葡萄籽和葡萄皮的抗氧化作用对小鼠氧化应激和肝功能的影响

主办方：埃及生物安全和生物多样性科学杂志2（2015） 98E109完整文章葡萄籽和葡萄皮对小鼠多阿河Alia，*，Nariman K.放大图片作者：Rania F.Abou-El-magdba埃及曼苏拉曼苏拉大学理学院动物学系b沙特阿拉伯加沙，加沙大学医学院医学生物学系A R T I C L E I N F O文章历史记录：收到日期：2014年12月26日收到日期：2015年2015年2月25日接受2015年3月13日在线发布保留字：Ehrlich实体瘤氧化应激肝组织学组织化学超微结构A B S T R A C T本研究旨在探讨葡萄籽和葡萄皮（GSE和GSK）对艾氏实体瘤（EST）诱导的小鼠氧化应激、肝功能障碍和肝脏病理变化的抗氧化作用。将GSE和GSK与标准饮食混合，并在皮下肿瘤细胞接种前14天给予小鼠，并持续30天。结果表明，ESTs荷瘤小鼠血浆丙氨酸氨基转移酶（ALT）和天冬氨酸氨基转移酶（ AST ） 升 高 ， 血 液 和 肝 脏 脂 质 过 氧 化 （ MDA ） 水 平 升 高 ， 谷 胱 甘 肽（GSH）、超氧化物歧化酶（SOD）和过氧化氢酶（CAT）水平下降组织学和超微结构观察显示，EST阳性组肝细胞变性，肝窦状突起，淋巴细胞浸润，胶原纤维增多，细胞核不规则，线粒体改变，次级溶酶体增多。组织化学上，EST组肝脏总蛋白和DNA含量减少相反，GSE和GSK补充EST荷瘤小鼠可能恢复肝功能酶，降低MDA水平，增强抗氧化参数，正常化肝脏蛋白质和DNA含量，并改善病理检查的肝脏病变。总之，GSE和GSK通过增强抗氧化防御系统，从而保护肝脏免受由Ehrlich实体癌肿瘤诱导的氧化应激，揭示了有效的抗氧化特性。版权所有2015年，曼苏拉大学。由Elsevier B. V.制作和托管。这是一个CC BY-NC-ND许可证下的开放获取文章（http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/）。1.介绍氧化应激与癌症的各个方面密切相关，从致癌到荷瘤状态，从治疗到治疗，预防认为荷瘤状态处于与肿瘤细胞产生活性氧和异常氧化还原控制相关的氧化应激状态[1]。一些研究表明肿瘤的生长可引起抗氧化紊乱并加速脂质过氧化*通讯作者。联系电话：传真：020-502246254。电子邮件地址：doaasakr@mans.edu.eg（D.A. Ali）。由曼苏拉大学负责进行同行审查。http://dx.doi.org/10.1016/j.ejbas.2015.02.0032314- 808 X/版权所有2015年，曼苏拉大学。由爱思唯尔公司制作和主持 这是一篇CC BY- NC-ND许可证下的开放获取文章（http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/）。可在www.sciencedirect.com在线获取ScienceDirect杂志主页：http://ees.elsevier.com/ejbas/default.asp埃及生物安全和生物多样性科学杂志2（2015） 98E10999(Lpx)在肿瘤宿主的重要器官中[2e4]。使用天然产品被认为是癌症治疗的最有效方法之一，并且被证明具有较少的副作用。饮食中摄入富含抗氧化剂的食物用于预防癌症[5]。最值得注意的植物之一是葡萄，其在许多体外和体内模型中显示出有希望的化学预防和抗癌作用[6，7]。葡萄是世界上最大的水果作物之一，也是世界上最常食用的富含抗氧化剂的水果之一。葡萄含有大量的活性成分;主要存在于葡萄皮和种子中，包括黄酮类化合物、多酚类化合物、花青素、原花青素、原花青素和白藜芦醇[8，9]。