黄酮类化合物减轻博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化

埃及基础与应用科学杂志4（2017）256完整文章黄酮类化合物减轻博莱霉素诱导的大鼠肺纤维化Marwa Salah Zaghloula，Ramy Ahmed Abdel-Salamb，Eman Saida，Ghada Mohamed Suddeka，哈特姆·阿卜杜勒-拉赫曼·萨利姆aaMansoura大学药学院药理学和毒理学系，35516 Mansoura，埃及b埃及曼苏拉曼苏拉大学医学院病理学系阿提奇莱因福奥文章历史记录：2017年5月31日收到2017年9月18日收到修订版2017年10月16日接受2017年11月2日在线发布关 键 词 ：博莱霉素，黄环氧化 物 ， IL-10胶原纤维A B S T R A C T肺纤维化是一种进行性致死性肺部疾病，死亡率极高。博来霉素（BLM）是治疗多种癌症的最常用的化学治疗剂之一。BLM最严重的不良反应是肺毒性;因此，BLM已被反复报道被认为是最广泛使用的诱导实验性肺纤维化的药物之一。在目前的研究中，flavocoxid已经研究了其改善BLM诱导的肺纤维化的能力。BLM经气管内滴注，flavocoxid经口给药（20 mg/kg）5周; BLM滴注前1周和BLM滴注后5周。Flavocoxid显著降低肺/体重指数、BALFFlavocoxid能显著降低肺组织MDA含量，提高肺组织GSH含量、SOD活性和血清总抗氧化能力，降低肺组织NO含量。此外，flavocoxid减少肺IL-10的含量。此外，黄酮可显著改善组织学改变，防止胶原沉积，并显著降低肺羟脯氨酸含量。总之，flavocoxid可以被提议为用于管理肺纤维化的潜在治疗剂。©2017曼苏拉大学。由爱思唯尔公司制作和主持这是一篇开放获取的文章，CC BY-NC-ND许可证（http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/）。1. 介绍肺纤维化是一种进行性致死性肺部疾病。它是多种肺部炎症的终末期。肺泡结构丧失、肌成纤维细胞增生、肺实质重塑和细胞外基质过度沉积是肺纤维化的主要特征[1]。肺纤维化是最常见的间质性肺病之一，影响全球超过500万个体，平均生存时间约3年[2]。尽管进行了广泛的研究，但尚无任何药物可显著改善肺纤维化的报告[3]。目前唯一有效的方法是肺移植。因此，寻找具有显著疗效和耐受性的新型药物治疗肺纤维化是不可避免的[4]。肺纤维化可以作为抗肿瘤药物如博来霉素（BLM）的不良毒性作用而发展。除此之外，*通讯作者。电子邮件地址：eman-sa3eed@hotmail.com，emansaid@mans.edu.eg（E.Said）。吸烟和吸入矿物粉尘/石棉是其发病机制中涉及的附加因素[5]。越来越多的证据表明，肺纤维化主要发生在肺泡上皮损伤后和伤口愈合异常，涉及炎症和辅助T细胞2型细胞因子、上皮细胞凋亡和缺乏适当的再上皮化、成纤维细胞-肌成纤维细胞迁移和增殖、上皮间质转化和过度的细胞外基质（ECM）沉积[6]。BLM是一种化疗抗生素，用于治疗淋巴瘤、睾丸癌和几种类型的肿瘤中的癌。据报道，它可诱导显著的功能和生化变化，促进肺纤维化[7]。支气管化生、反应性巨噬细胞募集、非典型肺泡上皮细胞、炎性水肿和间质纤维化是BLM可诱导的显微镜变化[8]。据报道，BLM诱导的大鼠和小鼠肺纤维化是研究人类肺纤维化进展机制以及各种药物对其进展的影响的有用工具。BLM诱导活性氧物种（ROS）的产生，其与DNA结合导致DNA损伤，https://doi.org/10.1016/j.ejbas.2017.10.0052314- 808 X/©2017曼苏拉大学。由爱思唯尔公司制作和主持这是一篇基于CC BY-NC-ND许可证的开放获取文章（http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/）。可在ScienceDirect上获得目录列表埃及基础与应用科学杂志杂志主页：www.elsevier.com/locate/ejbasM.S. Zaghloul等人 /埃及基础与应用科学杂 志 4（2017）256-263257被假定为引发炎症和纤维增生反应。