伊朗偏头痛易感性与铁调节蛋白基因变异：病例对照研究

埃及基础与应用科学杂志4（2017）123完整文章铁调节蛋白-1（G-32373708 A）与-2（G-49520870 A）基因变异与伊朗东南部偏头痛易感性：一项病例对照研究Nourollah Ramroodia，Mehdi Jahantighb，Tooba Nakhzari-Khodakheirc，Nasrin Ranjbard，Nima Sanadgole，f，a伊朗扎黑丹扎黑丹医科大学医学院神经病学系b伊朗扎黑丹扎黑丹医科大学医学院病理学系c伊朗扎黑丹d伊朗扎黑丹扎黑丹医科大学医学院生物化学系伊朗扎布尔扎布尔大学理学院生物系f伊朗扎黑丹伊斯兰阿扎德大学扎黑丹分校青年研究人员和精英俱乐部阿提奇莱因福奥文章历史记录：2016年10月21日收到2017年2月10日收到修订版，2017年在线发布2017年保留字：偏头痛铁调节蛋白单核苷酸多态性A B S T R A C T偏头痛是一种慢性神经系统疾病，其特征是经常性中度至重度头痛，通常与神经炎症有关。铁调节蛋白（IRP）调节铁代谢基因的表达并控制胞浆铁浓度以优化细胞铁利用率。本研究旨在调查伊朗患者中IRP-1和-2单核苷酸多态性（SNP）与偏头痛易感性之间的可能关联。在一项前瞻性病例对照研究中，我们研究了190名偏头痛患者和200名健康对照的血液样本，以分析基因变异。分别采用PCR-ASO和PCR-RFLP方法对IRP-1和IRP-2的SNP进行基因分型：G-32373708 A（rs 867469）和G-49520870 A（rs 17483548）使用SPSS 21.0版（SPSS，Chicago）和SNPStats 1.14.0版进行统计分析在IRP SNPs中，rs 867469（GG基因型，校正OR= 3.82，95%CI = 1.131-12.953，P = 0.031）和rs 17483548（GG基因型，校正OR = 3.82，95%CI = 1.131基因型，校正OR = 19.12，95%CI = 3.69偏头痛患者中最常见的基因型是GA，SNP rs867469（58%）和rs17483548（68%）。rs 17483548单核苷酸多态性（GG基因型，校正OR = 0.10，95% CI = 0.013-0.745，P = 0.025）与不同类型偏头痛（无先兆和有先兆）的发生有显著相关性我们的数据表明G-32373708 A-IRP-1和G-49520870 A-IRP-2多态性中的G/G基因型可能与偏头痛风险增加相关。因此，除了其他因素外，IRP-1和IRP-2SNPs可能在偏头痛的发病中起关键作用。©2017 曼 苏 拉 大 学 。 由 爱 思 唯 尔 公 司 制 作 和 主 持 这 是 一 篇 基 于 CC BY-NC-ND 许 可 证 的 开 放 获 取 文 章（http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/）。1. 介绍偏头痛是一种剧烈而疼痛的头痛，伴有感觉警告，是一个对患者和社会都有重大影响的公共卫生问题[1]。偏头痛的两个主要亚类是普通偏头痛（无先兆）和经典偏头痛（有先兆或神经症状）[2]。由于大约一半的偏头痛患者（偏头痛患者）不寻求医疗照顾，并且没有经济，社会或种族限制，*通讯作者：伊朗扎布尔扎布尔大学理学院生物系电子邮件地址：n. uoz.ac.ir，sanadgol. gmail.com（N。Sanadgol）。很难精确地确定社区中的疾病流行率[3]。似乎约有15%至16%的女性和5%至9%的男性患有偏头痛，其患病率在全球30-49岁之间最高偏头痛病因是多因素的，涉及各种遗传和环境因素，但科学家认为其病理生理学的三个重要机制包括：炎症、神经和心血管损伤[5，6]。细胞和分子关联研究可能指向介导偏头痛疾病并使其管理成为可能的新分子。