吡唑并[3，4-d]嘧啶类合成及抗肿瘤活性

主办方：埃及基础科学与应用科学杂志3（2016）118-124完整文章吡唑并[3，4-d]嘧啶类化合物的合成及抗肿瘤活性吡唑并[3，4-b]吡啶衍生物E. Abdel-latifa，*，S.阿卜杜勒-法塔赫阁下Gafferb，H.A.埃特曼河a埃及曼苏拉大学理学院化学系，ET-35516 Mansourab国家研究中心纺织研究部，12622 Dokki，Giza，EgyptA R T I CL EI N F OA B S T R A C T文章历史记录：接收日期：2015年10月8日接收日期：2015年2015年11月28日接受2016年1月12日在线发布保留字：5-氨基吡唑异硫氰酸苯酯硫脲吡唑并[3，4-d]嘧啶类抗肿瘤活性以5-氨基-1-对甲苯磺酰基-1H-吡唑-3，4-二甲腈为起始原料，与各种亲电试剂和亲核试剂反应，合成了一系列新的吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-甲腈和吡唑并[3，4-b]吡啶-3-甲腈衍生物。所有新合成的化合物的结构均经各种现代分析方法（IR，1HNMR和MS）确证。所有标题化合物均对人喉表皮样癌细胞（Hep2）进行了潜在的细胞毒性评价。在筛选的化合物中，3和4表现出最高的显著效果。© 2015曼苏拉大学。由Elsevier B. V.制作和托管。这是一个CC BY-NC-ND许可证下的开放获取文章（http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/）。1.介绍吡唑衍生物的特征在于其作为HIV-1的潜在抑制剂[1]、杀虫剂[2]、杀真菌剂[3]、抗高血压剂[4]和抗癌活性[5]的生物学和药理学活性。它们也是合成其他稠合杂环系统的重要和有用的前体，在这些吡唑并[3，4-d]嘧啶衍生物[6]中，其作为嘌呤类似物具有相当大的化学和药理学重要性[7在文献中发现，吡唑并[3，4-d]嘧啶环系统的吡唑的1H被一些其它生物活性部分取代显著地改变了其药理学性质[10]。此外，吡唑并[3，4-b]吡啶衍生物代表天然和合成生物活性化合物中的重要结构单元[11]。它们显示抗焦虑活性以及黄嘌呤氧化酶抑制剂、胆固醇形成抑制剂和抗阿尔茨海默病[12]。此外，已经描述了含有稠合杂环的吡唑并吡啶系统与几种生物和医学活性相关[13本文报道了一些新的1-对甲苯磺酰基吡唑并[3，4-d]嘧啶和1-对甲苯磺酰基吡唑并[3，4-b]吡啶化合物* 通讯作者。联系电话：+2-01002529365。电子邮件地址：ehabattia00@gmx.net（E.阿卜杜勒-拉蒂夫）。http://dx.doi.org/10.1016/j.ejbas.2015.11.0012314- 808 X/© 2015曼苏拉大学。Elsevier B. V.制作和托管这是CC BY-NC-ND许可证下的开放获取文章（http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/）。可在www.sciencedirect.com在线获取ScienceDirect杂志主页：http://ees.elsevier.com/ejbas/default.asp埃及基础科学与应用科学杂志3（2016）118119合成了掺入甲苯磺酰基部分的衍生物，以评价它们对喉表皮样癌（Hep2）的潜在细胞毒性2.实验2.1.材料和方法所有熔点（未校正）均在热释光Gallenkamp熔点仪上测定IR光谱记录在Thermo Scientific Nicolet iS 50 FT-IR光谱仪上的KBr盘中（未报告所有频率 使用Bruker WP 300核磁共振仪在300 MHz下获得NMR谱，使用TMS作为内标，DMSO-d6作为溶剂.使用LC-MS（Shimadzu-Mass Spectrometer）在70 eV下进行质谱。在埃及吉萨开罗大学微量分析单位进行元素分析;结果与计算值符合得令人满意。2.1.1.5-氨基-1-甲苯磺酰基-1H-吡唑-3，4-二甲腈 （二）向对甲苯磺酰肼（0.05摩尔，9.3克）在50毫升乙醇中的冷溶液中加入四氰基乙烯（0.05摩尔，6.4克）将反应混合物搅拌1小时，然后在蒸汽浴上加热回流30分钟。