构建人源IL-17抗体库：噬菌体展示技术筛选

"人噬菌体抗体库的构建及人源性IL-17抗体的筛选" 本文主要讨论了利用噬菌体展示技术构建人源单链抗体库，并筛选出针对IL-17（白介素-17）的特异性抗体。IL-17是一种在多种免疫性疾病中发挥关键作用的细胞因子，尤其与类风湿关节炎等炎症性疾病密切相关。通过筛选这种抗体，科研人员旨在找到潜在的治疗策略。 文章中提到的方法包括以下步骤： 1. **样本采集**：首先，研究人员采集了15位类风湿关节炎患者的外周血淋巴细胞。这些患者通常具有异常的免疫反应，因此他们的抗体可能对IL-17有较高的亲和力。 2. **RNA提取与cDNA合成**：接着，从这些细胞中提取总RNA，并通过逆转录酶反应将其转化为互补DNA（cDNA），以保存抗体基因的信息。 3. **PCR扩增**：使用聚合酶链反应（PCR）技术扩增人H链（重链）和L链（轻链）的可变区抗体基因。这些可变区决定了抗体识别抗原的能力。 4. **SOE-PCR法拼接**：通过序列交错连接的PCR（SOE-PCR）技术，将VH和VL片段拼接形成单链抗体片段（ScFv），这是一种由抗体的重链和轻链可变区组成的融合蛋白。 5. **噬菌体载体插入与库构建**：将拼接好的ScFv片段插入噬菌体载体pCANTAB5E中，从而构建人源噬菌体单链抗体库。这个库包含了大量的不同抗体变体，可以展示在噬菌体表面。 6. **抗原筛选**：通过固相化的抗原对库中的噬菌体进行3轮筛选，每轮筛选都能进一步富集与IL-17结合力更强的抗体。 7. **克隆鉴定**：筛选出的单克隆噬菌体通过phage-ELISA（噬菌体酶联免疫吸附测定）进行鉴定，确认它们与IL-17的结合能力。 实验结果显示，成功构建了一个库容为3.5×10^8的噬菌体抗体库，并从中筛选出了5株与IL-17结合性强的阳性克隆。这表明研究者已经能够通过噬菌体展示技术获取具有特异性的抗IL-17人源ScFv抗体片段，这些成果为进一步的生物学研究和潜在的药物开发奠定了基础。 关键词：白介素17；噬菌体展示抗体库；单链抗体；类风湿关节炎 这项研究展示了现代生物技术在免疫学和药物研发领域的应用，特别是噬菌体展示技术在快速筛选和鉴定特异性抗体方面的强大能力。通过这种方法，科研人员能够更高效地发现针对特定靶标的治疗性抗体，对于类风湿关节炎等疾病的治疗研究具有重要意义。