EMA-LAMP技术：快速检测单增李斯特菌死活细胞

"EMA-LAMP方法快速鉴别检测单增李斯特菌 (2012年)" 本文介绍了一种名为EMA-LAMP（叠氮溴化乙锭结合环介导等温扩增）的新型生物检测技术，该技术由吕淑霞、徐彬等人在2012年开发，用于快速鉴别和检测单增李斯特菌的死活细胞。单增李斯特菌是一种常见的食源性病原体，可能导致严重的人类疾病，因此快速准确的检测至关重要。 LAMP（Loop-Mediated Isothermal Amplification）技术是一种等温DNA扩增方法，通过设计特定引物，可以在恒温条件下高效地扩增目标DNA序列。而在EMA-LAMP方法中，作者加入了EMA（叠氮溴化乙锭）这一化学物质，它能穿透受损的细胞膜并与DNA结合。当受到特定波长光的照射后，EMA会引发光解反应，破坏已死亡细胞中的DNA，但不影响活细胞的DNA。 研究者针对单增李斯特菌的hly基因（编码溶血素的基因）设计了四条特异性引物，这使得EMA-LAMP法能对hly基因的六个区域进行检测。实验条件设定为63℃反应1小时。通过优化实验参数，他们发现最佳的EMA曝光时间为20分钟，以确保EMA能充分进入死细胞并与DNA结合。同时，确定了10μg/mL是不影响活菌细胞DNA扩增的最大EMA质量浓度，而4.0μg/mL是抑制死菌细胞DNA扩增的最小EMA质量浓度。这表明EMA-LAMP具有区分活菌和死菌的能力。 此外，该方法的检测灵敏度极高，活菌细胞的检出限可低至20CFU/mL。这一特性使得EMA-LAMP在食品安全监测和疾病控制领域具有巨大潜力，可以更快速、更准确地识别食品或环境样本中存活的单增李斯特菌，从而采取及时的预防和控制措施，降低公共卫生风险。 EMA-LAMP方法结合了EMA的细胞死亡标记和LAMP的高灵敏度扩增，为单增李斯特菌的检测提供了一个创新且高效的解决方案。这一技术的应用不仅有助于提升食品安全标准，也可能推动其他微生物检测方法的改进和发展。