主办方：埃及基础与应用科学杂志3（2016）232-240完整文章从阿萨姆邦传统发酵鱼和肉制品中分离和鉴定新的本土葡萄球菌属DBOCP 06作为益生菌Debajit Boraha，*，Olee Gogoia，Chanakya Adhikaria，B.B.Kakotia，ba生物技术研究中心，Dibrugarh大学，786004，印度b印度迪布鲁格尔大学药物科学系，邮编786004A R T I CL EI N F OA B S T R A C T文章历史记录：接收日期：2016年4月29日接收日期：2016年6月5日2016年6月10日接受2016年6月17日在线发布保留字：益生菌菌株葡萄球菌DBOCP6拮抗作用胃肠道商业潜力传统发酵的鱼和肉制品以其益生菌价值而闻名。首次从印度阿萨姆邦的传统发酵鱼和肉制品中分离和表征新型土著益生菌菌株的方法，该地区被称为该国的生物多样性热点，其中大部分未开发的经济重要微生物。最有效的益生菌分离物被鉴定为葡萄球菌属。DBOCP6（GenBank登录号：KR706310）的16S rDNA序列分析。根据对广谱和窄谱抗生素的敏感性，发现新分离株为非溶血性和非致病性 对E. coli MTCC 40。它在溶菌酶、胆盐（4%）和1-10的pH范围存在下的活力它还显示出显著的疏水性值（33.1%）以及较高的自聚集值该分离物的高热死亡点（100 °C）表明其适合进一步商业开发。基于上述观察，可以得出结论，新的葡萄球菌属。菌株DBOCP6可作为潜在的益生菌候选物用于工业开发。© 2016曼苏拉大学.由Elsevier B. V.制作和托管。这是一个CC BY-NC-ND许可证下的开放获取文章（http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/）。1.介绍印度东北部的阿萨姆邦是世界上淡水鱼最丰富的地区之一，也是世界上最大的干鱼生产地。亚洲[1，2]。此外，印度东北部地区被认为是动植物的生物多样性热点，特别是经济上重要的微生物，尚未被探索[3]。鱼和肉是全世界重要的食物来源阿萨姆邦的少数民族传统上* 通讯作者。联系电话：+91-9706394994。电子邮件地址：dborah89@gmail.com（D. Borah）。http://dx.doi.org/10.1016/j.ejbas.2016.06.0012314- 808 X/© 2016曼苏拉大学。Elsevier B. V.制作和托管这是CC BY-NC-ND许可证下的开放获取文章（http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/）。可在www.sciencedirect.com在线获取ScienceDirect杂志主页：http://ees.elsevier.com/ejbas/default.asp埃及基础与应用科学杂志3（2016）232233发酵并从鱼和肉中生产不同的制剂，如xukati，hidal和其他干鱼和肉制品[4]。发酵食品富含有益健康的益生菌是公认的事实。益生菌已被定义为“一种通过改善肠道微生物平衡而有益于宿主的活微生物食品补充剂”，更广泛地说，是发挥积极健康益处的活微生物[5，6]。Metchnikoff于1907年首次暗示，以发酵食品形式摄入的细菌可以在酸奶和奶酪的采购中用作益生菌[20]。发酵鱼和肉的微生物群，印度阿萨姆邦的民族食品几乎没有受到影响。因此，尝试通过综合方法在传统制备的发酵鱼和肉制品中鉴定有效的本土益生菌候选物，该综合方法最初考虑菌株的安全特征和分离菌株的潜在应用，最后考虑其在整个GIT中存活以提供健康益处的能力。有益于正常的肠道菌群[7]。 这些属性包括益生菌对宿主微生物生态学的明显有益影响[8，9]。影响肠道微生物群组成的理化条件包括肠道运动性、pH值、氧化还原电位、营养物质、宿主分泌物（例如消化酶、盐酸、胆汁和粘液）以及是否存在完整的回盲瓣[10]。因此，胃肠道（GI）包含许多不同的生态位，具有沿着GI道增加的多种微生物生态系统[11]。除了支持消化功能外，固有微生物还通过防止致病微生物的定殖而充当免疫系统的主要作用者[11欧洲议会和欧盟理事会也鼓励开发合适的替代品来取代抗生素[14，15]。使用益生菌是抗生素实施的有效和安全的替代方案[14由于益生菌的有益效果主要集中在胃肠道中，因此益生菌应表现出良好的表面疏水性和聚集特性，以粘附并定殖在胃肠道中[18，19]。