构建与鉴定鼠白细胞介素15真核表达质粒及其生物活性
需积分: 5 164 浏览量
更新于2024-08-12
收藏 306KB PDF 举报
"鼠白细胞介素15真核表达质粒构建及活性鉴定的研究简报"
这篇论文主要探讨了鼠白细胞介素15(mIL-15)的真核表达质粒构建及其生物活性的鉴定过程。IL-15是一种多功能的细胞因子,在免疫调节、细胞增殖和生存中发挥重要作用。研究者通过以下步骤实现了mIL-15的表达和活性验证:
1. **RNA提取与RT-PCR**:首先,研究人员从小鼠脾细胞中提取了总RNA,这些细胞经过PMA(磷酸化麦胚凝集素)刺激,以诱导mIL-15基因的表达。接着,他们使用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术从总RNA中扩增出mIL-15基因的cDNA片段。
2. **基因克隆**:成功获取mIL-15基因后,将其插入到真核表达质粒VR1012中。这种质粒允许在真核细胞内表达外源基因,如哺乳动物细胞中的COS-7细胞系。
3. **细胞转染**:将含有mIL-15基因的VR1012质粒转染至COS-7细胞中。转染是将外源DNA引入细胞的过程,以实现基因表达。
4. **Western blot检测**:转染后,通过细胞裂解,收集表达产物。利用Western blot技术对mIL-15蛋白进行检测,这是一种蛋白质定性和定量的方法,可以验证mIL-15基因是否成功表达并具有正确的分子量。
5. **活性鉴定**:进一步分析细胞培养上清液,通过稀释检测其生物活性。这可能涉及检测mIL-15对细胞增殖或活化的效应,以确认表达的mIL-15蛋白具有生物学活性。
该研究的结果表明,研究人员成功构建了一个包含完整信号肽序列的mIL-15真核表达载体,并在COS-7细胞中实现了mIL-15的正确表达和检测。同时,他们还证实了所表达的mIL-15蛋白具有生物活性。这一工作对于理解mIL-15的功能以及在免疫系统中的作用提供了重要的实验基础,也为未来开发基于mIL-15的治疗策略,如疫苗或免疫疗法,奠定了坚实的基础。
2020-01-28 上传
2020-02-17 上传
2023-07-25 上传
2023-03-27 上传
2023-09-20 上传
2024-09-10 上传
2024-09-10 上传
2024-09-10 上传
2024-09-10 上传
![](https://profile-avatar.csdnimg.cn/default.jpg!1)
weixin_38727199
- 粉丝: 8
- 资源: 909
最新资源
- 解决本地连接丢失无法上网的问题
- BIOS报警声音解析:故障原因与解决方法
- 广义均值移动跟踪算法在视频目标跟踪中的应用研究
- C++Builder快捷键大全:高效编程的秘密武器
- 网页制作入门:常用代码详解
- TX2440A开发板网络远程监控系统移植教程:易搭建与通用解决方案
- WebLogic10虚拟内存配置详解与优化技巧
- C#网络编程深度解析:Socket基础与应用
- 掌握Struts1:Java MVC轻量级框架详解
- 20个必备CSS代码段提升Web开发效率
- CSS样式大全:字体、文本、列表样式详解
- Proteus元件库大全:从基础到高级组件
- 74HC08芯片:高速CMOS四输入与门详细资料
- C#获取当前路径的多种方法详解
- 修复MySQL乱码问题:设置字符集为GB2312
- C语言的诞生与演进:从汇编到系统编程的革命