葡萄籽和葡萄皮的有益作用是由于它们的抗氧化剂[10e12]、抗癌[8，13]、抗微生物[14]、抗炎[15，16]活性和细胞凋亡信号的激活[14]。我们正在进行的研究（未显示）表明，GSE和GSK摄入量显著降低了患有艾氏癌的动物的肿瘤生长。已在不同模型（如DMN化学诱导[9]和高脂饮食[10]）中检查了GSE和GSK摄入对脂质过氧化和抗氧化状态影响的相关知识;然而，涉及荷瘤动物远端器官中氧化应激和抗氧化状态的因此，特别感兴趣的是检查GSE和GSK对雌性白化小鼠肝脏中艾氏实体瘤诱导的氧化应激2.材料和方法2.1.艾氏腹水癌细胞肿瘤诱导&Ehrlich腹水癌（EAC）细胞通过25 g雌性白化小鼠由埃及开罗的国家癌症研究所癌症生物学系提供。通过每周腹膜内接种含106 个细胞/小鼠的盐水溶液保存细胞[17]。将含有2.5× 106个EAC活细胞的EAC 0.2ml接种于小鼠背部皮下，产生Ehrlich实体瘤（EST）。2.2.GSK和GSE葡萄（Vitis vinifera）皮（GSK）和种子（GSE）从果肉中手动分离，GSK在50℃下干燥，GSE在70℃下在干燥箱中干燥数小时，然后使用研磨机研磨成粉末[9]。根据Shin和Moon[9]，将等量的GSE和GSK与浓度为10%（w/w）的标准饲料粉均匀混合。2.3.实验设计从埃及Helwan的Vacsera动物农场获得总计50只成年雌性瑞士白化小鼠，体重（18e21g）。实验前，将动物饲养在25± 1℃的恒定温度下，自由饮用水，并适应实验室条件一周。它们被喂食由55%玉米淀粉、20%酪蛋白、15%玉米油、5%盐混合物和5%维生素化淀粉（Egyptian Company of Oil andSoap，Kafr Elzayat，Egypt）。所有实验均按照当地实验动物伦理委员会批准的方案进行。将动物随机分为四组。第1组（10只小鼠）作为未处理对照（既不接受EST接种，也不接受GSE和GSK）。第2组仅接受GSE和GSK处理（10只小鼠）;动物每天自由喂食与浓度为10%（w/w）的GSE和GSK粉末混合的饲料，持续44天。第3组仅接受EST（15只小鼠）;在第14天在动物背部皮下注射2.5×106 EAC细胞用于实体瘤诱导，并且不进行任何处理30天。第4组（15只）接种EST + GSE + GSK，每天喂饲含10%（w/w）GSE+ GSK的饲料 44 d，第14天背部皮下注射EAC细胞2.5×106，连续30 d。2.4.血液采样和生化检查在实验结束时，动物在取样前禁食16小时。在轻度麻醉后使用肝素化注射器通过心脏穿刺采集全血从肝素化血液中采集分离的血浆，并在-20℃下保存，直至用于根据Reitman和Frankel[18]所述的比色法测定丙氨酸 氨 基 转 移 酶 （ ALT ） 和 天 冬 氨 酸 氨 基 转 移 酶（AST）酶活性，根据Yoshioka等人的比色法测定根据 Johansson 和 Borg 的 比 色 法 [20] 测 定 过 氧 化 氢 酶（CAT），根据Minami和Yoshikawa的方法[21]测定超氧化物歧化酶（SOD）。根据Beutler等人的比色法，使用一部分全血样品来估计谷胱甘肽（GSH）[22]第20段。2.5.用于生化研究的肝组织取样采集血样后，通过颈椎脱位处死所有动物，切下肝组织，仔细修剪，称重，并使用Potter-Elvehiem匀浆器在磷酸钾缓冲液（50 mM，pH 7.5）中匀浆，得到10%匀浆。将匀浆在4 ℃下以1500 g离心10 min;回收上清液，置于冰上，并立即用于通过前述方法测定MDA、CAT、SOD和GSH水平[19e22]。2.6.