随后的研究计划中的许多研究报告了相当数量的属于乳杆菌属、双歧杆菌属和肠球菌属的物种，这些物种是典型2.实验与方法2.1.材料研究中使用的化学品和消耗品购自Merck India Pvt. Ltd.，所有微生物培养基购自HiMedia India Pvt. Ltd.。使用UV-Vis分光光度计（Shimadzu UV-1800，Japan）在600 nm波长下监测细菌生长。在Sigma 3- 30 K离心机（德国）中进行纯化。2.2.收集发酵鱼及肉类样本从印度阿萨姆邦的不同部落、社区和当地市场收集了20种传统制备的发酵鱼和肉样品。所收集的样本及其地理分布的详情载于表一及图二。1.一、2.3.从采集的样品将10%（w/v）的细粉化的鱼和肉样品各自单独接种在100mL MRS（de Man Rogosa）表1制剂的当地名称关键准备采集点样本采集点的地理经度和纬度胡卡蒂熏干，碾碎，用竹筒发酵Dibrugarh东经94°北纬27°胡卡蒂太阳晒干索纳布尔东经91°北纬26度胡卡蒂太阳晒干索纳布尔东经91°北纬26度胡卡蒂太阳晒干索纳布尔东经91°北纬26度胡卡蒂太阳晒干索纳布尔东经91°北纬26度胡卡蒂太阳晒干索纳布尔东经91°北纬26度胡卡蒂太阳晒干纳冈东经92°北纬26°胡卡蒂太阳晒干纳冈东经92°北纬26°胡卡蒂熏干，碾碎，用竹筒发酵若哈特东经94°北纬26°胡卡蒂熏干，碾碎，用竹筒发酵拉欣普尔东经94°北纬27°希达尔太阳晒干Guwahati东经91°北纬26°希达尔太阳晒干Guwahati东经91°北纬26°希达尔太阳晒干Guwahati东经91°北纬26°希达尔在陶罐中压制和发酵戈阿尔帕拉东经90°北纬26度Halis太阳晒干Guwahati东经91°北纬26°Halis在陶罐中压制和发酵戈阿尔帕拉东经90°北纬26度野鸡太阳晒干北拉欣普尔东经94°北纬27°Halis太阳晒干德尔冈东经93°北纬26°羊肉太阳晒干Dhemaji东经94°北纬27°猪肉太阳晒干廷苏基亚东经95°北纬27°234埃及基础科学与应用科学杂志3（2016）232图1Sharpe ） 肉 汤 ， 并 在 37 ± 2 °C 以 135 rpm 孵 育 24 hr（CERTOMAT®BS-1振荡孵育器，Sartorious Stedim GermanyLtd.）。然后将这些接种在MRS琼脂（pH-3）平板上以获得耐酸细菌菌株。通过接种在胆汁七叶素琼脂培养基上进一步筛选这些。通过用属于临床上最相关的抗生素类别的宽谱和窄谱市售抗生素盘处理分离株来筛选非致病性益生菌菌株， 环丙沙星（5微克），卡那霉素（30微克），氨苄青霉素（10微克），克林霉素（2 mcg）、万古霉素（30 mcg）、红霉素（15 mcg）、庆大霉素（10 mcg）和四环素（30 mcg）2.4.在酸性和碱性条件在1-10的pH范围内单独地进一步评估益生菌候选物的活力。在吸光度600 nm处每隔1小时测量生长，并通过涂布平板法将细胞接种到MRS琼脂平板上来确认细胞的活力。2.5.溶血试验使用含有5%（v/v）脱乙酰化羊血的2号血琼脂基平板评价分离株的溶血活性，并在37 ℃下孵育24 h。该试验一式三份进行[21]。2.6.细菌素生产试验最有效的分离物在37 °C下在MRS肉汤中生长48小时，并在4 °C下以10，000 rpm收获5分钟。将上清液加热至70 °C（以除去蛋白酶）并通过旋转真空蒸发器浓缩至1/10体积该无细胞上清液浓缩物（CFSC），通过0.22 μm膜过滤器（Millipore，Germany），并评价其抗菌活性[22]。采用琼脂扩散法测定抗菌活性简言之，将MH琼脂培养基倒在培养皿上，固化后，试验微生物E。将大肠杆菌MTCC 40（0.5McFarland标准稀释液）接种到每个平板上。在平板中制备具有8 mm扩散孔的孔，并填充50 μL菌株培养物的无细胞内容物，并在37 ± 2 ℃下过夜扩散18小时，并检查孔周围的抑制区。2.7.根据益生菌分离物对以下细菌的最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC）评估拮抗特性：E.大肠杆菌（MTCC40）潜在分离株过夜肉汤的等分试样（O.D. = 1.0）接种（40、80、120、160和200 μL）至总体积为10 mL的E. coli MTCC40（按照0. 5 Mc-Farland标准稀释）在37 °C下在维持在135rpm的不同试管中单独地进行，以测定MIC和MBC值。