此外，据报道，BLM促进内源性抗氧化防御的消耗，加剧氧化剂介导的组织损伤[9]。Flavocoxid是儿茶素和黄芩苷两种黄酮类化合物的混合物[10]。在美国，它作为FDA监管的医疗食品销售，用于治疗骨关节炎。Flavocoxid是目前市售的唯一处方抗炎药，其通过抗过氧化物酶活性调节环氧合酶（COX）酶。它还抑制5-脂氧合酶（5-LOX）介导的白细胞三氢叶酸（LT）的产生。Flavocoxid具有广泛的强抗氧化活性，主要通过下调诱导性炎症基因表达和中和ROS，防止花生四烯酸转化为氧化脂质[11]。目前的研究方案集中在评价flavocoxid在大鼠模型中减轻BLM诱导的肺纤维化的能力2. 材料和方法2.1. 实验动物成年雄性Sprague Dawely大鼠（170研究方案符合实验研究的伦理指导原则;2.2. 药物和化学品Flavocoxid 购 自 Pimus Pharmaceutical Inc 。 （ Scottsdale ，AZ，USA ），BLM 购自Nippon Kayaku Co.（Ltd.，东京，日本）。Ehrlich2.3. 实验方案2.3.1. 诱导肺纤维化通过气管内滴注溶于0.1 ml生理盐水中的BLM（5 mg/kg）诱导肺纤维化[12]。使用硫喷妥钠（20 mg/kg体重，I. P.）麻醉大鼠。在颈部做一个中线切口，暴露气管，滴入BLM。将大鼠保持垂直位置并旋转数次以确保BLM在肺组织内均匀分布。手术缝合切口，将2%夫西地酸钠局部应用于伤口。2.3.2. 动物分组将大鼠随机分为三个实验组（12只大鼠/组），如下所示：正常对照;如前所述向气管滴注0.1ml生理盐水，0.2ml的0.5%羧甲基纤维素（CMC），每日一次口服，持续5周，BLM对照：气管内滴注BLM（5 mg/ kg），大鼠每日一次口服接受0.2ml的0.5%CMC，持续5周，黄酮环氧化酶治疗组：在BLM滴注之前，大鼠每日用悬浮于0.5%CMC中的黄酮环氧化酶（20 mg/kg，口服）治疗一周，并在滴注之后再治疗4周，持续黄酮环氧化酶给药5周的总时间。BLM滴注后四周;用硫喷妥钠深度麻醉大鼠通过眶后静脉丛穿刺采集血样，分离血清并立即用于生化评估。收获肺从所有肺中分离左叶用于制备肺匀浆，并分离右叶用于组织病理学检查。2.3.3. 收集支气管肺泡灌洗液（BALF）打开胸腔，暴露气管，插管，将6 ml无菌0.9%生理盐水（3次，2ml/次）缓慢输注至肺内。在轻轻按压胸部几次后，恢复了50-70%。使用冷却离心机将BALF以2000 rpm、4 °C离心10 min。将沉淀的细胞沉淀物合并并重悬于500μ l无菌盐水中，以定量炎性细胞含量;总细胞计数和差异细胞计数。2.4. BALF总蛋白含量和乳酸脱氢酶（LDH）活性根 据 Smith ， Krohn[13] 的 方 法 ， 使 用 商 业 试 剂 盒 （ ThermoScientific，Rockford，USA），按照生产商的说明评估总蛋白含量。根据Henry[14]，按照生产商的说明，使用商业试剂盒（Humandiagnostics，Wiesbaden，Germany）评估酶促LDH活性。2.5. 肺组织匀浆制备及一氧化氮（NO）、丙二醛（MDA）、还原型谷胱甘肽（GSH）含量和超氧化物歧化酶（SOD）活性的冲洗分离的左肺叶，称重并在KCl（1.15%，pH 7.4）中匀浆，以获得10% w/v组织匀浆[15]。将匀浆在2000 rpm、4°C下离心15min，分离上清液并立即用于使用市售生物诊断测定试剂盒（Giza，Egypt）评估氧化/抗氧化应激生物标志物（MDA、GSH和SOD）以及 一 氧 化 氮 ， 如 制 造 商 分 别 根 据 Ohkawa 、 Ohishi[16] 、Ellman[17] 、 Marklund 和 Marklund[18] 以 及 Montgomery 和Dymock[19]描述的方法所述2.6. 血清总抗氧化能力（TAC）的生化评估使用市售试剂盒（Bio-diagnostic，Giza，Egypt）根据[20]所述的供应的制造商2.7. 