根据神经炎症理论，在偏头痛中，离子通道（Na2+ ，Ca2+，K2+）和炎性介质在脑膜感觉神经中激活，刺激这些区域的疼痛受体[7，8]。它http://dx.doi.org/10.1016/j.ejbas.2017.02.0032314- 808 X/©2017曼苏拉大学。由爱思唯尔公司制作和主持这是一篇基于CC BY-NC-ND许可证的开放获取文章（http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/）。可在ScienceDirect上获得目录列表埃及基础与应用科学杂志杂志主页：www.elsevier.com/locate/ejbas124N. Ramroodi等人 /埃及基础与应用科学杂志4（2017）123-128-研究表明，头痛是缺铁的常见症状，长期头痛甚至可能成为慢性病。另一方面，缺铁也会导致贫血。除了炎性细胞因子的变化外，还报道了缺铁性贫血和偏头痛发作之间的关系，但在相关机制上存在相互矛盾的结果[9铁离子的积累与偏头痛发作的频率有关，在慢性偏头痛中最大，其中每天发作[15]。已知铁离子的减少使线粒体表面劣化，并降低呼吸链和神经元能量底物的效率铁和其他微量元素广泛存在于中枢神经系统（CNS）的致敏过程中，并可能参与痛阈调节[16]。铁调节蛋白（IRP），也称为铁响应元件结合蛋白（IRE-BP），通过与mRNA中的铁响应元件结合来调节铁代谢IRP-1或乌头酸酶-1（ACO-1）具有乌头酸酶活性，并催化柠檬酸盐转化为异柠檬酸盐，它们是铁-硫蛋白，需要4Fe-4S簇才能具有酶活性[17]。IRP-2在肠和脑中表达更多，在其他区域中的丰度低于IRP-1，并且没有ACO活性[18人IRP-1基因位于染色体9p21.1，IRP-2基因位于染色体15q25.1。到目前为止，在IRP基因中已经发现了几种等位变异多态性（http://www.ncbi.nlm.nih.gov/snp），其中g.32373708G > A-IRP-1 （ rs 867469 ） 加 g.49520870 G> A-IRP-2 （ rs17483548）更为重要。为了了解IRP作为重要的铁控制者的可能作用，我们分析了患有两种不同疾病亚型的偏头痛患者的IRP的强制性多态性，并将其与健康对照进行了比较。我们知道，这是第一个流行病学研究，探讨IRP-1和IRP-2的SNPs偏头痛人群在世界各地2. 材料和方法2.1. 患者和样本该研究在扎黑丹医科大学医学研究委员会获得伦理批准，并使用来自偏头痛患者（N = 190，年龄：13至66岁）的临床样本进行，这些患者于2013年8月至2014年2月在伊朗扎黑丹的Ali- ebnAbitaleb医院同期从自愿献血者中选择无任何炎症、神经系统疾病、偏头痛和特定全身性疾病的健康对照（HC）（N = 200，年龄：15-75岁）。根据国际头痛分类的标准化标准诊断偏头痛[21]。如果患者患有贫血相关疾病或接受铁补充剂，则将其排除。患者在无先兆（N = 112，76名女性和36名男性）和有先兆（N = 78，56名女性和22名男性）偏头痛亚型的两个定义组中调整。 所有患者均被告知本研究并自愿参与，并获得书面同意。这项工作是根据世界医学协会（赫尔辛基宣言）关于人体实验的伦理守则进行的2.2. 血液采集和DNA提取从所有受试者采集全血（IOmL）样品并收集在分离管（含有EDTA，0.5M）中，并在20 °C下以150g（重力）离心15分钟，然后将血清在20 °C下储存在无菌塑料管中用于DNA提取。使用DNA提取试剂盒（DIAtomDNAPrep.，莫斯科，俄罗斯）根据制造商指导。DNA 质量提取物进行电泳分析通过NanoDrop 获得约60ng/ml的DNA浓度，并且可接受约1.7至1.9的260/280 nm的比率[22]。2.3. IRP-1基因分型SNP的选择是基于它们在调控区中的位置进行的，所述调控区通常含有启动子[23]。