工程12：电针刺激对脑缺血再灌注及Mecp2基因敲除大鼠Rett综合征的研究

工程12（2022）83研究医学工程-文章电针刺激对脑缺血再灌注Mecp2基因敲除大鼠Rett综合征Yanhong Suna，b，#，Zhifang Chenc，#，Yi Xub，d，#，Yuefang Zhangc，Zhilei Gee，Chenglie Linf，YiZhouf，Fangfei Zhaob，Meiling Yanb，Xinyi Liub，Ying Zhua，b，Jimin Gaod，Hongyi Lig，LihuaWanga，b，Jun Hua，b，邱子龙，范春海，范春海a生物成像中心，上海同步辐射装置，中国科学院上海高等研究院张江实验室，上海201210，中国b物理生物学部，中国科学院上海应用物理研究所，中国科学院界面物理与技术重点实验室，上海201800，中国c中国科学院上海生命科学研究院神经科学研究所，上海200031，中国d温州医科大学检验医学与生命科学学院，温州325035，中国e上海交通大学化学化工学院，上海200240，中国f成都中医药大学基础医学院，成都611137，中国g中国北京100730北京医院心内科阿提奇莱因福奥文章历史记录：收到2020年2020年4月29日修订2020年6月8日接受2022年3月22日在线提供保留字：神经发育障碍电针刺激Rett综合征运动功能社会交往A B S T R A C T雷特综合征是一种进行性神经发育障碍，缺乏有效的治疗。虽然脑深部电刺激可以减轻Rett模型小鼠的一些症状，但这种干预性操作需要精心的外科手术。在此，我们报告了电针刺激（EAS）可以改善Mecp 2基因敲除大鼠模型的Rett综合征的症状从远程穴位百会（GV 20），涌泉（KI 1），神门（HT 7）。我们发现EAS不仅延长了Rett大鼠的生存时间，而且改善了其行为能力，包括运动，运动协调和社会交往。在野生型和Rett模型大鼠的中脑、纹状体和大脑皮质的黑质中观察到神经激活，这反映在c-Fos蛋白的表达增加。因此，EAS为治疗神经发育性疾病提供了一种潜在的有前途的治疗工具。©2022 The Bottoms.由爱思唯尔有限公司代表中国工程院和高等教育出版社有限公司出版。这是一篇CC BY-NC-ND许可下的开放获取文章（http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/）中找到。1. 介绍Rett综合征是自闭症谱系障碍的一种亚型，是一种进行性神经发育障碍，主要发生于女童，发病率为1/10000大多数Rett综合征患儿的寿命较短，并伴有一系列症状，如语言退化、生长迟缓、自主神经功能障碍、共济失调、严重的社交技能受损和刻板的手部运动[1]。目前，由于缺乏有效的治疗方法来改善患者的认知和行为，Rett综合征的治疗是一个巨大的挑战。服用脑源性神经营养因子（BDNF）或胰岛素样生长因子1（IGF-1）可以缓解Rett综合征的一些症状;然而，对于这些并发症，它仍然是一个问题*通讯作者。电子邮件地址：zqiu@ion.ac.cn（Z. Qiu），fanchunhai@sjtu.edu.cn（C.Fan）。#这些作者对这项工作做出了同样的有效地穿过据报道，物理干预，如穹窿深部脑刺激（DBS）[5]和深部脑磁刺激（DMS）[6]，可以缓解Rett模型小鼠的症状。DMS已被证明可促进海马神经发生和突触可塑性，并增强海马中的神经元活性;此外，DMS已被证明可缓解焦虑相关行为，并显著延长Rett小鼠模型中的寿命[6]。穹窿DBS已被证明可以挽救背景恐惧记忆和空间记忆，恢复Rett模型小鼠的体内海马神经发生。然而，DBS是一种需要外科手术和精确定位的干预性操作此外，DBS导致Rett模型小鼠的社会行为、运动、运动协调和生长水平的有限改善[5]。针灸是一种传统的中国治疗干预，通过对特定穴位的编程远端刺激来治疗疾病。针灸已经被广泛接受，https://doi.org/10.1016/j.eng.2020.06.0322095-8099/©2022 THE COMEORS.由爱思唯尔有限公司代表中国工程院和高等教育出版社有限公司出版。这是一篇基于CC BY-NC-ND许可证的开放获取文章（http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/）。