肺白细胞介素-10（IL-10）含量使用 市售 的酶 联免 疫吸 附测 定（ELISA ）试 剂盒 （Uscn LifeScience，INC. USA），根据提供的制造商说明书。2.8. 肺羟脯氨酸和胶原含量采用Bergman和Loxley描述的比色法测定肺羟脯氨酸含量[21]。肺胶原蛋白含量通过羟脯氨酸含量乘以13.5计算[22]。258M.S. Zaghloul等人 /埃及基础与应用科学杂 志 4（2017）256-2632.9. 苏木精-伊红和Masson取右上肺叶，用冰冷盐水冲洗，固定在10%中性缓冲福尔马林中，石蜡包埋，切片（6μ m），HE和Masson三色染色。在显微镜下以随机顺序检查组织，病理学家对实验组不知情。根据肺水肿、肺气肿、肺泡壁增厚、炎性病变和胶原沉积或纤维化的程度评估组织的结构变化[23]。如Szapiel，Elson所述，使用HE染色和Masson染色半定量评估肺泡炎和纤维化[24]正常对照。与BLM对照相比，每日口服flavocoxid 5周显著降低总细胞和中性粒细胞计数。与正常对照相比，总细胞和淋巴细胞计数仍显著升高（表1）。3.3. 每日口服黄酮类化合物对支气管肺泡灌洗液总蛋白含量和乳酸脱氢酶活性与正常大鼠相比，BLM滴注后BALF总蛋白含量显著升高。每日口服黄酮类化合物显著逆转BLM诱导的BALF总蛋白含量的增加同时，与对照组相比，BLM组BALF-LDH活性明显升高，正常对照组每日口服黄酮类化合物显著减少BALF-LDH活性与BLM对照相比降低约46%（图1B）。①的人。3.4. 每日口服黄酮对肺氧化/抗氧化生化参数和总抗氧化能力肺内滴注博莱霉素可显著增加肺对于 纤维 化面 积百 分比定 量， 使用 安装 在Olympus® 显微 镜上 的Olympus® 然 后使 用 基 于 Intel® Core I3® 的 计算 机 使 用VideoTest®Morphology®软件（俄罗斯）对图像进行分析，该软件具有特定的内置区域例程。制备每只大鼠的5个载玻片，并分析每个载玻片的5个随机区域2.10. 统计分析结果表示为平均值±平均值的标准误差（SEM）。使用Graphpad软件Prism V5（Graphpad Software Inc.，San Diego，CA，USA）。使用单因素方差分析（ANOVA）确定组间的显著差异，然后进行参数测量的Tukey-Kramers多重比较事后检验，Kruskal-Wallis检验，然后进行非参数测量的Dunn事后检验，以及构建标准曲线的线性回归。在p0.05时接受统计学显著性。3. 结果3.1. 每日口服黄酮类化合物对肺/体重指数的影响如表1所示，与正常对照相比，BLM滴注后肺/体重指数显著增加。与BLM对照组相比，每日口服flavocoxid（20 mg/kg）5周显著降低肺/体重指数3.2. 每日口服黄酮类化合物对细胞总数和分类计数的影响肺内滴注BLM可引起BALF中总细胞、淋巴细胞和中性粒细胞计数显著升高，与正常对照组比较，肺组织MDA含量明显降低，肺组织SOD活性、GSH含量及血清TAC明显降低。Flavocoxid显著对抗BLM诱导的改变，与BLM对照相比，肺MDA含量显著降低，而肺GSH含量、SOD活性和血清TAC显著升高（图1B）。 2）。3.5. 每日口服黄酮类化合物对肺一氧化氮含量的影响博莱霉素对照组肺组织NO含量较正常对照组明显升高。与BLM对照相比，Flavocoxid显著降低了肺NO含量（图 2）。200BALF蛋白含量（g/L）BALF- LDH活性（U/L）150100500Fig. 1.每日口服黄酮对BALF总蛋白含量和乳酸脱氢酶（LDH）活性的影响。数据表示为平均值土SEM，n = 12。使用单因素方差分析，然后使用Tukey-Kramer多重比较检验（p0.05）对数据进行统计学分析。* ，$分别与正常和BLM对照显著不同。表1每日口服flavocoxid对肺/体重指数以及总细胞计数和分类细胞计数的影响。