工程12（2022）128：食物安全及健康-检讨Cronopulmonaryspp的风险和影响因素

工程12（2022）128研究食物安全及健康-检讨Cronopulmonaryspp的食品安全风险和影响因素。林娜a，b，蒋秀婷a，斯蒂芬·福赛斯c，张丹凤a，沈一中a，丁玉b，王娟b，张菊梅b，吴庆平b，刘晓波，叶英旺a，b，刘晓波a合肥工业大学食品与生物工程学院，合肥230009b广东省微生物菌种收集与应用重点实验室，广东省科学院广东省微生物研究所华南应用微生物国家重点实验室，广东广州510070cFoodmicrobe.com，Keyworth NG12 5GY，UK阿提奇莱因福奥文章历史记录：收到2020年2021年2月16日修订2021年3月11日接受2021年6月24日在线提供关键词：克隆食品污染致病性毒力因子应激反应A B S T R A C T克罗伊氏菌属是一组革兰氏阴性条件致病菌，可引起新生儿和婴儿的脑膜炎、败血症和坏死性小肠结肠炎，严重时伴有神经系统后遗症近年来，由于其在儿童中的高毒力，对克罗埃西亚的兴趣显着增加。在这篇综述中，我们总结了目前的了解流行的几种重要的食物类型中的Cronoptera物种。我们讨论的反应机制，使持续在不利的生长条件，以及其致病性。我们强调由克罗诺平引起的食品安全问题以及随后的控制方法和临床治疗。©2021 The Bottoms.由爱思唯尔有限公司代表中国工程院和高等教育出版社有限公司出版。这是一篇CC BY-NC-ND许可下的开放获取文章（http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/）中找到。1. 介绍克龙线虫属（以前称为坂崎肠杆菌（E. sakazaki））是属于肠杆菌科的革兰氏阴性非孢子形成杆菌。它们在动物和人类肠道中定居[1]。Iversen等人[2]提出了E. 2008年，通过生化和DNA杂交分析，将坂崎氏菌归为Cronalgae属。目前，凤尾鱼有7种。C. sakazakii和C. 据报道，malonaticus 是 两 种 导 致 严 重 疾 病 的 物 种 。 C. muyt- jensii ， C.dublinensis，C. turicensis和C. universalis的临床意义较低，C.条件，很少有报道。新生儿的克罗伊氏菌感染已引起相当大的关注。从1961年开始，英国首次报道了住院婴儿的克罗伊氏菌。1979年，在美国梅肯的新生儿中报道了克罗伊氏菌血症病例。在荷兰（1983年、1987年）、希腊（1987年）、冰岛（1989年）和美国（1989年和2001年）也报告了其他克罗伊氏菌感染。2001年，一群克罗伊氏菌感染使美国疾病控制和预防中心（CDC）能够进行追溯调查，*通讯作者。电子邮件地址：wuqp203@163.com（Q. Wu），yeyw04@mails.ucas.ac.cn（Y.Ye）。婴儿配方奶粉（PIF）是导致婴儿感染的主要来源[3]。尽管对婴儿病例给予了关注，但克罗埃西亚可以感染所有年龄组的个体成年人的克罗埃西亚感染老年人[4]和免疫功能低下的成年人最容易感染克罗埃西亚。出生后两个月内的新生儿，尤其是体重不足的早产儿[5]，其胃酸比成人少，免疫反应也不足。随后，他们的细菌感染风险更高，病死率从50%到80%不等[6]。2002年，国际食品微生物规范委员会（ICMSF）[7]将克罗恩病定义为美国疾病控制和预防中心估计，美国每年有4至6名婴儿感染克罗伊氏菌。