然后将混合物冷却，收集白色沉淀并用乙醇洗涤产 率 80%; mp （ °C ） ; 213（ V cm-1 ） ： 3313 ， 3246（NH2），2238（C-N），1639（C-N）; 1H NMR（DMS0-d）：δ/ppm = 2.30（s，3H，CH），7.10（d，2H，Ar-H，J = 7.95Hz），反应12将反应混合物在室温下冷却滤出形成的沉淀，干燥，然后从EtOH中重结晶，得到4，为黄棕色晶体。产率65%; mp（℃）; 155-10.25（s，lH，NH），12.45（s，lH，NH）; MS（EI）：m/z（%）= 422（mo-1）lecular ion，6），372（17），345（20），329（31），311（41），297（44），282(35)，268（46），253（基峰，100），236（65），210（19），182（18），155（11）、133（26）、107（33）、93（60）、77（65）、65（20）。分析C19 H14 N6 O2 S2（422.48）：计算%：C，54.01; H，3.34; N，19.89;实测%：C，54.18; H，3.41; N，19.78。2.1.4.4-氨基-6-硫代-1-甲苯磺酰基-6，7-二氢-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-甲腈（5）将化合物2（2mmol，0.57g）和硫脲（2mmol，0.16g）在油浴中在180-185 °C下一起加热冷却后，将所得固体溶于稀氢氧化钠中，然后用稀盐酸酸化。将反应混合物用HCl洗涤，得到粗产物5。滤出形成的固体产物，干燥，然后从EtOH中重结晶，得到5，为深黄色晶体。产率65%; mp（℃）; > 300; IR（Vcm-1）：3337，3193（NH和NH2），2221（C-N），1640（C-N）; 1H NMR（DMSO-d6）：δ/ppm = 2.35（s，3H，CH3），6.40（s，2H，NH2），7.25（d，2H，Ar-H，J = 8.05 Hz），7.65（d，2H，Ar-H，J = 1.80Hz），11.25（s，lH，NH）; MS（EI）：m/z（%）= 346（分子离子，9.1），246（40.2），172（21.0），133（19.9），107（32.6），91（基峰，100），77（32.0），65（41.7）。C_（13）H_（10）N_6O_ 2S_2的分析（346.39）：计算%：C，45.08; H，2.91; N，24.26;实测%：C，45.29;H，2.80; N，24.38。637.50（d，2H，Ar-H，J = 1.80 Hz），7.85（s，2H，NH2）; MS（EI）：m/z（%）= 287（分子离子，19），272（14），242（7），215（33），195（8），173（15）、155（59）、139（6）、114（37）、91（基峰，100）、77（23）、65（40）. C12 H9 N5 O2 S（287.30）的分析：计算%： C，50.17;H，3.16; N，24.38;实测%：C，50.28; H，3.11; N，24.45。2.1.2.4，5，6，7-四氢-4，6-二硫代-1-甲苯磺酰基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-甲腈（3）向化合物2（2mmol，0.57g）在吡啶（20ml）中的搅拌悬浮液中然后将反应混合物在水浴上加热12小时。将反应混合物在室温下冷却将沉淀的产物滤出，洗涤并从EtOH-DMF混合物（1 ∶ 1）中重结晶，得到相应的产物3，为深绿色晶体。产率61%，mp（℃）; > 300; IR（Vcm-1）：3437（NH），2221（C-N），2.1.5.4，5-二氨基-6-硫代-1-甲苯磺酰基-4，5，6，7-四氢-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-甲腈（6）将化合物2（2 mmol，0.57g ）和氨基硫脲（2 mmol ，0.19g）的混合物在油浴中在干燥条件下在180- 185 °C下熔融将融合的混合物在乙醇（15ml）中加热，并通过过滤收集冷却时形成的沉淀，干燥并从EtOH ∶ DMF混合物（1 ∶ 1）中重结晶，得到棕色晶体化合物6产率55%; mp（°C）; > 