组肺/体重指数（×10- 3）细胞总数（×106）淋巴细胞（×106）中性粒细胞（×106）正常对照4.09 0.0 ± 110.326 ± 0.0680.194 ± 0.0330.07 0.0159 ±BLM对照6.72± 0.031*1.20.038*0.750.099*0.45± 0.071*BLM/Flavocoxid5.010.020$0.6± 0.0*，$0.6± 0.0*0.0± 0.0$数据表示为平均值土SEM，n = 6。使用单向ANOVA，然后使用Tukey-Kramer多重比较检验（p0.05）对数据进行统计学分析* ，$分别与正常和BLM对照显著不同*$*$严重程度评分肺泡炎纤维化无（0）没有没有轻度（1）<20%的肺<20%的肺中度（2）肺的20肺的20严重（3）>50%的肺>50%的肺M.S. Zaghloul等人 /埃及基础与应用科学杂 志 4（2017）256-263259$*肺NO含量（mol/g组织）血清TAC（mM/L血清）2502001501005001.51.00.50.02.52.01.51.00.50.02.01.51.00.50.02520151050图二.每日口服黄酮对肺氧化/抗氧化生化参数（丙二醛（MDA）含量、超氧化物歧化酶（SOD）活性、还原型谷胱甘肽（GSH）含量）、血清总抗氧化能力（TAC）和肺一氧化氮（NO）含量的影响。数据表示为平均值土SEM，n = 12。使用单向ANOVA，然后使用Tukey-Kramer多重比较检验（p 0.05）对数据进行统计学分析。* ，$分别与正常和BLM对照显著不同*美元/$* *$*肺MDA（nmol/g组织）*美元/肺GSH（mmol/g组织）肺SOD（U/g组织）260M.S. Zaghloul等人 /埃及基础与应用科学杂 志 4（2017）256-26350肺IL-10含量（pg/mg）*4030美元/美元20100图3.第三章。每日口服黄酮对肺白细胞介素-10（IL-10）含量的影响数据表示为平均值土 SEM ， n = 12 。 使 用 单 向 ANOVA ， 然 后 使 用 Tukey-Kramer 多 重 比 较 检 验（p0.05）对数据进行统计学分析* ，$分别与正常和BLM对照显著不同。1503.8.肺标本H-E和Masson正常对照组显示理想的肺结构（图5A）。另一方面，与正常对照组相比，BLM对照检查揭示了肺组织的扭曲结构;检测到中度至重度出血、肺气肿、肺泡隔增厚增加的区域、肺泡壁中的白细胞浸润和成纤维细胞（图5B C）。Flavocoxid显著改善BLM引起的炎症病变。用flavocoxid处理的动物的肺组织结构变化仅为轻度至中度的间隔增厚，伴有少量炎性细胞浸润。肺气肿改变和肺泡扩张显著减少（图5D）。BLM对照组炎症评分明显高于正常组。与BLM对照相比，Flavocoxid治疗组的Szapiel评分和纤维化面积百分比显著降低（表2）。与正常对照组相比，BLM对照组胶原沉积程度增加，肺泡受压，纤维化面积增大。然而，与BLM对照组相比，在给予黄酮环氧化酶后胶原积累显著减少（图4）。BLM对照组的Szapiel评分明显高于正常对照组。而与BLM对照相比，黄酮环氧化酶治疗组显示纤维化评分和纤维化面积百分比显著降低（表2）（图1B）。（六）。100500羟脯氨酸含量（g/g）胶原蛋白含量（x10 g/g）4. 讨论目前的研究揭示了flavocoxid对BLM诱导的肺纤维化的肺保护潜力。在当前的研究中，采用了一种充分表征的啮齿动物模型，该模型涉及BLM的单次气管内滴注BLM滴注可明显损害肺组织的生化动力学和组织病理学结构，并使肺生理功能明显受损.认为BLM输注诱导氧化应激和炎症，它们相互促进，伴随着促进肺纤维化的损伤/修复过程的停止[15]。据信BLM衍生ROS产生[25]，其靶向生物大分子如DNA、蛋白质和脂质，驱动脂质过氧化反应。见图4。每日口服黄酮对肺羟脯氨酸和胶原含量的影响。数据表示为平均值土SEM，n= 12。使用单向ANOVA，然后使用Tukey-Kramer多重比较检验（p 0.05）对数据进行统计学分析* ，$-分别与正常和BLM对照显著不同。3.6. 每日口服黄酮对肺白细胞介素-10（IL-10）含量的影响BLM对照组肺组织IL-10含量较正常对照组显著升高。与BLM组相比，每日口服黄酮类化合物显著降低肺IL-10含量（图1B）。 