人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）凋亡模型。 实验结果显示，SP2能够显著提高HUVEC的活力，表明它可能有保护细胞免受凋亡的作用。通过MTT检测、ELISA法检测DNA片段化程度以及流式细胞仪分析，均证实SP2对星孢菌素诱导的HUVEC凋亡具有抑制效果。这些发现揭示了SP2在细胞保护和凋亡调控方面的重要功能，为理解家蚕生物学及可能的医学应用提供了新的视角。 关键词：分子生物学；家蚕贮藏蛋白2（SP2）；HUVEC；星孢菌素；细胞凋亡 这篇论文是首发论文，得到了国家高技术研究发展计划"863"项目（2011AA100603）和浙江省自然科学基金项目（Y3090339）的支持。作者团队包括王美惠、王军军、李佳、于威和张耀洲，通讯联系人为于威副教授，专注于基因表达与调控领域。