300; IR（Vcm-1）：3417，3332，3195（NH和NH2）， 2218 (C-N)、 1632 (C-N);1小时 NMR（DMSO-d6）：δ/ppm = 2.35（s，3H，CH3），5.20（s，1H，CH），6.15（s，2H，NH2），7.25（d，2H，Ar-H，J = 8.10 Hz），7.70（d，2H，Ar-H，J = 1.80Hz），8.35（s，2H，NH2），11.10（s，1H，NH）; MS（EI）：m/z（%）= 363（分子离子，20.0）、304（29.2）、266（45.4）、246（68.4）、190（64.8）、172（28.7）、133（17.0）、107（34.6）、91（100.0）、77（35.6）、65（44.8）。分析C H N O S（363.42）：计算%：C，42.97; H，3.61; N，26.98;实测%：131372 21638（C-N）;1H NMR（DMSO-（I6）：δ/ppm = 2.25（s，3H，CH3），7.10（d，2H，Ar-H，J = 7.95 Hz），7.50（d，2H，Ar-H，J = 1.80 Hz），11.22（s，1H，NH），13.69（s，1H，NH）; MS（EI）：m/z（%）= 363（分子离子，20.1）、200（21.2）、172（17.7）、133（48.1）、91（188.7）、80（基峰，100）、64（63.7）。C13H9N5O2S3（363.44）的分析：计算%：C，42.96;H，2.50; N，19.27;实测值%：C，42.82; H，2.56; N，19.35。2.1.3.4-亚氨基-5-苯基-6-硫代-1-甲苯磺酰基-4，5，6，7-四氢-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-甲腈（4）将化合物2（2mmol，0.57g）和异硫氰酸苯酯（2mmol，0.24ml）在15ml DMF中的混合物回流3h。C，43.14; H，3.72; N，26.86。2.1.6.4-氧代-1-甲苯磺酰基-4，5-二氢-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-甲腈（7）将化合物2（2mmol，0.57g）在过量甲酸（10ml）中的悬浮液冷却后，将混合物用冷却水（10 ml）稀释，滤出形成的沉淀物，干燥并通过从EtOH中重结晶纯化，得到7，为黄棕色粉末。产率55%; mp（℃）; 266- 268; IR（V cm-1）：3253（NH），2240（C-N），1668（C-O）; 1H NMR（DMSO-d6）：δ /ppm = 2.40（s，3H，CH3），120埃及基础科学与应用科学杂志3（2016）1187.23（d，2H，Ar-H，J = 7.90 Hz），7.64（d，2H，Ar-H，J =1.80 Hz），8.20（s，lH，嘧啶CH-N），9.45（s，lH，NH）; MS（EI）：m/z（%）= 315（分子离子，6.8），203（55.7），179（基峰，100），161（13.3），136（28.0）、79（33.5）、52（31.0）。 C13 H9 N5 O3 S（315.31）分析：计算%：（：，49.52;！1，2.88; 122.21;实测%：（：，49.71;！1，2.93;N，22.27。2.1.7.4-氨基-1-甲苯磺酰基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-甲腈（8）将 吡 唑 2 （ 2mmol ， 0.57g ） 和 甲 酰 胺 （ 10ml ） 在 DMF（10ml）中的混合物使反应混合物在室温下冷却并倒入200ml冰冷却的水中。滤出形成的黄色沉淀，干燥并从EtOH中重结晶，得到8，为黄色粉末。产率83%; mp（℃）; 133-3H，CH3），7.30（d，2H，Ar-H，J = 8.05 Hz），7.55（s，2H，NH2），7.75（d，2H，Ar-H，J = 1.75Hz），8.25（s，1H，嘧啶CH-N）。C13H10N6O2S（314.32）的分析：计算%：C，49.67; H，3.21;N，26.74;实测%：C，49.48; H，3.13; N，26.82。