3）。3.7. 每日口服黄酮类化合物对肺羟脯氨酸和胶原含量的影响与正常对照组相比，肺内注入博莱霉素后，肺组织羟脯氨酸和胶原含量明显增加另一方面，与BLM对照组相比，每日口服flavocoxid显著降低肺羟脯氨酸和胶原蛋白含量（图1B）。 4）。氧化导致生化、组织病理学和生理功能障碍[26]。氧化 应激在 肺纤维 化的病 理发 展中起 关键作 用的事 实已被Daniil，Papageorgiou提及[27]。据报道，ROS和活性氮物质的产生至少部分参与了纤维化的发病机制[28，29]。在肺纤维化患者的肺中已经确定了氧化应激的标志物，并且在动物模型中，异常的抗氧化活性加剧了肺纤维化[25]。与此相关，NO的过度产生已被证明在动物模型和人类中诱导肺纤维化中起关键作用[30]。在目前的研究中，观察到气管内滴注BLM显著损害氧化剂/抗氧化剂止血，表现为肺MDA含量显著升高以及GSH含量、SOD活性和血清TAC的伴随降低。在这种情况下，BLM增加肺NO含量。以前的研究所作的类似观察使人们相信当前的概念[23，31]。Flavocoxid给药对BLM诱导的氧化剂/抗氧化剂止血妥协提供了显着的保护，并降低了肺NO水平含量，证实了Flavocoxid的抗氧化作用。**$$M.S. Zaghloul等人 /埃及基础与应用科学杂 志 4（2017）256-263261A BCD图五、使 用 H E染色（400×）观察每日口服Flavocoxid对肺组织病理学变化&的影响。（A）正常对照，完整的肺结构，没有任何炎症、水肿、出血、肺气肿或纤维化的证据（B）BLM对照，显示中度水肿、肺气肿、肺泡间隔增厚增加的区域、肺泡壁中的白细胞浸润和成纤维细胞（C）Flavocoxid，显示轻度至中度的间隔增厚，几乎没有炎性细胞浸润，肺气肿改变和肺泡出血。表2每日口服Flavocoxid对肺部炎性病变和纤维化的影响各炎症评分水平的动物给药数量平均炎症评分每只动物的数量纤维化评分水平平均纤维化评分平均纤维化lm201230123正常对照60000 ± 0.060000 ± 0.00.350.031BLM对照00152.83± 0.16*00242.67± 0.21*29.06 ± 1.83*BLM/Flavocoxid24000.67± 0.21$32100.67± 0.33$3.4± 0.03$数据表示为平均值土SEM，n = 6。使用Kruskal-Walis检验，然后使用Dunn多重比较检验对平均炎症和纤维化评分进行统计学分析，使用单向ANOVA，然后使用Tukey-Kramer多重比较检验对纤维化面积百分比进行统计学分析（p 0.05）。* ，$分别与正常和BLM对照显著不同给予黄酮环氧化物后氧化剂/抗氧化剂止血的改善与其他报告的数据一致，表明与黄酮环氧化物孵育后脂多糖刺激的巨噬细胞的体外MDA产生明显减少[32]。此外，黄酮类化合物主要通过诱导GSH和SOD活性的恢复以及抑制庆大霉素诱导的MDA产生来改善庆大霉素诱导的肾脏损伤[33]。关于BLM诱导的肺损伤的其他推进器，目前的研究显示，经生化评估和组织病理学评估证实，肺内滴注BLM引起慢性肺部炎症所有这些炎症体征在给予黄酮环氧化酶后均得到改善。此外，黄酮类化合物治疗后大鼠BALF中中性粒细胞的缺乏可归因于黄酮类化合物的作用机制，其部分依赖于抑制262M.S. Zaghloul等人 /埃及基础与应用科学杂 志 4（2017）256-263(A)（B）（丙）见图6。使用Masson三色染色法（100×）观察每日口服黄酮类化合物对肺组织病理学变化的影响。(A)正常对照，显示无蓝色染色，表明肺泡和肺泡隔中无胶原沉积。（B）BLM对照，显示在间质空间和支气管周围区域的胶原蛋白沉积的蓝色变色（C）Flavocoxid，显示间质空间和支气管周围区域胶原沉积的轻度蓝色变色中性粒细胞浸润和随后的炎症反应和氧化应激增强。这将在讨论部分突出显示。Flavocoxid含有黄芩苷和儿茶素，体外COX-1和COX-2以及5-LOX的过氧化物酶活性[11]。在体外，已报道flavocoxid影响炎症标志物的基因表达和蛋白水平，例如来自免疫炎症细胞的TNF-α[32]。