通过每隔2小时测量600 nm处的OD来通过涂布平板法在营养琼脂平板上接种，进一步检查试验微生物的活力2.8.最有效分离株基于Bergey’s Manual of Systematic Bacteriology规定的各种技术并最终通过16S rDNA测序鉴定潜在的益生菌分离物。用正向引物704 F（5′-GTA GCG GTG AAA TGC GTA GA-3′）和反向引物907 R（5′-CCG TCA ATT CMT TTG AGT TT-3′）引物，并使用比对软件产生909 bp长的共有序列使用16S rDNA序列进行BLAST，埃及基础与应用科学杂志3（2016）232235NCBI GenBank的非冗余16S rRNA序列（细菌和古细菌）数据库根据最大同一性评分选择前10个序列，并使用多重比对软件程序ClustalW TM进行比对。用MEGA6软件以最大似然法构建系统发育树。bootstrap值设置为1000，并且在节点处给出了百分比值[23将获得的16SrDNA序列提交GenBank数据库。使用Kimura 2参数方法计算进化距离[26]。2.9.最有效分离物的细胞表面特征的体外2.9.1.疏水性测定通过使用Crow等人描述的方案确定微生物对烃的粘附来测量细菌细胞表面疏水性略加修改[27]。简言之，将过夜细菌培养物以10，000 X g离心5 min。将沉淀物在磷酸盐缓冲盐水（PBS）中洗涤两次，并悬浮于3 mL 0.1 M KNO3溶液中。在600 nm处测量吸光度（A0）。向细胞悬浮液中加入1 mL甲苯以形成两相系统。在室温下预孵育10分钟后，将两相系统涡旋2分钟在室温下孵育30分钟后，水相和甲苯相分离。然后小心分离水相，并在600 nm处测量吸光度（A1）。使用下式[28]计算细胞表面疏水性（H）的百分比：H 1A1 A 1002.9.2.潜在益生菌分离物与其他病原体使用自动聚集测定法测定特异性在4 °C下以5000 X g收获细菌 细 胞 10 分 钟 ， 并 用 PBS 洗 涤 ， 并 重 悬 于 PBS 中 至108cfu/mL。 对于自动聚集测定，将3mL的每种细菌悬浮液涡旋10秒，并在37 °C下孵育2小时。用分光光度计在600 nm处测量上清液的吸光度自动聚集计算如下[29]：自动聚集率 A0小时 100其中，A2h为孵育2小时后600 nm处的吸光度，A0h为孵育 0小时后2.9.3.溶菌酶敏感性试验将新鲜的30 mL未接种的LB肉汤与9 mL蛋清溶菌酶接种在3mL最有效分离物的过夜培养物中通过在营养琼脂平板上铺板来测试分离物的存活率[30]。2.9.4.潜在分离株热致死点的测定将5mL过夜最有效的细菌分离物在不同温度下处理10分钟，然后划线到营养物上，琼脂平板培养，并在37 ± 2 °C下孵育过夜，以观察生长停止的温度[31]。2.10.统计分析所有实验一式三份进行，结果以平均值± SD 表示进行Student3.结果在保持在pH 3的MRS琼脂平板上分离总共120种益生菌候选物。根据这些菌株在胆汁七叶素琼脂上生长的能力，进一步筛选这些菌株（图1）。 2a）。 只有12个菌株被认为是进一步研究的基础上，他们令人满意的生长胆汁七叶素琼脂。当用人血挑战时，测试菌株未显示溶血（γ-溶血）（图2b），表明其非致病性特征[32]。根据对标准临床显著抗生素的敏感性筛选非致病性菌株发现最有效的分离物对研究中使用的所有抗生素未发现可降解益生菌菌株产生细菌素。就直接病原体抑制而言，已经观察到许多益生菌LAB产生抗微生物物质，并且主要是有机酸，特别是乳酸和乙酸等。[29]. 针对最常见的胃肠道细菌物种E. coli（MTCC 40）中表达。该候选益生菌对大肠杆菌的MIC和MBC值分别为120和200 μL/mL。 coli（MTCC40）（图13）。 3）。它在pH 2-8时显示出最大的活力，然而也在pH 1和10时显示出其活力（图1B）。4）。在此，分离物在胆汁七叶皂苷琼脂（4%牛胆汁）中生长，在那里它们水解胆汁七叶皂苷，产生培养基的深棕色至黑色（图11）。 2a）。分离物分裂七叶素分子并使用释放的葡萄糖来供应能量需要，以将七叶素释放到培养基中，在那里它与柠檬酸铁反应形成酚铁复合物，这将琼脂培养基从(a)（b）第（1）款图2(a)表示七叶苷的水解，和（b）显示有效分离株对适当参比菌株的γ236埃及基础科学与应用科学杂志3（2016）232图 3.