可在ScienceDirect上获得目录列表工程杂志首页：www.elsevier.com/locate/engY. 太阳，Z.Chen，Y.Xu等人工程12（2022）8384全世界的止痛药此外，针灸已被证明在治疗其他疾病，包括运动障碍，压力性尿失禁，和免疫炎症条件[7电针刺激（EAS）是一种利用电针装置输出脉冲电流，作用于中医经络和穴位来加强刺激的技术。EAS通过受体或神经递质介导的免疫应答表现出优异的镇痛和抗炎作用[11，12]。 EAS已被证明可以改善记忆和退行性疾病中的运动控制行为能力（例如，阿尔茨海默最近，还报道EAS通过上调与哺乳动物社会行为相关的催产素（OXT）和精氨酸加压素（AVP）水平，改善自闭症儿童和大鼠的社会互动行为[16，17]。然而，EAS是否可以用于治疗其他神经发育-精神疾病仍然很少探索。本研究以EAS处理Rett模型大鼠，观察应激状态下大鼠不同脑区的社会性激素、功能蛋白表达、神经元活性及个体行为，探讨EAS激活脑区与应激相关行为改变的关系，以及EAS对Rett模型大鼠的影响2. 实验过程根据先前的研究参考文献制备4- 5周龄的雄性Mecp 2-/y和野生型（WT）Sprague Dawley大鼠[18]第10段。雄性大鼠Rett综合征的典型症状出现相对较早，如存活时间短、运动能力下降和社会能力下降。因此，在本研究中，雄性Mecp 2-/y大鼠用作Rett模型，其同窝雄性WT大鼠用作对照。将大鼠轻轻固定在大鼠固定器中（附录A中的图S1（a）），将其脚伸直并用医用胶带固定EAS采用远-密波刺激，脉冲宽度为0.2 ms，频率为2 Hz：10 Hz（远波：密波，图11），持续20 min。附录A中的S1（b））使用电刺激器（HwatoSDZ-V神经和肌肉刺激器，中国苏州医疗器械厂）。在HT 7、KI 1和GV 20穴位按参考文献方法插入长13 mm、直径0.25 mm的针灸针[19、20]。电针刺激双侧HTMecp 2-/y大鼠和WT大鼠每周电针6次，连续4周。对照组中的WT和Mecp 2-/y大鼠也被轻微固定在没有EAS的大鼠固定器根据先前的程序，在恐惧条件反射[5，23]前一周进行了旷场、加速旋转棒[19，21]和三室互动[22]在每次测试之前，将大鼠运送到行为室以适应至少30分钟。实验详情见附录A的补充信息在检测行为数据后，使用冷冻切片机（Leica CM 1950，LeicaBiosystems，Germany）将大鼠脑解剖成预切片40μm脑切片[24]。将脑切片与溶于5%牛血清白蛋白（BSA）的0.25% Triton X-100在室温下孵育1小时[5]。接下来，将切片与抗c-Fos多克隆（ab190289，兔，1：5000; Abcam，UK）或双皮质素（DCX; 4604S，兔多克隆，1：400; Cell Signaling Technology，USA）和5-溴-20-脱氧尿苷（BrdU;小鼠单克隆，5292 S，1：140; Cell SignalingTechnology）在4 ℃下共孵育24小时。这些章节随后与第二抗体（ab 150077和ab 150116，Alexa Fluor 488和594，1：500; Abcam）共孵育2小时，细胞核用40，6-二脒基-2-苯基吲哚（DAPI; 1：1000，Beyotime Biotechnology，China）复染15分钟。 用共 聚焦显 微镜（ Leica Microsystems ） 获得图 像，并 用ImageJ软件分析。3. 结果和讨论我们首先研究了EAS是否可以提高Rett大鼠的寿命，因为寿命短是大多数Rett儿童的特征[1]。中枢神经系统神经元中甲基CpG结合蛋白2（MeCP2）的缺乏可导致啮齿动物中的Rett样表型[1，25]。因此，使用具有Mecp 2基因突变（Mecp 2-/y）的4- 5周龄大鼠在神门（HT7）、涌泉（KI 1）和百会穴（GV 20）处进行EAS（Mecp 2-/y +EAS）治疗，每天20分钟，持续四周（图1A和1B）。1（a）和（b）以及图S1（b））。根据先前的方法选择穴位位置[19，20]。此外，将4-令人惊讶的是，与Mecp 2-/y大鼠（中位寿命：71天）相比，EAS处理的Mecp 2-/y大鼠的寿命（中位寿命：102天）延长了近44%（图1（c））。