这是一个低估，因为没有要求向政府卫生部门报告克罗埃西亚在许多国家，婴儿肺炎衣原体感染通常可追溯到食用了被肺炎衣原体污染的PIF。然而，由于很少进行分子来源追踪分析，因此在中国没有明确的临床报告表明克罗埃西亚与相关的PIF品牌有关这一结果可能是因为追踪临床感染，https://doi.org/10.1016/j.eng.2021.03.0212095-8099/©2021 The Bottoms.由爱思唯尔有限公司代表中国工程院和高等教育出版社有限公司出版这是一篇基于CC BY-NC-ND许可证的开放获取文章（http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/）。可从ScienceDirect获取目录列表工程杂志首页：www.elsevier.com/locate/engN. 凌，X。Jiang，S.Forsythe等工程12（2022）128129食源性大肠杆菌在中国表现不佳，监测系统仍在改进[8]。克罗伊氏菌感染涉及粘附于宿主细胞表面，随后侵入肠和血脑屏障（BBB;图11）。 1 [9-11]）。临床症状包括发热和嗜睡[12]，严重感染可能导致结膜炎、胆汁性败血症、尿脓毒症或脑膜炎[13]。虽然感染克罗埃西亚的患者在抗生素治疗后可以康复，但他们往往会遭受严重的神经后遗症和发育障碍。因此，为了全面了解该病原体的潜在风险和病理生理，本文综述了该病原体在食品中的流行和分布，其在不利环境中的持久性，导致其食品安全问题的毒力因子的表达，以及改进临床管理2. 食品污染克龙线虫在自然界中广泛分布，存在于水、土壤、动物和人类粪便中[14]。研究人员正在探索克罗伊氏症的生态位及其传播途径、病原学和致病机制。因此，确定食品中的流行率将支持微生物来源跟踪研究，并应降低进一步爆发的风险。2.1. 婴幼儿食品自从英国出现首例由克罗伊氏菌引起的新生儿感染病例以来[15]，世界范围内已经有许多与婴儿食品相关的克罗伊氏菌感染爆发的报道[16，17]。因此，监测PIF和其他婴儿食品中是否存在克罗米酚非常重要。Liu等人[18]在来自中国安徽省阜阳市的87例（12.6%）PIF中发现了克龙线虫。这些产品不符合良好生产规范和质量保证计划。于二零一八年，欧盟的食品及饲料快速警报系统（RASFF）报告多个品牌的多批次PIF受污染。据认为，污染源于使用受污染的原材料已出口到中国和法国等国的PIF制造商。PIF不是唯一受关注的婴儿食品，因为C。婴儿辅助食品中的坂崎菌（1.2%~ 27%）与PIF（0.9%~ 23.1%）相似这些辅食包括配方米粉、营养饼干和婴幼儿面制品[8]。由于新生儿感染病例与重建的污染PIF有关[16]，因此2004年联合国粮食及农业组织和世界卫生组织（WHO）将克罗埃西亚列为A类病原体[19]。PIF的污染可能通过在巴氏灭菌后向配方粉或成分中添加非无菌原料而发生。PIF产品的制造可能需要在喷雾干燥之前对成分进行干混和湿混。干混工艺通常不使用高温处理，随后低水平的病原体可能在最终产品中持续存在。这种低水平的污染在随机抽样检查中可能会被遗漏。此外，在湿混合喷雾干燥过程中，空气入口和出口以及操作员产生的气溶胶可能会在喷雾干燥塔中产生外源性Cronoxidase[20]。PIF生产设施内与较高Cronectin污染相关的区域包括喷雾干燥器、地板粉末、流化床和空气过滤设施[21]。因此，巴氏灭菌仅在PIF生产的早期阶段使嗜酸乳杆菌失活，但在控制来自下游成分、过滤器、喷雾干燥塔和其他加工设备的污染方面是无效的。克罗诺韦在喷雾干燥后仍能存活[22，23].