gst融合蛋白蛋白纯化

GST融合蛋白（Glutathione S-transferase Fusion Protein）是一种生物化学技术中常用的方法，用于蛋白质纯化。它通过将目标蛋白基因与谷胱甘肽-S转移酶（GST）基因连接起来，形成融合蛋白。GST在细胞表达系统中通常有很高的表达水平，并且对 GST 酶活性的底物，如GST解偶联剂，有高亲和力，这使得利用这种特性来捕获、纯化目的蛋白变得简单。

以下是GST融合蛋白蛋白纯化的步骤概述：
1. **基因克隆**：将目标蛋白基因插入到包含GST标签的载体上，构建重组质粒。
2. **宿主细胞转染**：将重组质粒导入适合表达的大肠杆菌或其他宿主细胞中。
3. **蛋白表达**：在适当条件下培养细胞，使其大量生产融合蛋白。
4. **亲和层析**：由于GST与解耦剂之间的高亲和力，可以使用GST特异性凝胶或介质洗脱含有融合蛋白的细胞裂解液。
5. **裁剪分离**：使用特定酶（如PreScission protease）切开融合部分，释放出目标蛋白。
6. **进一步纯化**：收集剪切产物并进行离子交换柱、疏水层析等步骤，提高纯度。
7. **质量验证**：通过SDS-PAGE和质谱分析确认纯化得到的是目标蛋白。