也就是说，EAS大大提高了Mecp 2-/y大鼠的中位生存期至102天; EAS治疗的Mecp 2-/y大鼠的最长生存期为240天。生长迟缓是Mecp 2-/y病理学的特征性特征，其导致较低的体重和脑重量。 我们发现，穴位EAS还增加了Mecp 2-/y大鼠的体重和脑重量（图1A和1B）。1（d）和（e））。30日龄时，WT大鼠（106.25 ± 17.65）g与Mecp 2-/y大鼠（105.33± 19.50）g）。在60日龄时，Mecp 2-/y大鼠体重（205.7 ± 78.6）g较WT大鼠（309.6 ± 39.6）g增长缓慢，EAS治疗组Mecp 2-/y大鼠体重（276.3 ± 78.6）g明显高于Mecp 2-/y大鼠。120日龄时，Mecp 2-/y 组大鼠的体重（（225.0 ±42.5）g）不到WT组大鼠（（480.3 ± 46.7）g）的一半，WT组与Mecp 2-/y组之间存在显著差异（p0.01）。但EAS处理的Mecp 2-/y大鼠的体重比Mecp 2-/y大鼠增加近60%，表明EAS改善了Mecp 2-/y大鼠的总体生长。接下来，我们通过旷场试验检测EAS对Mecp 2-/y大鼠自发活动的影响，并通过旋转棒试验检测EAS对Mecp 2-/y大鼠运动协调能力的影响。对Mecp 2-/y和WT大鼠进行10min旷场实验，用红外摄像机记录运动轨迹。具有焦虑样行为的大鼠花费更少的时间探索室的中心，并且旅行距离更短[26]。如图图2（a）-（d）中，Mecp 2-/y大鼠在测试中的行进距离（（1363.0 ± 447.6）cm）比WT大鼠（（5482.0 ± 214.1）cm）短; 2（a）和（b））。同时，Mecp 2-/y大鼠在中心停留的时间较短（（5.78 ± 2.27）s），中心/总比率较小（图1A和1B）。（2）（c）和（d））较WT大鼠（（29.32 ±5.99）s）明显降低，提示Mecp 2-/y大鼠的运动能力和焦虑样行为明显降低。在旷场实验中，EAS组Mecp2-/y大鼠的运动距离（2989.0 ±668.1）cm，在中枢停留时间（17.15 ± 13.04）s。因此，EAS改善了Mecp 2-/y大鼠的运动活动，如其增加总行进距离的效果所示，特别是增加了在中心区域花费的距离和时间我们进一步测试了EAS对运动协调性的影响能力将Mecp 2-/y和WT大鼠置于加速旋转杆装置的旋转圆柱体上（5-Y. 太阳，Z.Chen，Y.Xu等人工程12（2022）8385···Fig. 1. EAS可延长Mecp 2-/y大鼠的寿命和体重。(a)实验设计和程序;（b）穴位的选择和位置;（c）Mecp 2-/y大鼠的寿命（n= 26;中位生存时间：71天）和接受EAS的Mecp 2-/y大鼠的中位生存时间（n= 22;中位生存时间：102天）（长秩检验，*p 0.05，**p 0.01）;（d）脑重（WT，n= 10; WT + EAS，n= 10;Mecp2-/y，n= 9;Mecp 2-/y+ EAS，n= 10），单因素方差分析（ANOVA; Bonferroni[27]第10段。如图2（e）所示，我们发现Mecp 2-/y大鼠从杆上跌落的潜伏期（（48.80 ± 11.89）s）减少到约为WT组的（149.7 ± 15.93）s的1/3。电针治疗组Mecp 2-/y大鼠潜伏期为（108.8 ± 19.54）s，是Mecp2-/y大鼠的2倍多。与WT组相比，EAS组大鼠潜伏期（238.7 ± 20.59）s明显延长。因此，EAS还改善了Mecp 2-/y大鼠的运动协调性。进行三室相互作用测试以确定EAS是否会改善Mecp 2-/y大鼠的社会行为[22，28]。在习惯化阶段，将WT或Mecp 2-/y大鼠置于三室装置的中间室中，并在左室和右室的角落配备两个带栅栏的笼子（图3（a））。允许小鼠自由探索10分钟。接着，一只奇怪的老鼠被放在右边的笼子里，而左边的笼子仍然是空的。记录在每个腔室中花费的时间和嗅闻频率 如图 3（b）~（d），WT大鼠在有陌生大鼠的室中的时间（366.6 ± 36.5）s，明显长于空室（47.4 ± 13.1）s。