鸡白细胞抗菌肽的分离纯化与活性鉴定技术

"鸡白细胞中抗菌肽的分离纯化及活性鉴定方法的建立 (2008年)" 这篇论文详细介绍了研究人员如何建立一种方法来从鸡的白细胞中分离、纯化并鉴定抗菌肽的活性。抗菌肽是生物体内自然产生的一类具有抗菌功能的小分子蛋白质，对于宿主防御病原微生物感染起着重要作用。 【方法】首先，研究者通过腹腔注射酪蛋白生理盐水来诱导鸡产生人工腹水，从中获取白细胞。接着，他们采用超声波破碎白细胞，利用体积分数为10%的乙酸进行浸提，以释放出抗菌肽。然后，通过低温高速离心和旋转蒸发去除乙酸，再进行冷冻干燥，得到抗菌肽的粗提物。 粗提物的进一步纯化是通过弱酸性阳离子交换层析（CM-Sepharose FastFlow）和反相高效液相色谱（RP-HPLC）进行的。这两种层析技术在生物化学中常用于蛋白质的分离纯化，因为它们可以基于蛋白质的电荷和疏水性差异进行分离。 【结果】经过这些步骤，研究人员获得了约0.270克的鸡抗菌肽粗提物。通过RP-HPLC纯化后，分离出了18个不同的峰。其中6个峰显示出对三种特定细菌（鸡大肠杆菌E. coli O78、金黄色葡萄球菌S. aureus 1056 MRSA和白色念珠菌C. albicans ATCC 10231）具有显著的抗菌活性。这表明这些峰可能包含有高活性的抗菌肽。抗菌肽的最小抑菌浓度（MIC）分别为0.627 μg/mL（E. coli O78）、0.001 μg/mL（S. aureus 1056 MRSA）和0.035 μg/mL（C. albicans ATCC 10231），这体现了其高效抗菌效果。 【意义与应用】这种建立的实验方法为鸡抗菌肽的研究提供了实用的技术路线，不仅可用于鸡的抗菌肽提取，还可以用于活性鉴定。这对于理解鸡的免疫机制、开发新型抗菌药物以及对抗抗生素耐药性的研究具有重要价值。同时，该方法也为其他动物或生物体内的抗菌肽研究提供了参考。 这篇论文展示了通过一套综合的生物化学技术，如何从鸡的白细胞中有效分离出具有抗菌活性的肽，并进行了精确的鉴定。这种方法的建立，为未来在实验室环境中研究和利用抗菌肽开辟了新的途径。