组织病理学检查在实验结束时，获得来自所有不同动物组的肝脏样品并固定在10%缓冲中性福尔马林中。固定后的肝脏标本经无水乙醇梯度脱水，石蜡包埋。根据以下组织学染色法对5μm厚的切片进行染色： HE[23]和Masson三色法[24]用于胶原纤维.[100]《埃及科学院学报》第2卷（2015年）第98页第109页2.7.组织化学研究使用汞-溴酚蓝染色法检测总蛋白[25]，使用Feulgen反应法研究DNA含量[26]。2.8.电镜观察将解剖的肝脏样品在4 ℃下在磷酸盐缓冲液（pH 7.2）中的4F1G中固定，并在pH 7.2的磷酸盐缓冲液中的1%冷四氧化锇中后固定然后将标本在梯度乙醇中脱水并包埋在Epson-Araldite树脂中。按照Reynolds[27]的描述，用乙酸双氧铀染色超薄切片，然后用柠檬酸铅染色，并在60 kV下运行的Joel电子显微镜（日本）上进行检查。2.9.统计分析数值表示为平均值±SE（标准误差）。使用单因素方差分析分析生化参数数据，然后使用Bonferroni事后检验进行多重比较。认为p值≤0.05具有统计学显著性。如表1所示，与对照组相比，在EST携带组的血液和肝脏中观察到MDA水平的显著升高和GSH含量、SOD和CAT活性的显著抑制与此相反，在肿瘤细胞接种前14天和整个实验期间补充GSE和GSK可显著降低EST携带动物中升高的MDA水平，使其与血液和肝组织中的对照值相当。另外，补充GSE和GSK可使降低的GSH含量和升高的SOD、CAT活性恢复至正常水平。3.2.组织学观察对照组的肝脏切片显示多角形肝细胞，细胞核位于中心，细胞质呈颗粒状（图2A）。肝细胞呈束状排列，与血窦交替排列，在中央静脉周围形成网状结构（图1）。 2 A）。 GSE和GSK治疗组的肝切片显示与对照肝相似的结构（图1B）。 2 B）。而EST组肝细胞索状排列紊乱，气球样变性，胞浆空泡化，胞浆内有包涵体，Ehrlich瘤细胞团块与淋巴细胞混合浸润，红细胞相关的持久性，如3.结果3.1.生化研究如图1所示，与正常对照组相比，未治疗的EST小鼠显示血浆ALT AST水平显著升高，ALT升高79.58%，AST升高48.98%。&在接种瘤细胞前14天和整个实验期间补充GSE和GSK，显著抑制了EST荷瘤动物ALT和AST的升高，ALT和AST分别为对照组的8.49%和5.83%。&&图 2（C &D）. 另一方面，EST + GSE和GSK治疗组的肝切片似乎是正常的，没有任何肿瘤细胞浸润，并且显示炎性细胞减少（图2E和F）。此外，肝细胞恢复了其细胞质外观和肝索的几乎正常排列，如图所示。 2（英&、法）。来自对照组和GSE和GSK处理的动物的肝组织显示血管周围的胶原纤维的量可忽略不计（图 3 A &B）。EST组肝切片显示中央静脉周围和血窦内胶原纤维增多（图3C）。而EST + GSE和GSK治疗组的肝脏切片显示，图 1e GSE和GSK摄入对不同实验组的血浆ALT和AST水平的影响。 每个值代表5只小鼠/组的平均值± SE，**与对照组在0.01水平上显著不同，##与GSE和GSK组在0.01水平上显著不同，yy与EST组在0.01水平上显著不同。《埃及生物多样性公约》第2卷第109页第101页胶原纤维减少，特别是中央静脉周围和血窦中的胶原纤维减少（图1）。 3 D）。3.3.组织化学观察对照组和补充GSE和GSK的动物肝细胞中的蛋白质材料表现为小的蓝色不规则颗粒，有时紧密堆积在一起，在细胞质中形成蓝色不规则致密体肝细胞受到强烈染色的细胞膜的限制，其细胞核含有染色阳性的核仁和染色质颗粒（图11）。 4 A &B）。 EST组肝组织总蛋白含量降低，大部分肝细胞出现胞浆空泡化。 4C）。 EST、GSE和GSK处理组的肝脏切片显示总蛋白含量正常（图1B）。