Mecp2-/y大鼠在中室（（384.2 ± 90.1）s）和空笼（（158.2 ± 52.6）s）中的时间较WT大鼠长，而与陌生大鼠在同一室中的时间（（160.9± 48.8）s）较WT大鼠短。Mecp 2-/y大鼠对陌生大鼠的嗅闻频率（3.8 ±2.4）远低于WT大鼠（29.6 ± 4.5，p 0.05）。EAS增加了Mecp 2-/y大鼠与陌生大鼠的相互作用时间（358.3 ± 78.0）s，p=0.07）和相互作用频率（10.0 ± 3.1，p= 0.08）这些结果表明，EAS可以改善Mecp 2-/y大鼠的社会能力。然而，EAS并没有促进Mecp 2-/y大鼠对社会新奇感的偏好（图1A和1B）。附录A中S2（b）和（c））。中枢神经系统在调节哺乳动物的社会行为中起着核心作用。例如AVP和OXT与社会行为密切相关，认知的患者与自闭症谱系障碍[24，29，30]。在先前的研究中，自闭症儿童的AVP和OXT水平较低[29，30]。其他研究表明，高血浆水平的OXT可导致焦虑和社交恐惧症[31]。在Mecp 2-/y大鼠中，我们发现Mecp 2-/y大鼠的OXT水平（（36.68± 4.15）pg mL-1）高于WT大鼠（（23.51 ± 3.82）pg mL-1;p 0.05）。EAS处理的Mecp 2-/y大鼠的血清OXT水平（（23.25 ± 3.56）pg mL-1;p0.05）明显低于Mecp 2-/y大鼠（图3（e））。 WT大鼠和Mecp 2-/y大鼠的AVP水平无明显差异，EAS可显著降低Mecp 2-/y大鼠WT大鼠而不是Mecp 2-/y大鼠（图1B）。 3（f））。为了研究EAS是否会改善记忆，我们将大鼠置于恐惧条件化范式中，以测试它们的恐惧记忆。EAS可轻度改善情境恐惧记忆（3 h：WT，21.41% ± 6.04%，WT + EAS，24.65% ± 5.94%，Mecp 2-/y ， 9.96% ± 4.92% ， Mecp 2-/y ， 9.96% ± 4.92% ， Mecp 2-/y ， 9.96% ±4.92%）。提示性恐惧记忆（3 h：WT，28.03% ± 7.45%; WT + EAS，33.08% ±7.24%;Mecp 2-/y + EAS，69.39% ± 11.17%），但在治疗组和未治疗组之间没有显著的统计学差异（图1A和1B）。 4（a）-（c））。我们进一步通过计数BrdU（标记新生细胞）和DCX（标记未成熟神经元）的阳性细胞来研究神经发生WT和WT + EAS或Mecp 2-/y和Mecp 2-/y+ EAS组之间BrdU +和DCX +细胞的数量没有明显变化（图1A和1B）。4（d）-（f）和附录A中的图S3），表明EAS不刺激Mecp 2-/y大鼠的海马神经发生。为了了解EAS如何改善社会行为和运动功能，我们检测了c-Fos蛋白的表达，以监测脑激活。c-Fos蛋白是神经元激活的敏感标志物，因为其表达通常响应于各种刺激，包括物理、化学和非致病性环境条件[32我们通过定量免疫荧光图像的c-Fos +细胞来评估脑激活（图1A和1B）。 5（a）和（b）和图。附 录 A 第 S4（a）- （ d ）段 ） 。Y. 太阳，Z.Chen，Y.Xu等人工程12（2022）8386图二. EAS改善Mecp 2-/y大鼠的运动和运动协调。(a)旷场试验中的代表性活动痕迹;（b）在旷场室中行进的总距离;（c）在旷场室中的中心与总距离比;（d）在旷场室中心花费的时间;（e）在旋转杆试验中跌倒的潜伏期。所有数据均以平均值± SEM表示WT，n= 10; WT + EAS，n= 10;Mecp 2-/y，n= 9;Mecp 2-/y+ EAS，n= 10;单因素ANOVA（Bonferroni图三. EAS改善Mecp 2-/y大鼠的社会交往行为。(a)三室装置试验示意图;（b）与空侧和陌生大鼠侧的相互作用时间（*p 0.05，**p 0.01;双尾t检验）;（c）三室试验不同室中的相互作用时间;（d）与陌生大鼠的嗅闻频率（Kruskal-Wallis检验，* p 0.05，** p 0.01）;（e）血清中的催产素水平;（f）血清中的（c、e、f）单因素ANOVA（Bonferroni所有数据均以平均值± SEM表示WT，n= 10; WT + EAS，n= 10;Mecp2-/y，n= 9;Mecp2-/y+ EAS，n= 10。