猪β2肾上腺素受体基因克隆与酵母表达质粒构建详解

本研究论文主要关注的是猪β2肾上腺素受体(β2AR)基因的克隆与重组酵母表达质粒的构建，这对于理解猪体内这一重要受体的功能以及可能的应用具有重要意义。首先，研究者从新鲜猪肝组织中提取总RNA，通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)进行扩增，然后将扩增产物进行克隆和鉴定，成功获得了猪β2AR的cDNA序列。这个cDNA序列的长度为1257 bp，对应的Genbank登录号为KF023571.1，编码了418个氨基酸，其蛋白质分子量约为46.73 kDa。 通过生物信息学分析，研究者发现猪β2AR基因与其他物种的相应受体基因高度相似，一致性高达83%以上，这表明其具有高度的同源性。这种同源性对于理解跨物种间的生理机制和药物相互作用至关重要。 接着，研究团队将目标基因插入到pPICZα酵母表达载体中，构建出重组表达质粒pPICZα-β2AR。通过PCR和双酶切鉴定以及测序分析，验证了质粒的成功构建，确保了目的基因在酵母系统中的有效表达。这样的工程菌株可以作为进一步研究和应用的基础，例如在药物筛选、毒理评估或生物标志物开发等领域。 构建猪β2AR的重组酵母表达系统，为猪β2AR在毕赤酵母（一种广泛用于生物技术工业的真菌）中的表达提供了平台，有助于开发针对猪的新型β2激动剂或多残留检测方法。这不仅对猪健康管理和药物研发有潜在价值，也为其他动物模型的研究提供了借鉴。这项工作在分子生物学和生物技术领域具有重要的理论和实际意义。