分离物对大肠杆菌的拮抗作用。 coli（MTCC 40）中的表达。深棕色到黑色。与供试病原菌E相比，该菌株显示出33.1 ±0.5% 的 亲 和 性以 及 更 高 的 自 聚 集 值（ 71.43 ± 0.2% ） 。coliMTCC40（55.5 ± 0.4%）。将我们研究中获得的最有效菌株的自动聚集值与世界上一些已建立的益生菌分离物，即长双歧杆菌B6、嗜酸乳杆菌ADH、副干酪乳杆菌ATCC25598、乳酸杆菌ATCC 25598进行比较。鼠李糖乳杆菌GG、短乳杆菌（KACC10553）、干酪乳杆菌（KACC12413）、肠膜明串珠菌（KACC12312）、乳酸片球菌（KACC 12307）、L. 单核细胞增多症（KACC 12671）;并且还与一些病原体即S.金黄色葡萄球菌（KACC 10768）、鲍氏志贺氏菌（KACC 10792）和鼠伤寒沙门氏菌（KCCM 40253）、大肠杆菌（E. coliMTCC40中表达。用于比较的数值取自文献[29]。用400 μg溶菌酶/mL攻击有效益生菌候选物60分钟，其中其显示出中度的对酶的抗性（图6）。Rada等人[30]将该浓度用于表征模拟胃肠道通道中的双歧杆菌菌株。根据各种染色技术及其生化试验，分离物9F被发现是革兰氏阳性、过氧化氢酶阳性球菌。最有效的分离物9F被鉴定为葡萄球菌属的新物种。DBOCP6的16SrDNA序列分析表明，该基因与GenBank中的GenBank登录号DBOCP6一致。进化历史是使用最大似然法推断的[24]。优化后的系统发育树与S. 1）作为外群，用1000bootstrap 值 （ 图 1B ） 对 副 干 酪 乳 芽 孢 杆 菌 菌 株 R094（GenBank登录号：NR 025880.1）进行扩增。 7）。新的益生菌分离物葡萄球菌属DBOCP6的GenBank登录号为KR706310图4600 nm403530252015101 HR2 HR3 HR4 H6 HR5012345678910生长培养基的pH值埃及基础与应用科学杂志3（2016）232237图5 -图64.讨论大量作者报告了食源性病原体造成健康危害的情况[33随着耐药微生物不断升级的现状和这些药物引起的副作用，迫切需要开发具有健康促进特性的非常规天然食品产品[36，37]。只有一个分离株被发现是敏感的整个广谱和窄谱抗生素测试，这表明该分离株是非致病性的。在GIT内，体外活性产生的细菌素的量不一定足够高，或者根本不高[28，38]。因此，细菌素的产生可能不被认为是新益生菌候选物的基本途径[20]。胃中的胃液是一种生物屏障，其中pH值在1.5和3.0之间，候选分离株能够在1-10的pH范围内存活和生长，胆汁是候选微生物在小肠上部遇到的另一个生物屏障。在人体内，人胆汁的相关生理浓度范围为0.3 - 0.5%[38，40]。对常见肠道细菌的抑制与存在去结合胆汁酸而非结合胆汁酸有关[41]。水解胆汁盐的能力可以帮助微生物维持肠道菌群的平衡[42]。胆盐水解酶（BSH）活性也与人体胆固醇水平降低相关[43，44]。238埃及基础科学与应用科学杂志3（2016）232图7-新的有效分离葡萄球菌属的系统发育关系。 DBOCP6（GenBank登录号：KR706310）与其他10种最密切相关的葡萄球菌属物种。使用自举选项，数据集相似1000次，并在节点处给出百分比值。测试具有有前途的益生菌特性的菌株的细胞表面粘附特性。全球公认益生菌必须能够在宿主的消化道内定殖[45，46]。因此，粘附特性被认为是选择新益生菌的关键因素[28，47]。为了使益生菌对宿主发挥最大作用，除了对GI病症具有抗性外，它还应具有粘附和定植肠道的能力[36]。甲苯用于评估细菌细胞表面的疏水或亲水特性，这归因于细胞表面上的羧基[29]。益生菌的功能性作用包括粘附于肠壁以在胃肠道中定殖，具有防止病原体粘附或病原体活化的能力[48]。疏水性和亲水性可能来自细菌细胞表面的蛋白质和多糖[49]。疏水性是有助于微生物与宿主细胞之间首次接触的物理化学性质之一[36]。该菌株的高细胞表面疏水性表明其能够附着在肠上皮细胞衬里上并抵抗消化食物物质的移动[49]。益生菌候选物显示出比病原体合理更高的自动聚集，表明益生菌在GIT中的特异性结合能力溶菌酶是吞咽的益生菌微生物遇到的人类消化系统中的第一个生物屏障[50]。分离株的活力表明其在口服给药时存活的能力。5.