构建抗鹅细小病毒噬菌体单链抗体库的研究

"该研究由家畜疫病病原生物学国家重点实验室开放基金资助，旨在构建抗鹅细小病毒的噬菌体单链抗体库，并通过噬菌体展示技术筛选高特异性、高亲和力的单链抗体scFv。研究者首先免疫4日龄雏鹅，提取脾细胞RNA，然后通过反转录获取cDNA。利用特异性引物扩增VH和VL基因，将它们与Linker拼接，并插入噬粒载体pCANTAB5E，构建出噬菌体单链抗体库。经过三轮亲和富集筛选，得到的scFv基因与人类免疫球蛋白胚系基因有较高的同源性，库容约为1.2×106。" 这篇研究论文首次报道了抗鹅细小病毒噬菌体单链抗体文库的构建过程，这是抗体工程和动物传染病研究领域的一个重要进展。鹅细小病毒（GPV）是一种对家禽健康构成威胁的病毒，本研究的目的是开发出对抗该病毒的有效工具。 噬菌体展示技术是一种在噬菌体表面表达蛋白质或多肽的技术，它使得研究人员能够筛选出具有特定靶向能力的抗体。在这项研究中，研究人员首先通过免疫4日龄的雏鹅来刺激免疫反应，18天后提取脾细胞RNA，这是为了获取编码抗GPV抗体的基因。然后，通过反转录将RNA转化为cDNA，确保了抗体基因的保存。 接下来，使用特异性引物针对鹅源的重链可变区（VH）和轻链可变区（VL）进行PCR扩增，这确保了只选择与GPV相关的抗体基因。扩增后的VH和VL基因与柔性多肽Linker((Gly4Ser)3)连接，形成VL-Linker-VH片段，这种设计有助于保持抗体的结构和功能。这些片段随后通过酶切插入噬粒载体pCANTAB5E，并转化到宿主菌TG1中，通过辅助噬菌体M13K07的帮助构建噬菌体单链抗体库。 经过GPV包被的抗原进行三轮亲和筛选，研究人员检测到重组scFv的特异性抗原结合活性，表明筛选过程有效。IgBlast序列分析揭示了scFv基因与人免疫球蛋白胚系基因的高度同源性，这表明这些抗体可能具有广泛的适用性和跨物种反应性。 成功构建的抗鹅细小病毒噬菌体单链抗体库，其插入率高达90%，库容量达到1.2×106，为后续的抗体功能研究和鹅细小病毒感染的检测提供了宝贵的资源。这个库不仅可以用于开发新的诊断试剂，还可能成为治疗策略的基础，比如开发基于抗体的治疗方法来对抗GPV感染。 这项研究展示了噬菌体展示技术在动物疾病研究中的潜力，特别是在对抗鹅细小病毒方面，为今后的疫苗开发、早期检测和疾病控制提供了理论和技术支持。