人包皮皮片中角质形成细胞和成纤维细胞的原代培养方法

"人角质形成细胞和成纤维细胞的原代培养" 这篇论文详细介绍了如何进行人角质形成细胞和成纤维细胞的原代培养过程，这是皮肤生物学和组织工程领域的重要研究技术。角质形成细胞是皮肤的主要构成成分之一，负责皮肤屏障的形成和维护；而成纤维细胞则在伤口愈合、胶原蛋白生产等方面起关键作用。 作者李晨、赵天赐等采用手术废弃的包皮皮片作为实验材料，通过 Dispase II 酶处理来分离皮片的表皮层和真皮层。Dispase II 是一种温和的二糖酶，能够特异性地分解上皮细胞间质，而不损伤细胞本身，因此常用于分离表皮层。 分离得到的表皮层和真皮层随后用胰酶消化，以释放细胞，形成单细胞悬液。胰酶含有能分解细胞间质蛋白质的酶，可帮助细胞从组织块中脱离出来。消化后的细胞分别在两种不同的培养基中培养，一种是常规的含血清的 DMEM 培养基，另一种是无血清培养基。实验结果显示，无血清培养基对角质形成细胞的纯度和活力有更好的支持效果，这可能是由于减少了血清中的未知生长因子和蛋白对细胞纯度的干扰。 使用光镜对培养的细胞进行观察，可以识别出典型的角质形成细胞和成纤维细胞的形态特征。此外，CCK-8 法被用来检测细胞活力，这是一种基于四唑盐WST-8的细胞增殖和毒性检测方法，通过检测细胞代谢产生的橙红色染料的量来评估细胞活力。 这项工作成功建立了人角质形成细胞和成纤维细胞的原代培养方法，对于后续的皮肤生物学研究，如细胞功能、信号传导机制以及皮肤疾病模型的构建具有重要意义。同时，这种技术也为皮肤创伤修复和组织工程提供了实验基础。 关键词：角质形成细胞，成纤维细胞，原代培养， Dispase II，胰酶，无血清培养基，细胞活力检测，皮肤生物学。 该论文属于首发论文，由作者们在中国医科大学基础医学院进行，得到了中国医科大学大学生创新创业训练计划的资助。通讯联系人是张殿宝讲师，专注于皮肤创面修复的研究。