酿酒酵母中人白介素-6基因的表达质粒构建与分泌表达

"人白介素-6表达质粒的构建及在酿酒酵母中的表达 (2003年)" 这篇文章是一篇发表于2003年12月的自然科学论文，主要探讨了人白细胞介素-6（hIL-6）基因在酿酒酵母中的表达。作者通过构建含有哺乳动物细胞信号肽的hIL-6基因片段，并将其插入大肠杆菌-酵母穿梭型质粒pYES2中，生成了表达质粒pYES2-hIL-6。该研究的独特之处在于利用hIL-6基因自身的前导序列作为分泌信号肽，旨在实现hIL-6在酵母细胞内的分泌表达。 在实验过程中，科研人员首先将pYES2-hIL-6表达质粒转化到酿酒酵母细胞DBY747中。接着，他们使用含2%乳糖的YP培养基培养转化后的酵母细胞，当细胞密度达到OD600=1.0时，用2%的半乳糖进行诱导表达。实验结果显示，hIL-6成功地在酵母细胞的培养上清中被分泌出来，表明这一策略有效地促进了hIL-6在真核细胞内的表达和分泌。 文章中提到，虽然大肠杆菌表达系统在生产hIL-6方面的技术已经相当成熟，但使用酵母等真核细胞作为表达宿主的研究相对较少，且未见利用hIL-6编码前序列作为信号肽在酵母中分泌表达hIL-6的报道。因此，这项工作在酵母表达系统中的探索具有一定的创新性。 实验材料包括大肠杆菌菌株JM109、酵母细胞DBY747以及质粒pYES2和pCMVP-hIL-6，后者由日本九州大学的Shirahada教授提供。实验方法涉及质粒的构建、酵母细胞的转化以及诱导表达等步骤，这些步骤遵循了标准的分子生物学技术。 这篇论文详细描述了一种新型的基因表达策略，即在酿酒酵母中利用hIL-6基因的自然信号肽实现其分泌表达，为真核细胞表达系统的研究提供了新的思路，对于生物工程尤其是蛋白质生产领域具有重要意义。