2.1.8.N-3，4-二氰基-1-甲苯磺酰基-1H-吡唑-5-基甲酰亚胺酸乙酯（9）向原甲酸三乙酯（5mmol，0.75ml）和乙酸酐（20ml）的混合物中加入吡唑2（5mmol，1.44g）。将反应混合物回流5小时，并在减压下除去溶剂。将分离的固体从乙醇中重结晶，得到9，为黄色粉末。产率66.5%; mp（℃）; 145-2.35（s，3H，CH3），4.40（q，2H，OCH2，J = 7.15 Hz），7.30（d，2H，Ar-3），1H NMR（400MHz，DMS0-d6）δ 7.55（s，lH，N-CH），7.80（d，2H，Ar-H，J = 1.75Hz）。 C15H13N5O3S（343.36）的分析：计算%：C，52.47; H，3.82; N，20.40;实测值%：C，52.63; H，3.88; N，20.53。2.1.9.5-氨基-4-亚氨基-1-甲苯磺酰基-4，5-二氢-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-甲腈（10）向化合物9（2mmol，0.68g）在无水乙醇（50ml）中的溶液中加入水合肼（4mmol，0.2ml）将反应混合物回流4小时，浓缩并冷却。将分离出的固体产物滤出并从EtOH中重结晶，得到10，为黄色粉末。产率81%; mp（°C）; 186NH），2236（C-N），1635（C-N）; 1H NMR（DMSO-（I6）：δ/ppm = 2.35盐酸。通过过滤获得的固体产物通过从EtOH中重结晶来纯化，以获得作为棕色晶体的12。产率65%; mp（℃）; 305- 308;IR（Vcm-1）：3293，3201，3140（NH2和OH），2240（C-N），1702（C-O），1648（C-N）;1HNMR（DMS0-d6 ）： δ/ppm = 2.35 （s，3H，CH3）， 2.50（s，3H，CH3），6.02（s，3H，CH3），2H，NH2），7.35（d，2H，Ar-H，J = 8.05 Hz），7.75（d，2H，Ar-H，J = 8.05 Hz），MS（EI）：m/z（%）= 371（分子量：1000）。最 大 离 子 ， 43 ） ， 199 （ 基 峰 ， 100 ） ， 170 （ 19 ） ， 158（11），77（5），67（20）。C16H13N5O4S（371.37）的分析：计算%：C，51.75; H，3.53; N，18.86;实测值%：C，51.62; H，3.61; N，18.94。2.1.11. 4，6-二氨基-1-甲苯磺酰基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3，5-二甲腈（13）将化合物2（4mmol，1.36g）和丙二腈（4mmol，0.27g）在含有几滴哌啶的15ml DMF中的混合物回流12小时。将反应混合物冷却至室温，用冷水稀释，然后用几滴稀HCl中和。滤出所得固体，用冷水洗涤数次，干燥，然后从EtOH：DMF混合物（1：1）中重结晶，得到13，为棕色晶体。产率67%; mp（℃）;> 300; IR（Vcm-1）：3410，3335，3245（NH2），2216（C-N），1651（C-N）; 1H NMR（DMSO-d6）：δ/ppm = 2.40（s，3H，CH3），6.45（s，2H，NH2），7.42（d，2H，Ar-H，J = 8.05Hz），7.61（d，1H NMR（400MHz，DMS0-d6）：8.47（s，2H，NH2）; MS（EI）：m/z（%）= 353（分子离子，8.2），199（57.3），143（58.5），115（33.2），80（49.5），55（基峰，100）。C15 H11 N7 O2 S（353.36）的分析：计算%：（：，50.99;！1，3.14; 127.75;实测%：（：，50.78;！1，3.22; 127.65。2.2.体外抗肿瘤活性2.2.1.细胞系表 皮 样 癌 （ 喉 ） Hep2 通 过 生 物 制 品 和 疫 苗 控 股 公 司（VACSERA）（开罗，埃及）从ATCC获得5-氟尿嘧啶被用作标准抗癌药物进行比较。2.2.2.化学试剂试 剂 为 RPMI-1640 培 养 基 、 MTT 、 DMSO 和 5- 氟 尿 嘧 啶（ Sigma Co. ， 圣 Louis ， USA ） 和 胎 牛 血 清 （ GIBCO ，UK）。