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第 36 卷 第 9 期 西北农林科技大学学报(自然科学版) Vol .36 No .9
2008 年 9 月 Journal of Northwest A & F University(Nat .Sci .Ed .) Sep .2008
鸡 白 细 胞 中 抗 菌 肽 的 分 离 纯 化
及 活 性 鉴 定 方 法 的 建 立
倡 栘
齐珂珂
1 ,2
,康相涛
1 ,3
,李国喜
1
,孙桂荣
1
,田亚东
1
,韩瑞丽
1
(1 河南农业大学 牧医工程学院 ,河南 郑州 450002 ;2 中国农业科学院 北京畜牧兽医研究所 ,北京 100094 ;
3 河南家禽种质资源创新研究工程中心 ,河南 郑州 450002)
[摘 要] 【目的】 建立鸡白细胞中抗菌肽的分离纯化及活性鉴定方法 。 【方法】 通过腹腔注射酪蛋白生理盐
水 ,从鸡人工腹水中得到白细胞 ;将收集的白细胞 ,通过超声波反复破碎 、体积分数 10% 乙酸浸提 、低温高速离心 、旋
转蒸发除去乙酸和冷冻干燥等方法 ,得到抗菌肽粗提物 ;将得到的粗提物 ,经 CM‐Sepharose Fast Flow 弱酸性阳离子
交换层析和反相高效液相色谱(RP‐HPLC)纯化 ,收集分离的各组分 ,使用微量琼脂糖弥散法检测各组分的抗菌活性
和最小抑菌浓度 。 【结果】 共获得鸡抗菌肽粗提物 0 .270
g
,经 RP‐HPLC 分离纯化 ,抗菌肽离子交换阳性组分共分离
出 18 个峰 ,其中 6 个峰对 3 种细菌均表现较强的抑菌活性 ,对鸡大肠杆菌 E .coli O78(峰 13) 、金黄色葡萄球菌 S .au‐
reus 1056MRSA(峰 15)和白色念珠菌 C .albicans ATCC10231(峰 15)的最小抑菌浓度分别为 0 .627 ,0 .001 和 0 .035
μ
g
/mL 。 【结论】 该法可以在实验室中用于鸡抗菌肽的提取及活性鉴定 。
[关键词] 鸡白细胞 ;抗菌肽 ;纯化 ;活性检测
[中图分类号] Q516 [文献标识码] A [文章编号] 1671‐9387(2008)09‐0027‐06
Establishment of isolation ,
p
urification and activity identification
method of chicken leucocyte antimicrobi al peptides
QI Ke‐ke
1 ,2
,KANG Xiang‐tao
1 ,3
,LI Guo‐xi
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,SUN Gui‐rong
1
,TIAN Ya‐dong
1
,HAN Rui‐li
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g
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Science ,H enan A
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z hou ,H enan 450002 ,China ;
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ing 100094 ,China ;3 T he Rese arch Cente r o
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Resouces
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in H enan P rov ince ,Zhen
g
z hou ,H enan 450002 ,China)
Abstract :【Objective】 The study was to extablish isolation ,
p
urification and activity identification
method of chicken leucocyte antimicrobial peptides .【Method】 Sterile peritoneal exudates were harvested
from chicken after injecting saline with starch ,then the white blood cells were collected .The white blood
cells were sonicated to release the neutrophil granules .These granules were suspended in acetic acid and
mixed overnight to extract the antimicrobial peptides .Iox‐exchange chromatography and reversed phase
high performance liquid chromatography (RP‐HPLC) were used to seperated the components present in
the crude extract .Antimicrobial activity and the minimum inhibitory concentrations (MICs) were deter‐
mined by the radial diffusion plate assay method .【Result】 0 .270
g
chicken crude extract was obtained .U‐
sing RP‐HPLC the components in the active cationic fraction were separated into 18
p
eaks ;
p
eak 8 had good
activity against all three test organisms ;the minimum inhibitory concentrations of peak 13 against chicken
倡
[收稿日期] 2007‐09‐30
[基金项目] 国家科技支撑计划项目 (2006BDA01A09) ;公益性行业 (农业)科研专项 (nyhyzx07‐039) ;河南省杰出人才创新基金项目
(074200510009)
[作者简介] 齐珂珂(1981 - ) ,女 ,河南偃师人 ,在读博士 ,主要从事家禽动物营养研究 。 E‐mail :kergh2006@
y
ahoo .com .cn
[通讯作者] 康相涛(1962 - ) ,男 ,河南南阳人 ,教授 ,博士生导师 ,主要从事家禽遗传育种研究 。 E‐mail :xtkang2001@ 263 .net