您好！请问抑制基因操作用“敲减”还是“敲除”表达？siRNA抑制不同的基因载体是否相同？谢谢！

敲减和敲除都可以用于抑制基因操作，但它们的具体实现方式不同。敲减是通过RNAi技术，使用siRNA分子靶向特定基因的mRNA，从而抑制该基因的表达。而敲除则是通过基因编辑技术，直接切除或替换目标基因的DNA序列，从而达到抑制该基因表达的效果。至于siRNA抑制不同基因载体是否相同，这取决于所使用的siRNA分子的设计和靶向选择。

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植物基因敲除是怎么敲除的

植物基因敲除通常是通过CRISPR/Cas9技术来实现的。CRISPR/Cas9是一种基因编辑技术，它可以针对目标基因的DNA序列进行精确的切割和编辑。通过设计合适的引物，CRISPR/Cas9可以精确地把目标基因的DNA序列切断，从而实现基因敲除的目的。经过CRISPR/Cas9编辑的植物细胞会的基因组会相应地发生改变，导致目标基因不能正常表达，从而实现基因敲除的效果。

基因稳定敲除细胞株构建

构建基因稳定敲除细胞株的步骤与构建稳定敲除细胞株的步骤类似，但是需要将sgRNA针对的基因区域设计为包含启动子、外显子和内含子等区域，以确保完全敲除目标基因。

基因稳定敲除细胞株构建步骤如下：

1.设计合适的sgRNA：针对目标基因设计合适的sgRNA，确保具有高的敲除效率和特异性。

2.合成sgRNA和Cas9蛋白：将sgRNA和Cas9蛋白进行合成或表达。

3.转染：将sgRNA和Cas9蛋白导入目标细胞中，一般采用质粒转染或病毒载体转染。

4.筛选：经过转染后，需要对细胞进行筛选，筛选出成功敲除目标基因的细胞克隆。

5.鉴定：对成功筛选出的细胞克隆进行鉴定，使用PCR、Western blot等方法检测目标基因的敲除效果。

6.扩增：对成功鉴定的细胞克隆进行扩增，得到基因稳定敲除细胞株。

需要注意的是，在设计sgRNA时，需要考虑基因可能存在的剪切变异或启动子区域的甲基化等情况，以确保敲除效率和特异性。同时，在筛选过程中，也需要考虑可能存在的假阳性或假阴性情况，确保鉴定结果的准确性。