RT-qPCR测定基因表达

RT-qPCR（实时定量聚合酶链反应，Real-Time Quantitative Polymerase Chain Reaction），是一种用于测定特定基因表达水平的实验技术。它结合了RT-PCR（逆转录PCR）和实时PCR技术，能够对特定的RNA样本进行定量分析。RT-qPCR的一般步骤如下：

1. RNA提取：从细胞或组织样本中提取总RNA。
2. 逆转录：将RNA转录成cDNA。在这个过程中，通常使用逆转录酶和特定的引物（如随机引物或特异性引物）。
3. PCR扩增：使用特异性的引物对目的基因片段进行PCR扩增，通过荧光标记的探针或染料监控扩增过程。
4. 实时监测：在PCR扩增的每一个循环过程中，通过检测荧光信号的变化来实时监测扩增产物的增加。
5. 数据分析：通过特定的软件对扩增曲线进行分析，得到目的基因的Ct值（循环阈值），并使用标准曲线法或比较Ct值法（ΔΔCt法）来定量基因的表达水平。

RT-qPCR技术具有高灵敏度、高特异性、操作简便和结果可重复性强等特点，因此广泛应用于生物学和医学研究中，用于研究基因的表达调控、疾病诊断、疗效评价等方面。