2.2.3.MTT试验[18]利用上述细胞系，利用MTT试验确定化合物对细胞生长的抑制作用。该比色测试基于变换-26个问题 的 的 黄色3-（4，5-二甲基噻唑-2-基）-2，5-二苯基（s，3H，CH3），7.30（d，2H，Ar-H，J = 7.95 Hz），7.45（s，2H，NH2），7.80（d，2H，Ar-H，J = 1.80Hz），8.15（s，1H，嘧啶CH），11.35（s，1H，NH）。C13H11N7O2S（329.34）的分析：计算%：C，47.41; H，3.37; N，29.77;实测值%：C，47.58; H，3.29; N，29.86。2.1.10. 5-乙酰基-4-氨基-6-羟基-1-甲苯磺酰基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-甲腈（12）将化合物2（4mmol，1.36g）、碳酸钾（6mmol，0.83g）和乙酰乙酸乙酯（4mmol，0.52ml）在15ml DMF中的混合物使反应混合物在室温下冷却，倒入冰冷却的水中，然后用几滴稀盐酸中和。四唑溴化铵（MTT）的紫色甲瓒衍生物的线粒体琥珀酸脱氢酶在实际细胞。Hep2在含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基中精制。所包括的抗毒素是100单位/ml青霉素和100μg/ml链霉素，在37 °C下，在5%CO2培养箱中。将细胞系以1 × 10 4个细胞/孔的密度接种于96孔板中[19]，在37 °C和5% CO2下培养48小时。孵育后，用不同浓度的化合物处理细胞并孵育24小时。药物处理24小时后，加入20 μl 5 mg/mlMTT溶液，孵育4小时。向每个孔中加入体积为100 μl的二甲基亚砜（DMSO），以溶解紫色甲瓒埃及基础科学与应用科学杂志3（2016）118121形成了使用酶标仪（EXL 800，USA）在570 nm处测量并记录比色试验相对细胞活力百分比确定为：（处理样品的A570/未处理样品的A570）× 100。功能，2222 cm-1的腈功能（C-N），和1632 cm-1的（C-N）功能。4的1HNMR谱显示，除了作为多重态的芳族质子之外，甲基质子（CH3）在2.35ppm处存在单重态信号，两个NH质子在10.25和12.45ppm处存在在6.90-7.65 ppm范围内的三重峰（7 H）和二重峰（2 H）。质量3.结果和讨论3.1.化学关键起始原料5-氨基-1-对甲苯磺酰基-1H-吡唑-3，4-二甲腈（2）是由对甲苯磺酰肼（1）与四氰基乙烯在无水乙醇中反应合成的，产率为80%[17].由于起始化合物的易合成性和预期的生物活性，我们以廉价易得的二硫化碳、硫脲、甲酸和乙酰乙酸乙酯为原料，合成了3-氰基-1-对甲苯磺酰基-吡唑因此，将吡唑化合物2与二硫化碳在吡啶中加热12小时，以良好的产率得到相应的4，6-二硫代-1-甲苯磺酰基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶衍生物3（方案1）. 3的化学结构由其正确的元素分析和光谱数据确定。其IR光谱显示在3437和2221 cm−1处的亚氨基（NH）和腈（C-N）官能团的吸收带1HNMR谱显示甲基质子（CH3）在2.25 ppm处的单峰信号7.50 ppm的对位二取代的苯环，以及两个亚胺质子（NH）在11.22和13.69 ppm的NH处的两个吡唑化合物2与异硫氰酸苯酯的反应通过在二甲基甲酰胺中加热回流进行，得到相应的4-亚氨基-5-苯基-6-硫代-1-甲苯磺酰基-1H-吡唑并[3，4-d]-嘧啶 衍生物4.根据元素分析和光谱分析确定了4IR光谱显示两个（NH）在3374和3180 cm−1处的两个吸收带，光 谱 显 示 在 m/z = 422 处 的 分 子 离 子 峰 对 应 于 其 化 学 式C19H14N6O2S2的分子量。吡唑2与硫脲的融合得到一种产物 在TLC上，根据其元素分析和光谱数据，鉴定为4-氨基-6-硫代-1-甲苯磺酰基-6，7-二氢-1H-吡唑并[3，4-d]-嘧啶-3-甲腈（5）。红外光谱显示氨基官能团（NH2）在3337和3193 cm−1处有吸收带，腈官能团（C-N）在2221 cm −1处有吸收带。 