Y. 太阳，Z.Chen，Y.Xu等人工程12（2022）8387图四、 EAS没有改善WT和Mecp 2-/y大鼠海马神经发生或改变线索恐惧。（a）EAS在不同时间对我们组的恐惧记忆的影响(b)3小时的背景恐惧记忆;（c）3小时的提示恐惧记忆;（d）低放大率（顶部;比例尺，100μ m）和高放大率（底部;比例尺，50μ m）的BrdU和DCX细胞的免疫荧光图像，显示了各组的BrdU+细胞（红色）、DCX+细胞（绿色）和合并（黄色）;（e）BrdU+细胞的数量;（f）DCX+细胞的数量。所有数据均以平均值± SEM表示（（单因素ANOVA（Bonferroni图五. EAS诱导的大脑皮层、海马、纹状体和黑质神经元活动。(a)大脑皮层、海马、纹状体和黑质中c-Fos的免疫荧光图像;（b）海马、纹状体、大脑皮层和黑质中c-Fos+细胞计数;（c）行为能力图。所有数据均以平均值± SEM表示n= 6，单因素ANOVA（BonferroniY. 太阳，Z.Chen，Y.Xu等人工程12（2022）8388比较WT和Mecp 2-/y大鼠（WT，209.7 ± 27.1;Mecp 2-/y，（154.7 ± 18.2），EAS-WT组和EAS-Mecp 2-/y组大鼠大脑皮质c-Fos+细胞数明显增加（WT + EAS，336.7 ± 78.9;Mecp 2-/y+ EAS，336.3 ±96.2）。在纹状体区，c-Fos+细胞的数量在EAS处理（WT + EAS，1070.0 ± 113.1;Mecp 2-/y+ EAS ， 444.80 ± 73.18 ） 和 EAS 未 处 理（WT，825.7 ± 51.2;Mecp 2-/y，273.20 ± 34.09）WT或Mecp 2-/y大鼠。中脑黑质也有类似的结果（WT，3551.0 ± 408.7; WT + EAS，5818 ±1044;Mecp 2-/y，839.5 ± 93.1;Mecp 2-/y+ EAS，2021.0 ± 443.8）。这些结果表明，EAS可以促进大脑皮层，纹状体和中脑黑质的然而，在海马区，EAS并没有导致c-Fos+细胞数量的增加（WT，177.0 ± 17.6; WT + EAS，244.7 ± 28.3;Mecp 2-/y，329.00 ± 78.85;Mecp 2-/y+ EAS，323.3 ± 10.9），提示海马区对EAS作为主要记忆功能区无反应，记忆改善不明显。Rett综合征是一种儿童进行性神经发育障碍，具有一系列症状，包括语言退化、生长迟缓、自主神经功能障碍、共济失调、严重社交技能障碍和刻板手部运动[1]。Mecp 2基因突变的小鼠和大鼠表现出Rett综合征的特征性症状[21，36在这项研究中，我们研究了EAS针刺对Mecp 2-/y大鼠的影响。我们发现，EAS在特定的穴位（HT7，KI 1和GV 20）显着改善运动，运动协调和Mecp 2-/y大鼠的社会行为（图1）。 5（c））。特别是，Mecp 2-/y大鼠的中位存活时间延长了44%。在大鼠和小鼠中缺乏MeCP2会导致寿命显著缩短[3，18]，这也在我们的实验中观察到Mecp 2-/y大鼠的中位生存期然而，EAS治疗后，EAS大鼠的中位生存时间大大提高至102天，最长生存时间为240天，表明EAS确实对Rett综合征大鼠模型产生了积极影响。EAS为Rett综合征的治疗提供了一种安全有效的方法EAS是一种电刺激，由将针插入远离中枢神经系统的穴位（即，脑和脊髓）。某些穴位的刺激可以有效地在体内长距离传输，并针对大脑的特定区域。与DBS不同，EAS是治疗脑部疾病的一种非常安全的方法，因为它不会直接损伤大脑。此外，EAS的远程操作极大地降低了来自不准确操作的错误概率，使得EAS的普及成为可能。最重要的是，它对行为能力和寿命的显著改善使EAS成为Rett综合征治疗的有效手段。我们发现EAS通过激活相关的大脑区域来改善运动功能和社会行为。c-Fos可用作神经元激活的敏感标志物，因为其表达一般响应于各种刺激，包括物理、化学和非致病性环境条件[32EAS增加了WT和Mecp 2-/y大鼠的大脑激活，包括中脑的大脑皮层、纹状体和黑质，这些区域与运动和社会行为有关然而，用单一的治疗策略来缓解Rett综合征的所有症状是一个巨大的挑战，我们发现EAS对恐惧记忆的影响并不明显。