一旦PIF生产环境被Cronectin污染，它可以持续多年[24]。2.2. 即食新鲜食品除婴儿食品外，日本料理[25]、蔬菜、奶酪和各种熟肉制品[26]中也检测到了克罗伊茨。植物很可能是克罗诺斯的主要生态位[27]。这可以解释即食蔬菜（30.27%阳性）和沙拉（8.2%）的高患病率。Fig. 1. (a)新生儿颅脑感染的轴位增强T1加权磁共振成像（MRI），左额叶有一个大的环形强化的含液病变（复制自参考文献10）。[9]）。（b）喂食被克伦特罗污染的配方奶粉的幼鼠患上了新生儿坏死性小肠结肠炎（NEC）（复制）（参考文献[10]）(c)通过苏木精-伊红染色的克龙线虫感染小鼠的组织学发现：（i）大脑切片的神经胶质增生（黑色箭头，比例尺= 100μm）和（ii）脑膜炎（黑色箭头，比例尺=50μm）;（iii）肝脏切片的肝细胞变性（黑色箭头，比例尺= 50μm）和（iv）炎症（黑色箭头，比例尺= 50μm）;（v）炎症（黑色箭头，比例尺= 100μm）;和（vi）盲肠的变性（黑色箭头）和细菌菌落（白色箭头，比例尺= 100μm（转载自参考文献[11]）。N. 凌，X。Jiang，S.Forsythe等工程12（2022）128130·[29]第10段。它们在这些食物中的存在也有季节性。沙拉蔬菜、新鲜果汁和新鲜水果的商业季节通常在春季和夏季。这些温暖的月份可能为病原体在这些食物中的复制和持久性提供有利条件。在制备食物时，必须遵守良好的卫生规范，因为如果不遵守适当的清洁程序，用于加工和保存熟食的砧板、刀具和器具，原料中的微生物可能会交叉污染即食食品2.3. 脱水食品克罗诺菌对干燥具有高度抗性，这可以解释与其他肠杆菌科细菌相比，该生物体由于PIF而引起的持续性和较高数量的感染对中国14个生产商的1012份脱水米粉样品的研究表明，平均检出率为7.5%，但一个生产商的样品高达28.8%[30]。一项为期五年的荷兰生产或销售的食品中克罗埃西亚污染调查显示，干谷类食品和香料中的检出率分别约为4%和3%[31]。此外，中国调味品中的克龙线虫检出率高达57%[32]，在海水混合物中的检出率较高（6.3%）[33]。因此，在食物中加入香料而不经进一步烹煮，可能会对消费者构成危险，尤其是免疫力低下的人士。鉴于克罗恩病的流行，食品行业，特别是婴儿食品生产商，需要控制这种病原体。例如，原料和加工环境必须有效分离并定期清洁。3. 环境应力食源性病原体通常暴露于食品生产和消费者膳食之间的各种不利环境中（图10）。 2）的情况。 在对干燥、热和酸休克的反应中，Cronoptera合成物质化合物，如海藻糖、脯氨酸、甘氨酸、甜菜碱、葡萄糖、N-酰基-高丝氨酸内酯、色素和特异性蛋白质[34]（图35）。 3）。这些应激反应已被进一步研究，因为它们对食品生产中病原体的持续存在以及随后婴儿接触的增加很重要3.1. 抗干燥性克龙线虫比大肠杆菌（E.大肠杆菌）、沙门氏菌、李斯特菌和其他肠杆菌科物种[35]。在室温下储存5个月后，PIF中的克罗伊氏菌活菌计数下降约2.4个对数周期，然后在19个月后仅下降1.0个对数周期，有些菌株甚至在PIF中存活长达两年[36]。Breeuwer等人[37]提出，克罗地平通过金属离子如K+的积累和相容的可溶性物质包括海藻糖、脯氨酸和甘氨酸的合成来增加细胞内渗透压由opuCABCD操纵子和proP基因编码的CronectinOpuC和ProP系统转运脯氨酸、甘氨酸和甜菜碱，由proVWX操纵子编码的膜结合蛋白ProU系统可将植物保护剂转运到细胞中以抵抗干燥，在干燥反应期间上调[38]。