通过等位基因特异性寡核苷酸-PCR方法（ASO-PCR）分析g.32373708 G > A-IRP 1（rs 867469）单核苷酸多态性（SNP）[24，25]。PCR扩增在20 μ l终体积中进行，该终体积含有10μ l主混合物（TAKARA，Tokyo，Japan）、0.7 μ l（10 pmol）每种引物、2 μ L模板DNA和6.6 μl无DNA酶的水。扩增在Bio-RadThermal Cycler中进行，初始变性步骤在95 °C下进行5 min;随后在95 °C下进行35个循环，30 s，56 °C下进行35 s，72 °C下进行30 s，最后在72 °C下进行5 min延伸。设计用于检测rs 867469 SNP的引物如下：等位基因特异性正义寡核苷酸50-TGCACACCT GCAAAGAAG-3050-TGCACACCTGCAAAG AAA-3 0用于A变体和反义寡核苷酸50-CTAGA TGAAAGGTGG TGAGG-30.的PCR通过8%聚丙烯酰胺凝胶电泳检查产物（237 bp）的大小和纯度，用溴化乙锭染色并在紫外光下观察。2.4. IRP-2基因分型SNP的选择是基于它们在调控区中的位置进行的，所述调控区通常含有启动子[23]。 通过限制性片段长度多态性-PCR方法（RFLP-PCR）分析g.49520870G > A-IRP-2（rs 17483548）单核苷酸多态性（SNP）[24，25]。在20 μ l终体积中进行PCR扩增，所述终体积含有10 μ l主混合物（TAKARA，Tokyo，Japan）、0.7 μ l（10 pmol）每种引物、2 μ L模板DNA和6.6 μl无DNA酶的水。使用以下引物进行扩增，其中初始变性步骤在95 °C下持续5分钟;随后在95 °C下持续30秒、60 °C下持续35秒和72 °C下持续30秒进行35个循环，最终延伸在72°C下持续5分钟：正义引物50-CCCCCACTTGAAAAC ACG-30和反义引物50-AGATCGTCG GACAGGAAAAC-30。通过1.5%琼脂糖凝胶电泳检查PCR产物（360 bp）的大小和纯度。 最终体积为20L，包括2 L10×缓冲液，0.5 L酶，7升PCR产物，10.5将IL双蒸水用于所有扩增产物，在37 °C过夜，并将10μL样品上样用于扩增。营养电泳rs2243250扩增产物的AflII（Thermo Scientific）酶切图谱GG为183 bp和177 bp，GA为183 bp、177 bp和360 bp，AA为360 bp。2.5. 统计分析使用SPSS 21.0版（SPSS，Chicago）和SNPStats 1.14.0版进行所有统计分析。病例对照状态和每个多态性之间的关联，通过比值比（OR）及其相应的95%置信区间（CI）进行测量，使用无条件多元logistic回归模型进行估计，包括性别和年龄调整和不调整。对于所考虑的任何SNP，用X2检验来检验Hardy-Weinberg平衡（HWE）。根据从不吸烟者和吸烟者（包括当前和既往）对吸烟习惯进行分类。还根据年龄、性别、种族和迁移进行了分层分析。为了研究可能的基因-环境相互作用，根据性别、种族、年龄、迁移和性别，将患者和对照组分为亚组。N. Ramroodi等人 /埃及基础与应用科学杂志4（2017）123-128125表1偏头痛患者和对照受试者入组研究的人口统计学分布。特性对照组（n = 200）N（%）病例（n =190）N（%）性别（男/女）第68（34）/132（66）号决议42（22）/148（78）年龄（岁）50一百七十四（八十七）一百八十（九十五）年龄（岁）≥50二十六（十三）第十条（五）22%的患者和34%的对照组为男性，而78%的患者和66%的对照组为女性。此外，我们探索了性别、年龄、吸烟、种族和移民与偏头痛风险之间的关系，与基因型无关（表2）。