激活不良海马区c-Fos表达水平的低水平增加是EAS对智力改善不明显的原因。众所周知，海马是记忆的主要功能区，而纹状体和黑质是运动的主要功能区[24，35]。这很好地解释了为什么EAS得到改善而不是记忆力。在先前的研究中，通过在海马伞-穹窿中植入DBS电极对Rett小鼠进行的针对性DBS 根据DBS和EAS的特点，DBS和EAS联合应用可能对Rett综合征大鼠的社会、运动和记忆能力有改善作用。此外，在进一步的研究中，更多的穴位值得尝试，以显著改善Rett病理。4. 结论和展望总之，EAS在特定的穴位（HT 7，KI 1，和GV 20）显着改善运动，运动协调，和Mecp 2-/y大鼠的社会行为。EAS增加了大脑的激活，包括WT和Mecp 2-/y大鼠中脑的大脑皮层、纹状体和黑质-与运动和社会行为相关的EAS为Mecp 2-/y的治疗提供了一种安全有效的方法，无需手术。我们还设想EAS与其他疗法（例如，DBS和DMS）可进一步改善Rett综合征大鼠的社会、运动和记忆能力。致谢感谢上海中医药大学龙华医院针灸科裴健教授对Mecp 2-/y大鼠取穴 及 电 针 治 疗 的 建 议 本 工 作 得 到 了 国 家 科 学 技 术 部（ 2016YFA0400902 ） 、 国 家 自 然 科 学 基 金 （ 11575278 ，21675167，81690263，21227804，21505148和U1632125）、苏州大学放射医学与防护国家重点实验室项目（GZK 1201813）、前沿科学重点研究计划（QYZDJ-SSW-SLH031）、中国科学院（CAS）和中国科学院青年创新促进会开放式大型基础设施研究（2012205和2016236）。作者Qiu Zilong Qiu，Jun Hu，and Chunhai Fan构思并指导了本研究;Yanhong Sun，Lihua Wang，Zilong Qiu，and Chunhai Fan设计了本研究。Yi Xu、Yanhong Sun、Zhifang Chen和Yuefang Zhang进行了 实 验 。 ChenglieLin 、 ZhileiGe 、 FangfeiZhao 、 XinyiLiu 和MeilingYan参与了实验。Meiling Yan、Fangfei Zhao、Jimin Gao、Ying Zhu、Hongyi Li和Yanhong Sun对研究进行了数据分析。孙艳红、王丽华、邱子龙、范春海撰写了这篇论文。遵守道德操守准则Yanhong Sun、Zhifang Chen、Yi Xu、Yuefang Zhang、ZhileiGe、Chenglie Lin、Yi Zhou、Fangfei Zhao、Meiling Yan、XinyiLiu、Ying Zhu、Jimin Gao、Hongyi Li、Lihua Wang、Jun Hu、Zilong Qiu和Chunhai Fan声明他们没有利益冲突或财务冲突需要披露。附录A.补充数据本文的补充数据可在https://doi.org/10.1016/j.eng.2020.06.032上找到。Y. 太阳，Z.Chen，Y.Xu等人工程12（2022）8389引用[1] Amir RE，Van den Veyver IB，Wan M，Tran CQ，Francke U，Zoghbi HY.Rett综合征是由编码甲基CpG结合蛋白2的X连锁MECP 2突变引起的。NatGenet1999;23（2）：185-8.[2] Chahrour M， Zoghbi HY.雷特综 合征的故事 ：从临 床到神经生 物学神经元2007;56（3）：422-37。[3] Tropea D，Giacometti E，Wilson NR，Beard C，McCurry C，Fu DD，et al.Partialreversal of Rett syndrome-like symptoms in MeCP2 mutant mice.ProcNatlAcad Sci USA 2009;106（6）：2029-34.[4] Chang Q，Khare G，Dani V，Nelson S，Jaenisch R. 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