在正常培养条件下，稳定期的海藻糖含量为0.04lmol·mg-1，干燥后增加了5倍多，达0.23lmol·mg-1。相反，在这些干燥强制降解条件下，在其他肠杆菌科中未检测到海藻糖的积累。C. 坂崎ATCC 29544抗干燥因子已经使用相对和绝对定量（iTRAQ）的sobaric标签进行分析。这揭示了海藻糖合成基因操纵子OstAB和海藻糖转运蛋白基因TreABCF的上调[38]，其产物可以在干燥条件下保护磷脂膜和外膜蛋白[39]。由高渗和干燥环境引起的生理变化Riedel和Lehner [40]使用二维凝胶电泳（2-DE）观察到，在物理干燥和1 mol L - 1 NaCl高渗培养基下，Cronelus的应激反应显示，周质蛋白OsmY的表达在高渗培养中上调，而氨基酸生物合成和他们的转运蛋白等作为c-谷氨酰转肽酶显著下调。这导致减缓生长和新陈代谢。热休克蛋白、DNA结合蛋白Hns（热稳定的核结构蛋白）、伴侣蛋白GroES和OmpA的表达持续上调，这有助于细胞应对干燥。此外，产生胶囊的Cronectin可在PIF中回收，2.5年，与非胶囊化菌株不同[36]。细胞外荚膜多糖作为大肠杆菌生物膜的主要成分，使细胞能够在不锈钢和玻璃基质上形成生物膜，从而增强其存活能力[41，42]。我们的团队[43]发现，C。寡聚半乳糖醛酸裂解酶基因对丙二酸菌生物膜的影响显著，提高了该菌在渗透胁迫条件下的适应性3.2. 耐热性用开水将PIF再水化并冷却至70 °C是避免食用被Croneclampsia污染的PIF的重要步骤[44]。克罗诺巴克的最佳生长温度范围为5.5至47.0°C，并且它可以在54至64 °C的热条件下存活[45]。如Breeuwer等人所报道，在58 °C下，克朗替尼的十进制还原时间（D值）[37]，并且从婴儿食品中分离的一些克罗伊氏菌菌株在65°C下保持5分钟存活[46]，这表明PIF应该用> 70 °C的水而不是具有温和热量的水重构。Riedel和Lehner[40]和Asakura等人[47]提出，与热敏菌株相比，Mfla-1165和翻译起始因子infB在耐热菌株中特异性上调，可用作耐热性的分子标记。此外，thrB-Q基因组岛的携带同样，由于类似的生理调节反应，暴露于低湿度环境的沙门氏菌可以通过交叉保护表现出对高温过程的增强抗性[49]。Cronalcium的抗干燥性也导致耐热性增加[50，51]。尽管这一主题对于PIF用热水再水化后Cronectin的持久性很重要，但很少有研究关注抗干燥性和耐热性之间的3.3. 耐酸性一般来说，成人胃液的pH值低于2，而喂食PIF的婴儿胃液pH值约为3.6。这种pH值的差异与C. 坂崎氏菌在暴露于pH 3.0 90分钟后仍能生长[52]。因此，受污染的PIF或其他补充食物中的克罗埃西亚可以在胃酸中N. 凌，X。Jiang，S.Forsythe等工程12（2022）128131图二、来自食物和人类宿主的各种微生物压力 酸是一种常见的食品防腐剂和胃中的消毒剂;盐是一种常见的食品防腐剂和施加渗透压的天然宿主防御;谷物副产品或粉末食品的低水分活性和食品加热过程为食源性病原体的生长创造了不利的环境;口腔粘膜是细菌在食物摄入过程中暴露的第一个保护屏障，口腔和胃产生的酶也可以抑制生长;胃肠道中的有机酸、药物、氧化物和免疫因子是细菌面临的不可避免的应激，氧化物和一氧化氮（NO）是免疫细胞释放的物质，免疫因子是免疫细胞诱导的宿主防御反应。CSF：脑脊液。屏障并进入小肠，引起肠道炎症，如坏死性小肠结肠炎。酸处理延迟了克龙线虫的生长，这是由于细胞内阴离子的积累导致DNA和蛋白质的损伤。