4 D）。肝细胞核中的含DNA颗粒对照和GSE和GSK处理的动物表现为红色致密染色颗粒，其分布在核质中或局限于核的外周边缘（图5A和B）。枯否细胞核染色较强。对携带EST组的肝切片的检查显示DNA含量减少（图5C）。相反，EST + GSE和GSK处理组的肝切片显示DNA含量正常化（图1B）。 5D）。3.4.超微结构观察在本研究中，对照组的肝细胞显示大的圆形核，常染色质和异染色质分布正常。在肝细胞质中观察到粗面内质网的轮廓，特别是在核膜周围和线粒体之间（图6A）。线粒体是许多圆形和细长的轮廓，具有膜嵴和电子致密基质（图6A）。肝血窦内排列着一层不连续的内皮细胞。肝细胞的微绒毛伸入胆小管腔和Disse间隙（图6B C）。补充GSE和GSK的动物的肝细胞、胆小管和血窦似乎与对照组的肝细胞、胆小管和血窦一样正常（图6De F）。相反，携带EST的小鼠的肝组织显示超微结构改变，包括具有脂滴内含物的不规则核（图7A）。此外，线粒体彼此紧密堆积。有些大，有些小，其他的似乎是分支或萌芽（图7A C）。此外，在大多数细胞中可见明显的脂滴、糖原颗粒和大量的次级溶酶体和微体（图7B C）。肝细胞肿胀并丧失其胞质密度（图7B和C）。此外，血窦宽而不连续，内皮细胞破坏，枯否细胞脱落（图7C），但EST + GSE和GSK组肝组织有明显改善。肝细胞的细胞核或多或少类似于对照组的细胞核（图7E）。线粒体和平滑的ER在这些细胞的细胞质中突出，外观健康，脂滴大多消失（图1）。 7 D &E）。胆小管和血窦表1.eGSE、GSK摄入量对不同实验组血肝MDA、GSH、SOD、CAT水平的影响&参数组MDA肝脏（mmol/gm湿组织）175.7± 23.3172.8± 25.5SODGSH猫血液（mmol/ml）54.4 ±4.352.0 ±1.6肝脏（mg/gm湿组织）30.2 ±1.332.3 ±2.0(7.00%）21.2±0.8 **，##（-29.63%）血液（mg/dL）48.1 ±3.849.8 ±2.9(3.56%）32.4±1.8 **，##，（-32.53%）44.4±1.9年（-7.62%）肝脏（mg/gm.湿纸巾）334.5± 15.3335.5± 13.4(0.3%）256.8± 11.2 **，##（-23.20%）300.5± 10.7岁（-10.20%）血液（mg/ml）48.1±1.649.8 ±2.9(3.56%）37.6±2.1 **，##（-21.72%）44.4±1.9年（-7.62%）肝脏（mg/gm.湿纸巾）33.9 ±1.134.6 ±1.9(1.77%）26.2±1.4 **，##（-22.88%）31.8±0.9年（-6.33%）血液（mg/ml）53.4 ±1.754.8 ±3.3(2.63%）43.5±1.3 **，##，年（-18.49%）50.6±1.8年（-5.25%）对照GSEGSK（-4.41%）（-1.67%）86.5±4.4 **，##267.0± 14.9 **，##（51.94%）EST（59.06%）59.2±3.4年31.2±3.3年183.3± 18.9岁公司简介(8.82%）(4.29%）(3.29%）每个值代表5只小鼠/组的平均值±SE** 与对照组在0.01水平上有显著差异##与GSE GSK组在0.01水平上有显著差异y、yy与EST组分别在0.05、0.01水平上差异显著（对照组的%变化[102]《英国科学院和英国科学院学报》2（2015） 98E109图2e携带EST的小鼠和/或用GSE和GSK处理的小鼠的肝组织病理学。