的1小时 NMR 频谱 展出 单线态 信号2.35 ppm表示甲基（CH3）的三个质子，6.40 ppm表示氨基（NH2）的两个质子的单峰信号，7.25和7.65 ppm表示对位二取代苯环的两个双峰信号，以及在低场出现的另一个单峰信号，11.25 ppm对应于（NH）质子。以与化合物5相同的方式，通过起始化合物2和氨基硫脲的融合制备4，5-二氨基-6-硫代-1-甲苯磺酰基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶衍生物6。IR光谱显示3417、3332和3195 cm−1处的吸收带代表（NH）和（NH2）基团，2218 cm−1代表腈官能团（C-N），1632 cm−1 代 表 （ C-N ） 官 能 团 。 1HNMR 谱 显 示 甲 基 质 子（CH3）在2.35 ppm处的单峰信号，甲基质子（CH 3）在2.35ppm处的单峰信号。5.20 ppm（CH）质子，两个氨基（NH2）基团的两个单峰信号在6.15和8.35 ppm，两个双峰信号在7.25和8.35 ppm，7.70ppm的芳香族质子，和单线态信号，11.10 ppm对应于亚氨基（NH）基团。当化合物2与甲酸在回流温度下反应时，得到4-氧代-1-甲苯磺酰基-4，5-二氢-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-甲腈7（方案2）.7的结构是方案1-122埃及基础科学与应用科学杂志3（2016）118方案2-通过元素分析和光谱数据证实。IR光谱显示在3253 cm−1处的吸收带为亚氨基（NH），在2240 cm −1处检测到腈基（C-N）的吸收带，在1668 cm−1处出现一个尖锐的峰为酰胺基羰基（C-O）。7的1HNMR谱在2.40 ppm处显示了对应于甲基（CH 3）质子的单峰信号，在7.23和7.64 ppm处显示了对应于对位二取代苯环的两个双峰信号，在2.40 ppm处显示了对应于甲基（CH3）质子的单峰信号，在7.23和7.64 ppm处显示了对应于对位二取代苯环的两个双峰信号。8.20 ppm是指（CH-N）官能团的质子，而亚氨基（NH）基团质子在9.45 ppm将 吡唑 化 合 物2 与 甲酰 胺 在 作为 溶 剂的 二 甲 基甲 酰 胺（DMF）中加热，得到相应的4-氨基-1-甲苯磺酰基-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-甲腈（8）。根据元素分析和光谱数据确定了8的结构。IR光谱显示氨基（NH2）在3323和3166 cm−1处有吸收带，腈基（C-N）在2235 cm −1处有吸收带，（C-N）官能团在1636 cm−1处有吸收带。8的1HNMR谱显示甲基（CH3）的三个质子在2.35 ppm处的单峰信号，以及在7.30和7.30 ppm处的两个双峰信号。7.55除了嘧啶质子（CH-N）特有的在8.25ppm处的单线态信号之外，芳香族质子的单线态信号也为8.25ppm。将化合物2与原甲酸三乙酯在乙酸酐中加热，得到N-（3，4-二氰基-1-甲苯磺酰基-1H-吡唑-5-基）亚氨基甲酸乙酯9，将其在无水乙醇中与水合肼进行杂环化，以良好收率得到5-氨基-4-亚氨基-1-甲苯磺酰基-4，5-二氢-1H-吡唑并[3，4-d]嘧啶-3-甲腈10。IR光谱显示（NH和NH2）基团在3342和3216 cm −1处有吸收带，2236cm−1是由于腈（C-N）官能团的存在，1635 cm−1是（C-N）基团的吸收带。10的~1HNMR谱表明，甲基（CH3）的三个质子在2.35ppm处有单峰信号，芳香族质子在7.30和7.80ppm处有两个双峰信号，嘧啶C-2质子在8.15ppm处有单峰信号，NH2也和C-NH质子分别为7.45和11.35 ppm在等摩尔量的碳酸钾存在下，将化合物2与乙酰乙酸乙酯在二甲基甲酰胺中加热，在使用乙酸乙酯：石油醚混合物（2：3）作为洗脱剂的TLC上得到一个斑点，基于元素和光谱分析，将所得产物鉴定为5-乙酰基-4-氨基-6-羟基-1-甲苯磺酰基-1H-吡唑并-[3，4-b]吡啶-3-甲腈（12）（方案3）.建议通过预期中间体5-乙酰基-4-氨基-6-羟基-1-甲苯磺酰基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3-腈（11）的杂环化继续形成12。