然而，正常的细菌形态得到恢复，表明对酸胁迫的耐受性和从细胞损伤中恢复[53]。克龙麦有一系列的分子策略来应对酸 胁 迫 。 这 包 括 cpxR 、 ompR[54] 、 rpoS 、 hfq[55] 、 grxB[53] 和phoP/phoQ[56]表达的上调。这些酸应激反应参与感知和修复受损的蛋白质和核酸，并通过调节氧化应激。细菌具有共同的应激反应机制，在对各种环境胁迫的耐受中产生交叉抗性效应。这使得它们的抗压力调节路径复杂多样。因此，今后的研究不仅要关注与特定环境胁迫反应相关的蛋白质和基因的独立调控和代谢途径，还应关注集中的胁迫调控系统和交叉保护机制。3.4. 抗菌素耐药性从多种食物来源中分离出的克罗伊氏菌已进行了抗菌药物敏感性筛选。已经发现了抵抗许多临床上重要的抗生素，包括青霉素、克林霉素、头孢菌素、万古霉素和四环素[57]。然而，越来越多的耐多药克罗埃西亚的报道与诱导型AmpCN. 凌，X。Jiang，S.Forsythe等工程12（2022）128132图3.第三章。克龙线虫的响应在不利的环境下。OM和CM分别代表外膜和细胞质膜;HSP：热休克蛋白; Hns：热稳定的类核结构蛋白。β-内酰胺酶和耐药基因的水平传播。Caubilla-Barron等人[58]在新生儿重症监护病房（NICU）爆发期间分离出三种具有b-内酰胺酶活性的克罗埃西亚从气管分泌物中分离的菌株死亡个体的血液对氨苄西林、头孢呋辛钠、头孢噻肟和阿莫西林/克拉维酸耐药。同时，从新生儿脑膜炎病例分离的菌株显示存在编码AmpCβ-内酰胺酶的blaDHA-1，携带在质粒上这赋予头孢菌素耐药性。也5个新的耐药基因（mph（A）、sul1、aadA2、dfrA12和aac-IId）被检测到[59]。粘菌素作为促生长剂在我国等国家已应用最近，mcr-1和mcr-10被鉴定为克罗伊氏菌中的质粒携带的粘菌素耐药基因[60，61]。质粒编码的抗菌药物耐药性的传播和抗菌药物耐药性速率的加速可能归因于抗生素的过度使用[62这种抗菌素耐药性对全球公共卫生构成日益严重的威胁。为了减少正常肠道菌群的紊乱和克罗埃西亚抗菌素耐药性的传播，研究人员研究了新的或联合治疗的使用。例如，双歧杆菌产生的代谢物已被证明可以减轻由C.坂崎氏梭菌[65]，鼠李糖乳杆菌能抑制坂崎氏梭菌的生长。坂崎通过改变细胞膜，膜渗透性[66]。亚抑菌浓度的柠檬醛可增加C. sakazakii对氨苄西林和头孢西丁的反应[67]。硫辛酸[68]能够抑制C。sakazakii在体外，表明益生菌及其产品可以进一步开发为有效治疗克罗恩病感染的策略。克罗诺明特异性地从细胞外基质中获取K+、海藻糖、脯氨酸和甘氨酸，同时在体内干燥过程中增强海藻糖、脯氨酸和甘氨酸的合成。此外，热休克蛋白HSPs、DNA结合蛋白Hns、伴侣蛋白GroES和外膜蛋白OmpA也对脱水耐受性有益;Mfla-1165、翻译起始因子infB、sigma因子rpoS和thrB-Q基因组岛参与了热耐受性;克罗地平通过增加应激反应调节因子、伴侣蛋白和氧化应激反应相关基因的表达来抵抗酸胁迫;分泌蛋白G1和G2通过增加蛋白质的表达来抵抗氧化应激反应pGW 1质粒介导的β-内酰胺酶和耐药基因的水平转移是克罗埃西亚在药物治疗下生存的必要条件;海藻糖是生物膜中胞外多糖的重要组成部分，它使克罗埃西亚的生物膜中的胞外多糖含量增加，从而使克罗埃西亚的耐药基因水平转移。在各种逆境下为人类4. 病理生理胃肠道病原体通常通过跨越许多物理、化学、微生物和免疫屏障引起疾病，N. 凌，X。