对照小鼠（A）的肝脏切片显示正常的肝脏组织学外观，包括中央静脉（CV）、血窦（BS）、肝细胞（HC）、枯否细胞（KC）GSE和GSK处理组（B）肝切片显示无显著变化（HE，X250），EST荷瘤小鼠肝切片（CD）显示癌细胞与淋巴细胞混合的窦状浸润（箭头），肝细胞具有透明至泡沫状的细胞质和核内包涵体（箭头）（HE，X400），EST + GSE和GSK处理组（EF）肝切片显示无肿瘤细胞浸润，少量淋巴细胞浸润（LI）和肝索几乎正常排列（HE，X400）。与对照组相比，非常正常（图1）。 7 E &F）。种子补充可保护EST荷瘤小鼠的肝细胞免受损伤，并改善其肝功能这些发现与Shin和Moon的研究一致[9]。他发现葡萄皮籽和普通食物混合后&4.讨论实验结果表明，未经处理的EST荷瘤小鼠血浆ALT和AST水平明显高于对照组。这些数据表明，肿瘤在动物体内的发展可以影响许多重要器官的功能，如肝功能。这些结果与Gupta et al.[28]他们记录了携带EAC的小鼠的肝转氨酶升高，EST + GSE组和GSK组 ALT、AST水平明显下降，接近正常水平。这些结果表明，葡萄皮和显著抑制二甲基亚硝胺（DMN）诱导的大鼠肝损伤引起的血清AST ALT水平升高。&脂质过氧化的终产物丙二醛（MDA）是氧化应激的标志物[10，29]。本研究中，EST荷瘤小鼠血液和肝脏MDA含量显著升高.先前的研究表明，肿瘤生长破坏抗氧化系统并增加肿瘤宿主重要器官中的LPx[2e4]。小鼠肝脏中脂质过氧化物的产生及其增加可能是由连锁反应引起的，也可能是由逃避肝脏抗氧化能力的[3]小鼠的EST。《埃及生物多样性公约》和《科学》第2（2015） 98和109103页图图3e具有EST的小鼠和/或用GSE和GSK处理的小鼠的肝组织学，显示胶原纤维。对照小鼠的肝切片（A）显示中央静脉（CV）周围的胶原纤维的量可忽略，GSE和GSK处理的小鼠的肝切片（B）显示无显著变化，携带EST的小鼠的肝切片（C）显示中央静脉（CV）周围的大量胶原纤维，EST +GSE和GSK处理组的肝切片（D）显示中央静脉（CV）周围的胶原纤维的量减少（Masson三色染色，X400）。图4e.携带EST的小鼠和/或用GSE和GSK处理的小鼠的总蛋白的含量和定位的肝组织化学显示。对照小鼠的肝切片（A）显示正常的致密蛋白质含量，在所有肝细胞中蛋白质正常分布，GSE和GSK处理的小鼠的肝切片（B），EST携带小鼠的肝切片（C）显示总蛋白质含量的降低，EST加GSE和GSK处理组的肝切片（D）说明总蛋白质的正常化（溴酚蓝染色，X400）。[104]《埃及国家科学院学报》第2卷第 98页第109页图5e携带EST的小鼠和/或用GSE GSK处理的小鼠的DNA含量的肝组织化学显示。对照小鼠（A）和GSE和GSK处理的小鼠（B）的肝切片显示正常的含DNA颗粒（C）携带EST的小鼠的肝切片显示DNA含量减少。(D)用GSE和GSK处理的携带EST的小鼠的肝脏切片显示DNA含量正常化（Feulgen，X400）。结果表明，EST能使小鼠血液和肝脏GSH含量明显降低，SOD和过氧化氢酶活性明显抑制。GSH和抗氧化酶的消耗与LPx的增加密切相关[30]。GSH作为内源性抗氧化系统发挥重要作用，特别是在肝脏中发现高浓度GSH，并且已知其通过清除ROS[31，32]、调节细胞氧化还原状态和作为抗氧化酶的辅因子[29，33，34]在保护细胞方面具有关键功能。另一方面，自由基清除系统、CAT和SOD可防止超氧化物和过氧化氢的潜在有害反应[35e37]。Navarro等人先前研究了肿瘤生长期间的GSH水平和抗氧化状态[38]。他们的研究表明，在艾氏腹水癌荷瘤小鼠中，血液谷胱甘肽氧化还原（GSH/GSSG）他们将这一结果归因于氧化应激导致癌细胞过氧化物形成的增加。