我们的结果表明，在对照组和患者中，性别、年龄、吸烟、种族和迁移之间没有显著差异（表2）。因此，年龄和性别各不相同-表（具有较低的P值）在多变量中进一步调整平均值± SD范围35.1 ± 12.215–7531.7 ± 10.1713–66使用logistic回归模型控制可能的混杂因素吸烟（是/否）80（40）/120（60）88（46）/102（54）种族（分析/其他）144 （ 72 ）/56 （ 28 ） 146 （77 ）/44（ 23 ）移 民 （ 是 /否 ） 96 （ 48 ） /104（52）72（38）/118（62）smoking.在根据性别、种族、年龄、迁移和吸烟对个体进行分层后，还进行了非条件logistic回归分析，以评估基因型与偏头痛风险之间的关联。所有检验的显著性水平设定为P≤3. 结果3.1. 人口统计学分析和与基因型无关的偏头痛风险本研究中涉及的偏头痛患者和无偏头痛对照患者的特征见表1。患者的平均± SD年龄为31.7 ± 10.17岁（范围13多态性的主要影响因素3.2. IRP-1单核苷酸多态性（rs 867469 G/A）与偏头痛的关系HC组中IRP-1基因G/G、G/A和A/A基因型分别为9%、IRP-1 rs867469（G/A）等位基因频率在HC中分别为49.5%（G）、50.5%（A），在HC中分别为60.5%（G）、39.5%（A）。在偏头痛患者中，分别（表3）。关于IRP-1 rs 867469（G/A）的基因型频率，病例组和对照组均与HWE不一致。rs 867469（G）IRP-1等位基因频率在患者组和对照组中的分布差异有统计学意义（粗OR =1.56，P= 0.029）。IRP-1GG基因多态性在两组间的分布差异有统计学意义（粗OR = 3.33，P= 0.040）。 另一方面，GG基因型增加了偏头痛的风险（校正OR = 3.82，P= 0.031）。总之，在偏头痛患者中，rs867469 G/A-IRP 1 SNP的G等位基因增加了该疾病的风险（校正OR =1.61，P= 0.023），而A等位基因降低了这种风险（表3）。 AA和AG基因型可能是表2偏头痛的风险与性别、年龄、吸烟、种族和移民有关吸烟分类资料、频率、检验结果采用独立样本t检验进行比较.=频率，OR =比值比，CI =置信区间，N =数量。表3偏头痛患者和非偏头痛患者（对照组）中g.32373708 G/A-IRP-1多态性基因型和等位基因频率的分布IRP-1（rs867469）对照组（n =200）情况（n = 190）粗OR（95%CI）粗P值调整ORa（95% CI）调整P值aAA，否（%）二十（十）20（10.5）1–1–AG，否（%）一百六十二（八十一）一百一十（五十八）0.67（0.265-1.740）0.4210.63（0.242-1.642）0.345GG，否（%）第十八章（九）P= 0.00160（31.5）3.33（1.055-10.530）0.0403.82（1.131-12.953）0.031A等位基因101（50.5）75（39.5）1-1–G等位基因99（49.5）P= 0.029115（60.5）1.56（1.047-2.338）0.0291.61（1.068-2.428）0.023CI：置信区间，OR：比值比。显著P值以粗体表示。a按年龄和性别调整。