Jiang，S.Forsythe等工程12（2022）128133主持人克罗伊氏菌编码许多参与致病过程的毒力因子，促进对肠屏障和BBB的粘附、侵袭和破坏（图11）。4）. 研究者认为新生儿肺炎克罗伊氏菌感染率高是由于肠屏障不完整，使肠粘膜易感染肺炎克罗伊氏菌，导致细菌移位到其他组织[69]。在肠道免疫功能紊乱的同时，克罗恩病还可引发一系列细胞因子，引起炎症级联反应，导致肠道进一步损伤，最终导致肠道坏死。此外，克罗埃西亚可进入血流（菌血症），侵入脑的微血管内皮细胞，并穿过血脑屏障，引起危及生命的脑膜炎[69]。4.1. 附接克罗伊氏菌附着于宿主组织受体是疾病的初始步骤，例如使用菌毛粘附于肠上皮细胞表面[70]，随后是宿主细胞入侵[71]。菌毛由sfp基因簇编码[72]，P-菌毛增加新生儿脑膜炎的感染率[73]。另外，C. 坂崎ES5菌株与粘附过程相关，鞭毛蛋白FlhA、FliG和FliC参与自凝集[74]。在穿过肠屏障后，细菌侵入循环系统，引起严重的全身感染[75]，并可能穿透BBB。亚抑制浓度的硫辛酸抑制了C. sakazakii感染，从而降低病原体对宿主细胞的侵袭能力[68]。4.2. 入侵宿主的免疫平衡被入侵的病原体扰乱。通常，宿主反应是通过吞噬作用、免疫细胞清除、免疫因子分泌、细胞粘蛋白抑制异常细胞增殖，同时增强紧密连接蛋白的表达以最大限度地减少损伤[76]。然而，克罗埃西亚能够侵入肠上皮细胞，进入血液，随后感染肝脏和脾脏，并穿过BBB进入大脑[77]。见图4。嗜热链球菌的毒力因子。入侵宿主细胞。HBMEC：人脑微血管内皮细胞。N. 凌，X。Jiang，S.Forsythe等工程12（2022）128134·外膜蛋白、脂多糖、肠毒素、侵袭和纤溶酶原激活物是嗜铬细胞瘤侵入宿主的主要因子。为了加重感染，线虫通过铁获取系统、阳离子外排系统、群体感应系统以及催化和利用唾液酸等途径在宿主体内生存和繁殖。4.2.1. 外膜蛋白目前普遍认为，嗜铬细胞瘤的侵袭与外膜蛋白（OMPs）的表达密切相关。这些蛋白质包埋在革兰氏阴性菌的磷脂双层外。Cronectin的外膜蛋白A（OmpA）是Cronectin和F-菌毛介导的结合的受体。Mittal等人[78]发现OmpA导致神经元浸润、出血和神经胶质增生。这表明OmpA能够使Cronectin在新生大鼠的血液中增殖并穿过小肠屏障。OmpA与神经连接蛋白结合，导致脑微血管内皮细胞的侵袭，并通过BBB转移以诱导细胞凋亡和脑膜炎[79]。此外，invasin介导C. 坂崎氏菌侵入宿主的内脏器官。在体外和体内，与OmpA的致病性存在协同效应[80]。外膜蛋白X（OmpX）是一种具有小分子量，与OmpA协同作用，促进C.肠组织的坂崎。没有OmpX结果在C. sakazakii侵袭和粘附至Caco-2和INT-407肠细胞系[81]。微阵列分析表明，Cronopulmonary分泌外膜囊泡（OMV）包裹这些OMP，这些OMP被肠细胞吸收，增加细胞增殖并刺激宿主4.2.2. 脂多糖脂多糖（LPS），也称为0-抗原或内毒素，包埋在革兰氏阴性细胞壁的外膜中。当细菌死亡或受到物理化学攻击时，它就会释放出来。以往的研究表明，LPS暴露可以刺激宿主的免疫应答并提高免疫力，并且高浓度的LPS或长期暴露于低浓度的LPS会破坏宿主的稳态并诱发炎症，例如糖尿病和脂肪肝。摄入的LPS降低了婴儿肠壁的通透性，导致细菌侵入和全身感染[69]。LPS是克罗恩病的重要毒力因子，其在被toll样受体TLR2或TLR4识别后触发一系列级联反应和促炎因子的表达[69]。