结论这项研究广泛记录了隔离和筛选-根据16SrDNA测序技术鉴定为葡萄球菌属的新种。它在溶菌酶存在下生长良好，能在较宽的pH范围内存活，并能水解胆汁七叶皂苷，表明它有在哺乳动物食物道中存活的潜力。分离菌株对广谱抗生素和窄谱抗生素均敏感，且无溶血性，故无致病性对大肠杆菌E. 杆菌 它显示出良好的疏水性值，具有较高的自聚集值。尽管没有发现该分离物产生任何抗微生物细菌素，但它能够承受100 °C的热死亡点的高温，这表明它包含了益生菌在食品加工技术中的脆弱性，使其适合工业开发。基于上述观察，可以得出结论，葡萄球菌属菌株DB0CP6可以作为用于工业开发的潜在益生菌候选物。确认作者承认DBT-MHRD，政府。2009年，印度政府批准了DBT-IBTHub 项 目 （ BT/04/NE/2009 ） 和 DBT-IBTHub 项 目（BT/04/NE. 2009），为在迪布鲁格尔大学生物技术研究中心开展研究提供资金和基础设施。作者还承认Delcon设施提供访问900多个电子期刊Dibrugarh大学和Xcelris实验室。 Pvt.有限公司、 Ahmedabad成功进行了手稿中提出的16S rDNA测序。R E F E R E N C E S益生菌从传统制备的发酵鱼和肉的阿萨姆邦，印度。最有效的分离物是发现是一种新的革兰氏阳性、球菌状、过氧化氢酶阳性、非溶血性细菌，其满足被认为是潜在的益生菌候选者的所有基本标准。该分离株[1] Goswami M，Sathiadhas R，Goswami UC.阿萨姆邦的市场流量、价格结构和鱼类营销系统-案例研究。Ernakulam：CMFRI Publication; 2002.p. 146比55埃及基础与应用科学杂志3（2016）232239[2] Kashyap D，Bhattacharjya K.在Morigaon区的jagiroad干鱼市场，成本、利润和价格分布在干鱼的营销渠道上。AssamJ Inland Fish Soc India2012;44（2）：49-55.[3] Joshi SR ， Banerjee S ， Bhattacharjee K ， Lyngwi NA ，KoijamK ， KhaundP ， etal.NortheastMicrobialDatabase：aweb-baseddatabankofculturablesoilmicrobes from North East India. Curr Sci2015;108（9）：1702-6.[4] 吴文龙，王文龙.从喜马拉雅西部民族腊肉制品中分离的乳酸菌。食品微生物学2011;28：1308[5] 富勒河益生菌在人类和动物中的应用 应用细菌学杂志1989;66：365-78.[6] 粮农组织/卫生组织。食品中益生菌的评价指南。工作组报告。 罗马和日内瓦：联合国粮食及农业组织/世界卫生组织;2002年。[7] 梅奇尼科夫湖生命的延长。乐观的研究第2版。伦敦：威廉·海涅曼;1907年。[8] Salminen S，Deighton MA，Benno Y，Gorbach SL.健康与疾病中的乳酸菌：微生物学和功能方面。第2版NewYork：Marcel Dekker Inc.p. 211 - 54[9] Dunne C，O'Mahony L，Murphy L，Thornton G，MorrisseyD，O'Halloran S，et al. In vitro selection criteria forprobiotic bacteria of human origin：correlation with in vivofindings. 美国临床营养杂志2001;73（增刊）：386S-92S。[10] Booijink CC，Zoetendal EG，Kleerebezem M，DeVosWM.人类小肠中的微生物群落：多样性与宏基因组学的耦合。Future Microbiol2007;2（3）：285-95.[11] Gerritsen J，SohuH，Vos WM，Rijkers GT.人类健康和疾病中的肠道微生物群：益生菌的影响。GenesNutr2011;6：209-40.[12] DethlefsenL，Eckburg PB，Bik EM，Relman DA.人类肠道微生物群的组装。Trends Ecol Evol（Amst）2006;21（9）：517-23.