红细胞中发生的GSH氧化导致GSSG从不同组织释放到血流中[38，39]。在本研究中检测到荷瘤小鼠血液和肝组织中的SOD和过氧化氢酶水平显着降低。如其他人所报道的，还发现荷艾氏腹水癌小鼠的SOD活性下降[40]。他们报告说，这种下降可能是由于线粒体的丢失，这可能导致荷瘤动物几个组织中SOD水平的降低。Abu-Zeid等测定了SOD活性[41]在Ehrlich癌荷瘤动物的血浆、肺和肝中。是值得一提的是，由于不受控制的氧化损伤，肿瘤的发展可能导致抗氧化酶如SOD和过氧化氢酶的降解[42]。本研究表明，GSE和GSK的摄入降低了EST荷瘤小鼠体内升高的LPx水平，并提高了GSH、SOD和CAT的活性，这可能表明补充GSE和GSK可能具有抗氧化和清除自由基的特性。&这些结果与Chis等人[43]、Al-Sowayan和Kishore[44]以及Leifert和Abeywardena[45]的报告一致，他们报告口服给予原花青素提取物可提高SOD和CAT水平，降低脂质过氧化物水平，并增强对多柔比星治疗产生的活性氧的抗氧化防御，从而保护肝细胞。据推测，这些结果是由葡萄籽皮引起的，葡萄籽皮被认为是多酚的丰富来源，多酚对氧化应激具有许多有益作用，并保护细胞和组织免受氧化损伤，这可能是由于其清除活性氧的强抗氧化活性[29]。&在本研究中，EST荷瘤小鼠的肝切片显示肝细胞胞质空泡化，核内胞质内含物和与淋巴细胞和红细胞混合的Ehrlich肿瘤细胞团块。目前结果的确认来自以前的研究[46e48]。Ehrlich肿瘤细胞浸润可能是由于肿瘤细胞增殖并迁移到内部器官[17，49]。炎症细胞的聚集可能是由于线粒体变性或细胞质解体[50]。肝细胞坏死变性《埃及生物多样性公约》和《科学》第2卷（2015年） 98第109105页图6 e对照小鼠肝脏的电子显微镜照片（AeC），显示了具有正常的大圆形核（N）、粗面内质网（RER）和线粒体（M）的肝细胞，具有内皮衬里细胞（EN）的正常血窦，宽的Disse间隙（DI）、Kupffer细胞（KC）和红细胞（RBC）。微绒毛（MV）投射到与连接复合体（JC）固定的胆小管（BC）和Disse间隙（DI）。GSE和GSK处理的动物的肝脏与对照组（D e F）中所述的肝脏相当正常。推测是由溶酶体酶和水合作用引起的[51]，如本超微结构观察所示。与此相反，EST + GSE和GSK治疗组的肝切片显示肝小叶结构几乎正常，肝细胞几乎没有改变既没有检测到炎性细胞，也没有检测到Ehrlich细胞，这一结果与Sun等人[52]的结果一致，后者表明葡萄多酚膳食补充剂可预防乙醇诱导的肝损伤。此外，Kasdallah-Grissa et al.[53]发现白藜芦醇减少肝组织损伤。此外，口服葡萄籽可减轻大鼠肝脏中他莫昔芬引起的组织病理学变化[54]。此外，另一项研究表明，葡萄多酚，包括白藜芦醇，表儿茶素和表没食子儿茶素，可以抑制癌细胞，入侵[55]。这可以被认为是肝细胞的功能改善，这可能是由于在存在GSE GSK补充的情况下实质细胞的加速再生或有限的损伤。此外，目前的研究表明，正常小鼠摄入GSE和GSK不会在肝组织中产生任何可检测的结构变化。在这项研究中，EST荷瘤小鼠的肝脏切片显示中央静脉周围的胶原纤维Horn et al.[56] 宣称，肝窦间隙中胶原的存在可能影响肝细胞的血液供应，并将减少代谢物的交换，可能导致肝细胞功能障碍和坏死。Enzan等人[57] 和Foo et al.[58]将这一发现归因于肝星状细胞的活化George等人[59]贡献[106]《埃及科学院学报》2（2015） 98E109图7e电镜下EST荷瘤小鼠肝细胞超微结构改变。细胞核（N）不规则，有脂滴夹杂。