本课题组发现腹腔注射C. 坂崎LPS导致小鼠肠道菌群紊乱，肠紧密连接蛋白（Claudin-4和Occludin）、TLR 4和诱导型一氧化氮合成酶iNOS表达上调，肠组织损伤（数据未发表）。值得注意的是，细菌LPS由于其在PIF加工过程中的耐热性而难以完全消除，导致最终产品中存在内毒素[69]。然而，用于检测或限制PIF中LPS的安全标准尚未实施。因此，先天免疫系统不成熟的婴儿如果摄入含有高水平LPS的奶粉，可能会增加肠道菌群引起菌血症或内毒素血症的风险。4.2.3. 肠毒素Pagotto等人[83]首次描述了18个克罗伊氏菌分离株中的4个这些肠毒素样化合物增加了肾上皮细胞中环磷酸腺苷（cAMP）的水平，导致水、钠、氯和钾的释放。肠细胞中的碳酸氢钠不断分泌到肠腔中，引起腹泻。Raghav和Aggarwal[84]鉴定了一种分子量为66 kDa的肠毒素样化合物，并提出其可能是Cronectin污染PIF的风险因素，因为其在90°C下处理 30min后仍具有活性。研究表明，当每毫升克罗伊氏菌注射104- 10 5个菌落形成单位（CFU）时，72 h后Chal-challed小鼠的存活率仅为33%然而，编码该毒素的基因尚不清楚，其性质和形成机制有待进一步研究。4.2.4. 铁采集系统铁作为一种重要的辅酶，参与在铁限制的条件下，Cronoptera分泌铁载体，对Fe3+具有高亲和力。Fe3+-铁载体复合物被转移到细胞质中释放铁.Grim等人[86]比较了来自不同来源的231个克龙线虫基因组中的铁获取系统，发现所有克龙线虫分离株都有编码好氧肌动蛋白和肠杆菌素样铁载体的基因类需氧肌动蛋白铁载体基因簇由iucABCD组成，其受体基因iutA由质粒携带.相比之下，肠杆菌素样侧基基因，即entD、fepA、fes、ybdZ、entF和entCEBAH、fepB、entS、fepDGC和fepE，位于染色体上的三个不同位置此外，Cronoptera物种还表达两个铁转运系统FeO和Efe，分别由feoABC和efeUOB编码这些用于从环境中获得Fe2+这些铁转运系统的表达通常通过与相关启动子位点结合的铁摄取调节因子（Fur）蛋白的相互作用而被Fur家族是参与调节金属离子摄取和金属细胞稳态的细菌蛋白质家族在许多细菌中，毛蛋白负责控制细胞内铁的浓度尽管铁是必不可少的，但它的浓度必须在广泛的环境条件下仔细调节这是因为高浓度可能是有毒的，因为会形成活性氧物质。4.2.5. 其他毒力因子随着蛋白质组学和转录组学的发展，已提出了许多新的克罗伊氏菌毒力因子. 表1总结了这些情况。研究表明，只有C。sakazakii和C.turicensis含有编码唾液酸利用的基因nanAKTR和yhcH[87]。因此，母乳和PIF中存在的外源性唾液酸以及脑神经节苷脂和肠粘液的组分可用作这些物种生长的碳源。这可能导致新生儿脑膜炎的严重程度和随后的脑损伤。有趣的是，新生儿脑膜炎E. coilK1致病变种利用唾液酸在细胞表面形成囊膜，保护机体免受宿主免疫反应的影响，但这一机制在C.坂崎[88]。此外，嗜酸乳杆菌还能产生大量的由大肠酸（CA）和K抗原组成的胞外多糖。K2：CA2型荚膜梭菌可能是新生儿感染脑膜炎的重要因素之一。坂崎克隆复合体4 [88]. 然而，没有实验证据支持胶囊成分与脑膜炎之间的关系. K2：CA2胶囊是否参与通过BBB仍是未知的。因此，预防和控制由于克罗伊氏菌属的感染是一个重要的问题，需要改进对克罗伊氏菌发病机理的理解。克罗埃西亚产生纤溶酶原激活因子，显示对血清杀菌活性的抗性[89]。N. 凌，X。