N-糖基化突变影响乙酰木聚糖酯酶的分泌、活性与稳定性

该论文探讨了"定点突变分析不同位点N糖基化对乙酰木聚糖酯酶(AXE)的影响"。乙酰木聚糖酯酶是木聚糖降解酶系的关键酶，然而天然微生物中的表达量通常较低。为了提升酶的产量和性能，研究者利用Pichia pastoris异源表达系统进行优化。论文的核心关注点在于蛋白质糖基化，这是一种在毕赤酵母中重要的翻译后修饰。 作者田斌和丁少军通过对AXE1的N-糖基化位点进行定点突变，创建了一系列缺失N-糖基化的突变体。研究发现，单个位点如31号和99号位的N-糖基化缺失并未显著改变酶的最适温度和pH值，但对分泌效率和稳定性有显著影响。31号位的糖基化对于分泌作用尤其关键，而99号位则对稳定性贡献较大。当这两个位点同时缺失时，酶的最适温度降低，分泌量显著下降，稳定性急剧降低。 通过质谱分析（CD分析），论文揭示了单点去N-糖基化对二级结构的影响不大，但双点去糖基化突变体（T33AN99A）中的α螺旋含量明显减少，表明N-糖基化对于维持蛋白质的特定结构至关重要。尽管野生型AXE1在毕赤酵母中表现出过度N-糖基化现象，但并未对其活力产生负面影响，反而表明适度的糖基化有助于提高蛋白的稳定性。 本文的研究成果对于理解乙酰木聚糖酯酶的优化表达策略具有重要意义，特别是在调控糖基化状态以改善酶的生物学特性方面。关键词包括乙酰木聚糖酯酶、定点突变、N-糖基化、稳定性以及蛋白分泌，这些都反映了研究的焦点领域。这项工作不仅提供了理论依据，也为后续的酶工程应用提供了新的视角。