体内研究证实了flavocoxid的强抗炎活性[34]。白细胞介素10（IL-10）是一种由许多活化的免疫细胞类型产生的抗炎细胞因子[35]。 已显示IL-10抑制炎症介质的产生并下调对T细胞活化至关重要的共刺激分子[36]。先前的研究报告了不同病理情况下IL-10的血浆水平升高，包括：脓毒症、出血性休克、多发性创伤、脑膜炎双球菌血症、分枝杆菌感染和寄生虫感染[35，37]。此外，据报道，在肺部炎症和纤维化的几种实验模型中，IL-10水平显著增加[38，39]。（道蒂，Carcillo[40]认为IL-10水平升高是一种代偿性抗炎反应综合征，假设其升高并与促炎反应（通过血浆IL-6或NO水平）相称。Flavocoxid给药显著降低了肺IL-10含量，表明IL-10的下调是与Flavocoxid的有益抗炎作用有关的另外的可能途径，如结果所示。在所有上述改变的背景下，在本研究中，在软骨内BLM滴注后证实了肺结构改变和过度胶原沉积中表现出的组织学变化。过度胶原沉积是肺纤维化的重要现象。目前的研究显示，BLM滴注后肺羟脯氨酸含量增加，意味着胶原和ECM积累增加，这与纤维化半定量评分升高相关。这些组织学改变显着纠正后flavocoxid管理。flavocoxid显著减轻BLM介导的羟脯氨酸和胶原沉积。M.S. Zaghloul等人 /埃及基础与应用科学杂 志 4（2017）256-263263总之，flavocoxid对BLM诱导的肺纤维化具有显著的改善作用。认为抗氧化剂、抗炎和抗纤维化的联合作用与观察到的疗效有关。利益冲突作者声明彼此之间或任何其他方之间引用[1] 总TJ，Hunninghake GW。特发性肺纤维化。新英格兰医学杂志2001;345（7）：517-25。[2] 科廷五世 改变特发性肺纤维化治疗方法并改善患者结局。Eur Respirat Rev：欧洲呼吸学会的官方期刊。2012 ;21（124）：161-7.[3] Antoniou KM，Margaritopoulos GA，Siafakas NM.特发性肺纤维化的药物治疗：从过去到未来。Eur Respirat Rev：欧洲呼吸学会的官方期刊。2 0 1 3 ;22（129）：281-91.[4] Kayhan S，Guzel A，Duran L，Tutuncu S，Guzel A，Gunaydin M，et al.来氟米特对博来霉素诱导的Wistar白化大鼠肺纤维化炎症和纤维化的 影响 。 J ThoracDis 2013;5（5）：641-9。[5] 绿色FH。肺纤维化概述 胸科2002;122（6增刊）：334 S-9 S。[6] 作者声明：John J.肺纤维化的发病机制和潜在的新治疗策略。实验肾病学1995;3（2）：96-107。[7] Yamauchi K，Kasuya Y，Kuroda F，Tanaka K，Tsuyusaki J，Ishizaki S，et al.博来霉素注射后CD69缺陷小鼠肺部炎症和纤维化的减轻呼吸研究2011;12（1）：131。[8] Hagiwara SI，Ishii Y，Kitamura S.雾化吸入N-乙酰半胱氨酸减轻博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化。美国呼吸重症监护医学杂志2000;162（1）：225-31。[9] [10] Atzori L ， Chua F ， Dunsmore SE ， Willis D ， Barbarisi M ， McAnglingRJ，et al. 使用血红素加氧酶抑制剂锌-次卟啉IX-2，4-二乙二醇减轻博莱霉素诱导的小鼠肺纤维化。胸2004;59（3）：217-23。[10] [10] BittoA，Squadito F，Irrera N，Pizzino G，Pallio G，Mecchio A，et al.Flavocoxid，一种治疗炎症的营养药物。Mediators Inflamm2014;2014：790851.[11] 李国忠，李国忠. 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