特性对照组（n = 200）N（频率）病例（n =190）N（频率）OR（95%CI）p值性别男性68（0.34）42（0.22）0.55（0.291-1.042）0.067女性132（0.66）148（0.78）1.81（0.960-3.433）0.067年龄（岁）50岁174（0.87）180（0.95）2.69（0.92-7.862）0.071年龄≥50岁26（0.13）10（0.05）0.37（0.1270.071曾经（现任，前任）80（0.40）88（0.46）1.29（0.73-2.28）0.37从未120（0.60）102（0.54）0.77（0.438-1.364）0.37种族波斯142（0.71）146（0.77）1.35（0.712-2.579）0.35其他58（0.29）44（0.23）0.73（0.388-1.404）0.35迁移是的96（0.48）72（0.38）0.66（0.374-1.170）0.15没有104（0.52）118（0.62）1.51（0.855-2.677）0.15126N. Ramroodi等人 /埃及基础与应用科学杂志4（2017）123-128表4偏头痛患者和非偏头痛患者（对照组）中g.49520870 G/A-IRP-2多态性基因型和等位基因频率的分布IRP-2（rs17483548）对照组（n =200）情况（n = 190）粗OR（95%CI）粗p值调整ORa（95% CI）调整P值aAA，否（%）16（8.0）12（6.3）1–1–AG，否（%）154（77.0）130（68.4）2.11（0.77-5.752）0.1440.63（0.242-1.642）0.133GG，否（%）30（15.0）P= 0.00248（25.3）7.5（2.171-25.906）0.00119.12（3.69-99.05）0.001A等位基因92（46.0）71（37.4）1–1–G等位基因108（54.0）119（62.6）1.42（0.953-2.140）0.0851.51（0.998-2.288）0.051P= 0.08CI：置信区间，OR：比值比。显著P值以粗体表示。a按年龄和性别调整。表5不同偏头痛亚型患者中g.32373708 G/A-IRP-1和g.49520870 G/A-IRP-2多态性的基因型和等位基因频率分布IRP-1（rs867469）有先兆，无（%）（n = 78）无先兆，无（%）（n= 112）OR（95%CI）p值AA，否（%）8（10.3）12（10.7）1–AG，否（%）34（43.6）76（67.9）1.49（0.372-5.973）0.573GG，否（%）36（46.2）24（21.4）0.44（0.103-1.915）0.277IRP-2（rs17483548）P= 0.033AA、无（%）AG、无（%）GG、无（%）8（7.1）4（5.1）1–96（85.7）34（43.6）1.41（0.237-8.416）0.7058（7.1）P0.00140（51.3）0.10（0.013-0.745）0.025CI：置信区间，OR：比值比。 显著P值以粗体表示。GG基因型可能是偏头痛的危险因素。另外，在该人群中，与偏头痛亚型和IRP-1 rs 2070874（G/ A）SNP没有显著关联（表5）。3.3. IRP-2单核苷酸多态性（rs 17483548 G/A）与偏头痛的关系HC组中IRP-2基因G/G、G/A和A/A基因型分别为15%、77%和8%，而偏头痛组分别为25.3%、68.4%和6.3%。IRP-2 rs 17483548（G/A）等位基因频率分别为54%（G）、64%（A）和62.6%（G），37.4%（A）偏头痛患者（表4）。关于IRP-2 rs 17483548（G/A）的基因型频率，病例组和对照组均与HWE不一致。rs 867469中IRP-2等位基因频率的分布在患者和对照之间没有显著差异（表4）。IRP-2 AG多态性的分布在P= 0.144/校正OR = 0.63，P=0.133）。IRP-2GG基因多态性在患者组和对照组中的分布差异有统计学意义（粗OR = 7.5，P= 0.001/校正OR = 19.12，P= 0.001）。另一方面，GG基因型增加了偏头痛的风险AA和AG基因型可能是偏头痛的保护性因素，GG基因型可能是偏头痛的危险因素。另外，在该人群中，IRP-2 rsl 7483548（G/A）SNP的GG基因型与偏头痛亚型显著相关（表5）。