siRNA敲低CASK对INS-1胰岛素分泌的抑制作用

本文研究了"siRNA干扰CASK表达对INS-1细胞胰岛素分泌的影响"这一主题，由李原、陈鸿等学者合作完成，发表在《中国科技论文在线》上。他们选择大鼠胰岛细胞系INS-1作为研究对象，目的是通过利用小分子RNA干扰片段（siRNA）来抑制钙/钙调蛋白依赖性丝氨酸蛋白激酶（CASK）基因的表达，探究这种干预对钾离子刺激胰岛素分泌（KSIS）功能的影响。 实验方法上，研究者设计并合成五种特异性的siRNA片段（siCASK-1, siCASK-2, siCASK-3, siCASK-4, siCASK-5）以及对照组片段，并利用脂质体Lipofectamine2000进行转染，确保siRNA的有效传递至INS-1细胞。通过实时定量PCR和Western blot技术，研究人员对CASK基因的表达进行了定量分析，以筛选出能够有效抑制CASK基因的siRNA片段。 结果显示，转染100 nM siRNA 48小时后，INS-1细胞中的CASK基因表达显著降低（P<0.01），表明siRNA成功地实现了基因沉默。同时，观察到钾离子刺激后INS-1细胞的胰岛素分泌量明显减少（P<0.01），这表明CASK基因的表达水平与KSIS功能密切相关，其抑制可能导致胰岛素分泌的抑制作用。 结论部分指出，这项研究证实了靶向siRNA可以特异性地抑制INS-1细胞中的CASK基因表达，从而影响钾离子诱导的胰岛素分泌过程。这对于理解CASK在胰岛素分泌调控中的作用以及潜在的糖尿病治疗策略具有重要意义。该研究提供了新的遗传工具和技术手段，有助于深入探索胰岛素分泌的分子机制，为糖尿病及相关疾病的治疗提供了可能的新途径。