[13] BooijinkCC，El-Ai dy S，Rajili c′-Stojan ovicM，Heilig HG，TroostFJ，Sohmh等人。在人类回肠微生物群中检测到的高时间和个体间变异。环境微生物学2010;12（12）：3213-27。[14] PattersonJ，Burkholder K，The European Parliament andtheCouncil of the European Union 2003. 2003年9月22日欧洲议会和理事会关于动物营养添加剂的第1831/2003号法规（EC）。益生元和益生素在家禽生产中的应用。家禽科学2003;82：627-31.[15] Santini C，Baffoni L，Gaggia F，Granata M，Gasbarri R，Di GioiaD，et al. Characterization of probiotic strains：anapplicationasfeed additives in poultry against Campylobacterjejuni. 国际食品微生物学杂志2010;104：S98-108。[16] Chaiyawan N，Tayeeteptaikul P，Wannissorn B，Ruengsomwong S，Klungsupya P，Buaban W，et al. 肉鸡源芽孢杆菌的分离鉴定及益生特性研究。泰国兽医杂志2010;40：207[17] Modesto M，D'Aimmo M，Stefanini I，Trevisi P，De FilippiS，Casini L，et al. A novel strategy to select Bifidobacteriumstrains and prebiotics as natural growth promoters in newlyweaned pigs. Livest Sci2009;122：248-58.[18] [10]杨文，李文，李文. 13株长双歧杆菌的粘附、自聚集和疏水性。 应用微生物学通讯2000;31：438- 42.[19] [10]李晓梅，李晓梅，李晓梅.益生菌对肠道健康的影响。当代药物代谢2009;10：68[20] [10]李国雄，李国雄，李国雄. 肠球菌在食品与健康中的作用及应用。国际食品微生物学杂志2006;106（1）：1-24.[21] Thirabunyanon M，Boonprasom P，Niamsup P.从发酵牛奶中分离的乳酸菌对结肠癌细胞抗增殖的益生菌潜力。生物技术通讯2009;31：571-6.[22] 1999年10月20日，J. M，J. M，J. M.来自戊糖片球菌的细菌素。J Food Process Preserve2010;34：1064-79.[23] 木村通过核苷酸序列比较研究估算碱基替换进化速率的一种简单方法。J Mol Evol1980;16：111-20.[24] Saitou N，Nei M.邻接法：一种重建系统发生树的新方法。 Mol Biol Evol1987;4：406-25.[25] [10]杨文，李文，李文. MEGA 4：分子进化遗传学分析（MEGA）软件4.0版。Mol Biol Evol2007;24：1596-9.[26] Felsenstein J. Confidence Limits on Approaches onApproaches：An ApproachUsing the Bootstrap.Evolution1985;39：783-91.[27] Crow VL，Gopal PK，Wyndham AJ.细胞表面差异乳球菌菌株。国际乳品杂志1995;5：45[28] [10]杨志华，李志华，李志华. 从食用橄榄微生物群中选择和表征新的益生菌候选物。PLoS ONE 2014;9（4）：e94457.[29] Xu H，Jeong HS，Lee HY，Ahn J.益生菌粘附特性的评估。应用微生物学通讯2009;49：434[30] [10]李国雄，李国雄. 双歧杆菌对溶菌酶的敏感性作为益生双歧杆菌菌株的可能选择标准。生物技术通讯2010;32：451-5.[31] 阿内贾湾微生物学、植物病理学和生物技术实验。第4版。印度：新时代国际出版社;2010年。[32] Maragkoudakisa PA，Zoumpopouloua G，Miarisa C，Kalantzopoulosa G，Potb B，Tsakalidou E. 