4. 讨论偏头痛是一种严重的神经系统疾病，会导致头部某个区域强烈的悸动或脉动疼痛，并可能伴有恶心、呕吐和极度恐惧症[2]。一些研究使用候选基因方法来阐明神经性疼痛表型的遗传贡献;然而，数据有限且不一致[26，27]。偏头痛的遗传背景由共同或重叠的途径组成，并且负责基因可以提供关于可以解释其与偏头痛共病的病理生理机制的见解[28，29]。来自77个不同SNPs的大群高加索女性（n= 25，713）的数据表明，某些炎症介质包括TNF-αrs673的变体之间存在关联（OR = 0.52，95%CI = 0.30CCR2 rs1799864（OR = 1.12，95%CI = 1.03rs1800469(OR= 0.93，百分之九十五CI = 0.89-0.89，P=0.009），NOS3rs3918226(OR= 1.13，百分之九十五CI = 1.01-1.27，P= 0.04），和IL-9rs 2069885（OR = 1.12，95%CI = 1.02[30]第30段。虽然偏头痛的发病机制尚未完全被发现，但越来越多的分析观点认为，氧化应激和自由基损伤可能会加重或加重偏头痛的易感性[31，32]。在一项临床研究中，服用抗氧化剂补充剂的偏头痛患者在偏头痛治疗中显示出渐进性作用，这表明氧化应激在某种程度上参与了其发病机制[33]。铁被认为是与影响CNS的破坏性活动相关的氧 化 自 由 基 的 可 能 来 源 [34] 。 虽 然 铁 可 以 通 过 Haber-Weiss 和Fenton反应引起氧化性组织损伤，但它也是许多代谢途径所必需的一些研究已经发现，铁不平衡负荷可能在偏头痛的发病机制中起着至关重要的作用[12，35]。在哺乳动物中，已经识别出两种同源IRPIRP-1是一种多功能蛋白质，作为铁响应元件（IRE）结合蛋白，通过连接mRNA抑制翻译来控制铁代谢[36]。它也作为乌头酸酶的细胞质同种型。柠檬酸酶是铁-硫蛋白，并且需要4Fe-4S簇用于其酶功能，其中它们催化柠檬酸盐转化为异柠檬酸盐[37]。IRP-2也称为IREB-2（铁响应元件结合蛋白2），与IRP-1具有 79%的相似性，但不具有顺乌头酸酶活性[38]。在缺铁的情况下，IRP与mRNA的5 ′UTR中的IRE结合，如铁蛋白重链和轻链中的IRE，并抑制铁蛋白的表达。N. Ramroodi等人 /埃及基础与应用科学杂志4（2017）123-128127-IRP与mRNA结合，包括3个UTR中的IRE，如TfR-1和DMT-1，这导致RNA稳定性增加。相反，在铁超载的情况下，IRP与IRES的结合减少。因此，在缺铁情况下，IRP上调与增强铁摄取相关的基因，而在铁过载情况下，IRE上调与铁水平储存相关的基因[39]。在某些病理情况下，由于铁负荷过重而导致神经系统疾病，这一事实强调了平衡铁稳态的重要性动物中IRP-1和IRP-2的靶向缺失已经证明它们是主要的生理铁传感器[40]。一些数据证实，多个基因与不同人群中 偏 头 痛 的 扩 展 有 关 [41 ， 42] 。 与 其 他 神 经 系 统 疾 病 相 关 ，Deplazes等人，表明IRP-2基因外显子21的突变（非同义多态性，I888 V）和启动子区的88 C> T多态性）不是与黑质铁蓄积相关的帕金森病的常见原因在这项研究中，我们首次关注偏头痛患者的IRP，以检验偏头痛可能与铁失衡有关的假设因此，我们的研究结果首次提供了证据，增强了我们对偏头痛如何与这些IRP基因变异相关的理解。我们评估了IRP-1基因中g.32373708 G > A多态性和IRP-2基因中g.49520870 G> A多态性是否对偏头痛风险的影响据我们所知，g.32373708G > A-IRP 1多态性和g.49520870 G > A-IRP 2多态性在偏头痛患者中尚未研究。