IR光谱显示（OH和NH2）基团在3293、3201和3140 cm−1处的吸收带，2240 cm−1对应于腈官能团（C-N），1702 cm− 1对应于C-O基团，1648cm−1对应于（C-N）官能团。1HNMR揭示了两个单线态信号，两 个 甲 基 （ 2CH3 ） 的 6 个 质 子 的 单 峰 信 号 为 2.35 和2.50ppm，（NH2）质子的单峰信号为6.02ppm，对位二取代苯环质子的双峰信号为7.35和7.75ppm，（OH）质子的单峰信号为11.55ppm。质谱显示m/z = 371处的分子离子峰，对应于分子式C16H13N5O4S的分子量。将化合物2与丙二腈在含哌啶的DMF中加热产生唯一产物，其鉴定为4，6-二氨基-1-甲苯磺酰基-1H-吡唑并[3，4-b]吡啶-3，5-二甲腈13，分离产率为67%。据推测，电离的丙二腈攻击化合物2中的氰基，然后后者的氨基攻击丙二腈氰基之一，导致环形成。IR光谱显示在3410、3335和3245 cm−1处的吸收峰，这是由于氨基（NH2）的存在，2216 cm−1是由于腈官能团（C-N），1651 cm−1对应于（C-N）官能团。1HNMR谱在2.40ppm处显示出甲基质子（CH3）的单峰信号，在6.42和8.47 ppm处显示出两个氨基（NH2）的单峰信号，而在7.42和7.61 ppm处显示出芳香质子的双峰信号。埃及基础科学与应用科学杂志3（2016）118123方案3- 4-氨基-1-甲苯磺3.2.体外抗肿瘤活性采用MTT法对所合成的化合物进行体外抗人喉表皮样癌细胞（Hep2）的表1中的结果表明化合物3（IC5036.9 μM）和4（IC5021.3 μM）具有与标准抗癌药物5-氟尿嘧啶（IC50）相当的非常显著的作用41.5μM）。这可能是因为在两种化合物中除了N-甲苯磺酰基-吡唑并嘧啶部分之外还存在这样的NH-C-S部分。其他化合物对表皮样癌（Hep2）的影响较低。确认作者感谢埃及曼苏拉大学药学院药物系的负责人AhmedAbas先生在抗肿瘤活性试验期间提供的技术支持。表1 -合成的化合物对表皮样癌细胞系（Hep 2）的细胞毒性活性。化合物体外细胞毒性IC50（μM）Hep25-Fu41.5± 3.12196.8 ± 13.4336.9± 2.6421.3± 1.6555.5± 5.25-FU= 5-氟尿嘧啶。数据报告为平均值± SD。R E F E R E N C E S[1] Kamal El-Dean AM，Elkhawaga AM，Radwan S，AhmedMM. 吡啶并噻吩并吡唑并嘧啶及巯基甲基吡唑并嘧啶衍生物的合成。磷硫硅2009;184：2034-48.[2] 李伟杰，李伟杰.制备3-酰基-4-氰基-5-氨基-吡唑的一般方法。四面体通讯2006;47：5797-9.[3] Hassan AE，Abdella MM，Ahmed AI. 2-（5-氨基-3-芳基吡唑-1-基）-3-甲基喹喔啉类化合物的合成及环合反应研究。JChem Res（S）1997;322-3.[4] 艾丽AA多官能取代吡唑并萘啶、五氮杂萘及七氮杂菲衍生物之合成。磷硫硅2006;181：2395-409.[5] AymnER，Mohamed IH，Randa EAM，Nahed F，FaroukMEAM. 一些吡唑和稠合吡唑并嘧啶的合成和抗HSV-1评价。欧洲医学化学杂志2009;44：3285[6] Elkhawaga AM，Kamal El-Dean AM，Radwan M，AhmedMM. 某些咪唑并吡唑并嘧啶、吡唑并嘧啶并嘧啶和吡唑并嘧啶并噻嗪的合成。Bull Korean Chem Soc2009;30：561-6.[7] Schenone S，Bruno O，Radi M，Botta M. 4-氨基取代吡唑并[3，4-d]嘧啶类化合物的合成及生物学性质。Mini-RevBiochem2009;6：220-33.[8] Eljazi IA，Samer AA. 杂环邻氨基腈：制备吡唑并[3，4-d]-嘧啶，在1-位上具有取代基的修饰.分子2001;6：621 - 38.[9] Abdellatif MS，Ana MFO，Ligia MR. 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