从乳制品中分离的乳杆菌菌株的益生潜力。 国际乳品杂志2006;16：189-99.[33] [10]杨文，李文. 产抗菌素乳酸菌在控制即食蔬菜病原菌上的应用。应用微生物学杂志1996;81：113-19.[34] Kannappan S，Manja KS.乳酸菌对海产品细菌的拮抗作用。 食品科学技术杂志2004;41：50-9.[35] 王文，王文生，王文生，等.苜蓿芽中乳酸菌的分离、鉴定及对食源性致病菌的竞争性抑制作用研究.中国农业科学院学报，2001，13（1）：119 - 119.《食品保护学杂志》2004;67：947-51。[36] Shobharani P，Agrawal R.一种来自切达干酪的强效益生菌。印度微生物学杂志2011;51（3）：251-8.[37] Oyetayo VO，Adetuyi FC，Akinyosoye FA.嗜酸乳杆菌和干酪乳杆菌作为益生菌制剂的体内安全性和保护作用。Afr JBiotechnol2003;2（11）：448-52.[38] 放大图片作者：Zavaglia AG，Kociubinsky G，PerezPD，Antoni G.益生菌制剂用双歧杆菌菌株的分离和鉴定。食品保护杂志1998;61（7）：865-73.[39] Corzo G，Gilliland SE. 3株嗜酸乳杆菌胆盐水解酶活性的研究。J Dairy Sci1999;82：472- 80.[40] Vlk oválE，Kalous L，BuneováV，Rylk ováK，SvetlíkováR，Rada V.一些淡水鱼消化道中双歧杆菌和乳酸杆菌的发生。Biologia Sect Zool2012;67（2）：411-16.[41] Grill JP，Cayuela C，Antoine JM，Schneider F.一种共轭胆盐水解酶活性缺失的嗜淀粉乳杆菌突变体的分离和特性：活性与胆盐抗性之间的关系。应用微生物学杂志2000;89：553-63.240埃及基础与应用科学杂志3（2016）232[42] TarantoMP，de Ruiz HAP，de Valdez GF.屎肠球菌菌株中的胆盐水解酶活性。《微生物营养学》1995年;13：375-9。[43] Argyri AA，Zoumpopoulou G，Karatzas KAG，Tsakalidou E，Nychas GJE.发酵橄榄中潜在益生乳酸菌的体外筛选。食品微生物学2013;33：282-91.[44] [10]杨文辉，李文辉.具有益生潜力的发酵橄榄中乳酸菌的筛选。食品研究国际2013;50：135-42.[45] Ouwehand AC，Tolokko S，Kulmala J，Salminen S，Salmine E. 灭活益生菌菌株对肠粘液的粘附。应用微生物学通讯2000;31（1）：82-6.[46] Rivera-EspinozaY，Gallardo-Navarro Y.非乳制品益生菌产品。食品微生物学2010;27：1-11.[47] Lievin-Le Moal V，Servin AL.人类肠道致病菌的发病机制：来自培养的完全分化的人类结肠癌细胞系的教训。微生物学分子生物学评论2013;77：380-439。[48] Salminen S，Isolauri E，Salminen E.益生菌在稳定肠道粘膜屏障中的临床应用：未来挑战的成功菌株。Antonie VanLeeuwenhoek 1996;70：347 - 58.[49] Chauviere G，Coconnier MH，Kerneis S，Darfeuille-MichaudA. 通过热灭活的乳酸杆菌从人肠细胞样Caco-2细胞中竞争 性 排 除 产 大 肠 杆 菌 （ ETEC ） 。 FEMS Microbiol Lett1992;70：213[50] Turchi B，Mancini S，Fratini F，Pedonese F，NuvoloniR，Bertelloni F，et al. Preliminary evaluation ofprobioticpotential ofLactobacillus plantarum strainsisolated fromItalian food products. World J MicrobiolBiotechnol2013;29：1913-22.
我的内容管理
展开