我们观察到偏头痛的发病率与IRP 1和IRP-2 SNP的G/G基因型的出席呈正我们的研究表明，年龄，性别，种族和吸烟因素与偏头痛无关在本研究中，病例组和对照组的基因型频率与HWE不一致，因此我们认为这一问题是我们研究的重要限制目前，我们对这些数据有合理的解释，说明环境因素至少在这一人群中可能对偏头痛的发病有影响然而，为了获得更好的结果并确定不同环境因素在偏头痛易感性中的作用，类似的研究招募了更大的样本量，并由来自不同国家的其他种族组成，可能有助于证实我们的发现，因此这些结果应被视为初步结果。结论：IRP基因多态性可能与偏头痛的发生有关。这些发现可能有助于增加偏头痛的病因。利益冲突所有作者均声明他们没有财务披露或利益冲突。确认我们非常感谢Ali-ebn Abitaleb医院神经科的医护人员提供患者支持和本研究中分析的样本。这项研究由伊朗扎黑丹医学大学资助。引用[1] Goadsby PJ.偏头痛诊断和治疗的最新进展。BMJ 2006;332（7532）：25[2] Lipton RB，Bigal ME，Steiner J，et al.原发性头痛的分类。神经病学2004;63（3）：427-35。[3] Victor TW，Hu X，Campbell JC，et al.美国偏头痛的年龄和性别患病率：寿命研究。头痛2010;30（9）：1065-72。[4] Stovner LJ，Hagen K.头痛疾病的患病率负担和费用。《神经学新观点 》 2006;19（3）：281-5。[5] Mulder EJ，Van Baal C，Gaist D，et al.遗传和环境对偏头痛的影响：六个国家的双胞胎研究。TwinResearch 2003;6（5）：422-31.[6] Pietrobon D，Moskowitz MA.偏头痛的病理生理学。Annu Rev Phys2013;75：365-91.[7] Weeber C，Moskowitz MA.偏头痛是一种炎症性疾病。神经病学2005;64（10增刊2）：S9-S15。[8] 杨J，杜索尔G. 离子通道和偏头痛。 头痛2014;54（4）：619-39。[9] Vukovic′-Cvetkovic′V，PlavecD，Lovrencic′-HuzjanA，etal.缺铁性贫血与月经性偏头痛有关吗？一项评价月经期偏头痛患者临床特征的观察性研究的事后分析。ActaClin Croat 2010;49（4）：389-94.[10] Fallah R，Zare Bidoki S，Ordooei M.硫酸亚铁治疗5-15岁缺铁偏头痛儿童头痛的疗效评价。 Iran J Ped Hematol Oncol 2016;6（1）：32-7.[11] Gür-Özmen S，Karahan-Özcan R.缺铁性贫血与月经性偏头痛相关：一项病例对照研究Pain Med 2015. pnv029。[12] 高晓松，王晓松，等.急性偏头痛患者血清中微量元素和重金属含量的变化.中国医学科学院学报，2001，13（1）：133 - 134. 《巴基斯坦医学杂志》2015;65（7）：694-7。[13] PamukGE，TopMS，，UyanbukMS，etal. 缺铁贫血和偏头痛有关吗？焦虑和抑郁有什么作用吗？Wien Klin Wochenschr2016;128（8）：576-80.[14] 放 大 图 片 作 者 ： Gupta R ， Lahan V ， Goel D. 血 清 铁 可 能 与 偏 头 痛 无 关 。AnnIndian Acad Neurol 2013;16（3）：462.[15] 韦尔奇KMA。偏头痛脑中的铁：一个弹性假说。头痛2009;29：283-5.[16] Prashanth L，Kattapagari KK，Chitturi RT，et al. 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