牛奶中庆大霉素检测：Elispot法的应用

"这篇论文是关于使用Elispot assay技术检测牛奶中庆大霉素含量的研究。研究人员通过制备GM免疫抗原获取抗GM多克隆抗体，并将检测抗原点阵在PVDF膜上，利用抗原和样品中的庆大霉素（GM）竞争结合抗体，然后通过酶标结合物催化底物显色来判断结果。这种方法的检测限为10ng/mL，检测时间只需40分钟，能实现半定量检测。试纸条在4℃下可密封保存90天保持有效性，且与多种结构类似物无交叉反应，结果与酶联免疫法一致。" Elispot assay，全称为Enzyme-linked ImmunoSpot Assay，是一种灵敏且高通量的免疫检测技术，常用于检测单个细胞分泌的特异性蛋白质或抗体。在本研究中，Elispot assay被用来检测牛奶中的庆大霉素，这是一种广谱抗生素，其残留可能对人体健康产生不良影响。研究人员首先通过GM免疫抗原制备出抗GM多克隆抗体，这是检测的关键步骤，因为抗体需要能够特异识别庆大霉素。 PVDF膜，即聚偏氟乙烯膜，因其良好的化学稳定性和生物相容性，常用于生物分析实验中，如蛋白分离、免疫印迹等。在Elispot assay中，PVDF膜被用作固相支持物，抗原被点阵在其表面，形成检测区域。 检测过程包括两个主要步骤：一是抗原竞争结合，即样品中的庆大霉素与固定在PVDF膜上的抗原竞争结合抗GM多克隆抗体；二是显色反应，结合的抗体会吸引酶标记的物质，酶催化底物后产生可见的颜色变化，颜色的深浅与庆大霉素的浓度成正比，由此可以判断样品中庆大霉素的存在和大致含量。 该方法的检测阈值设定为10ng/mL，意味着即使庆大霉素的浓度极低，也能被准确检测出来。40分钟的检测时间远快于传统方法，提高了检测效率。此外，试纸条的长期保存能力（90天）和无交叉反应的特点，增加了其在实际应用中的便利性和可靠性。 这项研究成功开发了一种快速、灵敏的Elispot assay方法，对于监控牛奶中的庆大霉素残留具有重要意义，有助于食品安全监管并保障消费者的健康。同时，这种方法的通用性可能也适用于其他抗生素或药物残留的检测。