此外，大多数细胞中可见脂滴（LD）、糖原颗粒和大量次级溶酶体（L）和微粒体（m），胆小管（BC）与对照组血窦增宽，内皮细胞（EN）破坏，枯否细胞（KC）脱落。EST + GSE和GSK治疗组（DeF）肝组织有明显改善.胶原蛋白的积累导致受损肝细胞胶原蛋白分解酶肝纤维化的存在提示更晚期和更严重的肝损伤[60]。氧化应激，特别是脂质过氧化，诱导胶原蛋白合成[61]，如本研究所示而补充GSE和GSK可显著减少EST荷瘤小鼠肝组织中胶原沉积。这些结果表明，GSE和GSK对氧化剂诱导的细胞外基质成分的产生和沉积具有组织化学上，本研究中EST携带组的肝脏切片同样，El-Banhawy et al.[62]表明核酸和蛋白质水平之间存在密切的平行关系。因此，蛋白质和DNA含量的减少可归因于核病理学变化，这在本工作以及以前的研究中得到了证明[17，48，63]。同样，Salem等人[64]显示携带EAC的小鼠中他们将这些结果归因于肿瘤细胞的有丝分裂增加，具有较高的血性液体排出和毛细血管渗透性，这使得血浆蛋白能够逃逸到腹膜腔中，也可能是由于肝细胞坏死[65]。此外，肝病动物的总蛋白可能会减少[66]。由于炎症和氧化应激，在小鼠非转移性植入肿瘤的近端和远端组织中也报告了DNA损伤[67]。在《埃及生物安全和生物多样性杂志》，第2（2015） 98和109107页对照组为EST + GSE组和GSK治疗组引用显示总蛋白和DNA含量正常化以前的研究[68，69]表明，原花青素对生化变化、自由基、脂质过氧化和DNA损伤提供显著更大的保护。此外，其对DNA修复的假定贡献可能是另一个重要属性，其在葡萄保护效应中起作用[44]。电镜观察发现，EST小鼠肝组织细胞核不规则，内含脂滴。该结果与其他研究者在良性和恶性肿瘤中获得的先前结果相似[70e72]。核内包涵体实际上是细胞核被细胞质内吞。有人认为，这些内含物也可能是在有丝分裂过程中细胞质内容物被迫进入细胞核而形成的[73]，本研究中细胞核中的脂滴观察结果证明了这一点。Rose[74]进行了类似的观察，并很好地描述了人黑色素瘤、成骨肉瘤和其他肿瘤培养细胞中核内假包涵体的形成。在许多假包涵体中，可能看不到双核膜，可能是因为外膜变性和随后的解体[72，74]。此外，线粒体彼此紧密堆积;一些很大，一些很小，其他的似乎是分支或出芽。这一结果在以前的研究中得到了证实[72]。在缺铁状态下[75]以及在缺氧和高氧状态下[76]都观察到了这种线粒体多形性，这可能代表了肿瘤对肝脏的直接毒性作用。许多细胞内可见我们的研究结果与Ghadially和Parry[77]以及Parry和Ghadially[78，79]一致，他们观察到荷瘤动物肝脏中溶 酶 体 显 著 增 加 。 根 据 Telbisz et al.[80] 和 Abd El-Wahab和Fouda[17]，自噬的激活经常在不同的退化组织中观察到。溶酶体酶释放在诱导坏死变化中起关键作用而EST + GSE组和GSK组肝组织病理学改变明显改善。肝细胞核与对照组相似线粒体和平滑ER在健康外观中突出胆总管和血窦与EST组比较因此，饮食中补充GSE和GSK对EST荷瘤小鼠表现出显著的改善潜力，可能是通过减轻肿瘤介导的氧化应激和保持肝细胞结构和功能的完整性。5.结论总之，本研究证实，葡萄皮和种子处理的动物表现出体内肝脏保护和抗氧化作用，对肝损伤引起的艾氏实体瘤生长。其机制似乎主要是通过对抗自由基，从而减少氧化应激和增强抗氧化剂在Ehrlich实体瘤荷瘤小鼠介导的。[1] Noda N，Wakasugi H.癌症和氧化应激。Jpn MedAsphalt J2001;44（12）：535e 9.[2] 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