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二:拉平均平
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二
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立特主意
Science
and
Tedznolo
f!J
q/
Food
Industry
猪白
2
肾上腺素受体基因克隆及
重组酵母表达质粒的构建
王健
1
气李永飞余永新金茂俊王静
1
,'-
(
1.中国农业科学院农业质量标准与检测技术研究所,农业部农产品质量安全重点实验室,北京
100081
;
2.
河北北方学院食品科学系,河北张家口
(75000)
摘
要克隆彷阮
A
I{基因并进行序列分析,构建其重组酵母表达质粒采集新鲜猪肝组织,提取总
HNA
,经
H
1'-1'
CH
扩
增、克隆及鉴定,获得猪
ιAH
的
cDNA
序列,并对该序列及编码的是基酸序列进行分析
同时将目的基因插入
pPICχα
且酵母表达载体,构建重组表达质粒二克
l'
奎获得猪。
2
AH
基因
cDNA
序列
1257
bp
,
Genbank
登录号为
KF023571.
1 ,
编码
418
个氨基酸,蛋白分子质量
46.73
ku
八生物信息学分析表明,该基因与其他物种的自
2
AH
基因相似性较高,均在
839
毛以上,具有较禹的同源性、经
PCR
和双酶切鉴定以及测序分析,证明成功构建了重组酵母表达质粒
pPICZαA
ß2
AHι
本研究为猪
ß2AR
基因在毕赤酵母系统的表达及建立基于受体的
ßi
敖动剂多残留捡,如
l
方法奠定了基础
ι
关键词:自
2
肾上腺素受休,克隆,酵母表达质粒,猪
Cloning
of
ß2
adrenergic receptors
cDNA
and
construction
of
yeast expression
plasmid
1电
IANG
Ji
an
12
,Ll
Yong-feP , SHE
Yong-xin
1
,
JIN
Mao-jun
1
,
WANG
Jing
l."
(l
.I
nstitute
of Quality
Standards
and
Testing
Technology
for
Agri-products of
CAAS
,
Key
Laboratory
of Agrifood
Safety
and
Qualily ,
Mini
世
ry
of Agriculture , Beijing
100081
,
China;
2.Depmiment
of
Foo
c/
Science
,
Hebei
Norlh Universily , Zhangjiakoll
075000
,
China)
Abstract: This study aimed to clone pig
ß2AR
gene , analysize its sequence and construct its recombinant yeast
expression plasmid. Total RNA was extracted Irom pig liver
, and then
RT
-
PCR
was conducted based
on
published
pig
日
2AR
gene sequence (AF000134). By cloning
01
the
PCR
product and identilication ‘ the cDNA
Iragment
01
pig
ß2AR
was obtained. Bioinlormatical tools were adopted to analyze the gene sequence and
amino acid. The target gene was cloned to
pPICZαA
vector , constructing recombinant expression plasmid
The cDNA Iragment
01
pig
ßAR
(KF023571
.1
) was 1257
bp
, and encodeed 418 amino acids. The deduced
protein was predicted to have a computed molecular mass
01
46.73 ku. There were high similarity (more than
83%)
and homology
in
ßAR
gene between pig and other species. Finally ,
recombina
门
t
plasmid named
pPICZαA
-
ßAR
was constructed successlully after verilication by
PCR
, restriction enzyme analysis and
sequencing. This research will serve as a base
lor
expression
01
pig
ßAR
gene
in
yeast expression system and
its application
in
multiresidue determination
01
ß2-adrenoceptor agonists
Key words:
ß2
adrenergic receptor; clone; yeast expression plasmid; pig
中图分类号:
1'
S20
1.1
文献标识码
:A
文章编号
:1002-0306(2015)18-0156-04
c/
oi: 10.13386!j.issnl002-0306.2015.18.023
目前,
β
激动剂的违禁添加是影响我国动物源食
lfll
安全和|畜牧业健康发展的焦点问题之一。特别是
多种
β
1J~
亚运
}J
剂的泪合添加及新型结构类似物的的不
断涌现,给此类违禁物的有效监管带来巨
λ
挑战。
L
要原因是现行的快速检测技术如
ELISAII~31
、}捡一休金
h
-ï;
纸条
l
呀
~I
生物传感器
f5~71
等均不能很好的解决
β
激动剂
的多残留检测和
1:
未
);I~
物饰查。基
7
重组受体的
β
激动
收稿日期:
2015-02-05
剂检测
):i
沽,是利用
β2
A R
受体与
β
激动剂的类特异
性吸附原理建立检测体系,开辟了一条针对该类边
禁物的多残留检测及未知物饰查的新途径。
获得大量高纯度、用卡
l'
好的
β2
AR
蛋白是建立自激
动剂受体分析法的基础,也是该技术在研发
;N.
用方而
遇到的最大瓶颈之一。
ι
肾!工脱素受体币
2
adrenergic
receptor
,
β2
A
R)
是能够被肾
l:-J
腺素;激汩的-类
G
蛋白
作者简介:王处(
1980
斗,男,博士研究生、副教校,研究方向:农产品质量安全快速检训技术,
E-mHil:
xuanyuζllliian0228
<ß:
12
仇。
III
通讯作者·王静
(1963-)
,女,许士,放校嘈研当纪
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方
1
向:句可.含品安全与检坝圳
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基金项目:国家公益性行业(农止)科
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研吁专立项页(口
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