Jiang，S.Forsythe等工程12（2022）128135表1Cronelae物种的拟议毒力因子毒力因子相关基因功能促进对宿主细胞的促进对宿主细胞的鞭毛flhA、fliG、fliC参与病原菌的自动聚集和趋化作用唾液酸利用nanAKRT，yhcH有助于致病菌在肠道的定植和神经节苷脂外排系统cusC编码阳离子外排操纵子，介导脑微血管内皮细胞的侵袭铁采集系统Fur、iucABCD/iutA、entD、fepA、fes、ybdZ、entF、entCEBAH、fepB、entS、fepDGC、fepE、feoABC、efeUOB、eitCBAD编码铁获得系统并与纤溶酶原激活剂一起参与致病过程的iucABCD/iutA和eitCBAD位于RepFIB质粒上纤溶酶原激活剂cpa与血清耐药性及病原菌的传播和侵袭有关扩散信号因子（DSF）群体感应rpfF调节细胞中的环二鸟苷酸（c-di-GMP）并提高致死率由RpfF介导的扩散信号因子（DSF）群体感应系统可以通过调节细胞内环二鸟苷酸（c-di-GMP）的浓度来影响生物膜形成、菌落形态和运动。这在细菌的粘附和侵入过程中也具有重要作用[90]。4.3. 凋亡诱导Hunter等人[91]提出，克罗诺韦可能通过调节小鼠肾上皮细胞的细胞内信号通路诱导凋亡一氧化氮（NO）合成系统在IEC-6肠上皮细胞中被激活以释放大量NO并在克罗恩病感染期间引起细胞凋亡（图5）。此外，克罗米芬诱导肠粘膜上皮细胞凋亡增加，可破坏肠屏障，导致肠屏障通透性增加，细菌移位。而保加利亚乳杆菌预处理克罗伊氏菌感染的小鼠模型可减少NO的合成，防止IEC-6细胞的凋亡类似地，在Cronectin攻击之前，通过Caco-2细胞的柠檬醛预处理可以检测到iNOS和胱天蛋白酶-3酶活性的下降从而减轻NO的产生和肠上皮细胞的凋亡，对抗C.坂崎[67]。4.4. 免疫逃避C. 坂崎病毒可在人U937巨噬细胞中持续96小时，甚至在其中复制[10]，这可能导致全身感染[77]。Townsend等人[92]将克罗伊特注射到新生小鼠的脑中，表明浸润的巨噬细胞和中性粒细胞形成炎症聚集以吞噬细菌，并且大多数克罗伊特菌株在巨噬细胞中持续存在48小时。C. 坂崎SOD基因编码的超氧化物歧化酶（SOD）能中和巨噬细胞内的活性氧（ROS），其活性也影响pH值。这降低了ROS应激和宿主免疫应答，从而改善了细胞的免疫功能。[93]第93话死亡此外，研究表明，CronectinOmpA干扰树突状细胞的成熟。这些树突状细胞诱导较少或甚至不诱导T细胞增殖，使得Cronectin能够逃避宿主免疫防御机制[94]。克罗诺地平的有害影响 感染是由通过五个关键过程。首先，克罗米芬诱导紧密连接蛋白（occludin和occluden（ZO）-1）表达减少;其次，克罗米芬通过NOD样受体家族含芘结构域蛋白3（NLRP 3）/caspase 1/凋亡相关斑点样蛋白（apoptosis associatedspecklike protein，apoptosis associated speckle，apopto5. 前景克罗伊氏菌在所有年龄组都是致病性的，可引起严重感染，死亡率高。在因相关食品安全事件而被确认为PIF中的“A”类病原体后因此，了解食品中克罗伊氏菌的外源性传播特征，并追溯其污染源，将有助于提高该微生物的食品安全标准。因此，这些策略将降低克罗伊氏菌感染和爆发的风险。同时，其发病机制仍需进一步阐明。首先，需要更好地理解环境应激途径，特别是因为加工可能诱导生存机制。其次，K2：CA2型胶囊被认为是引起新生儿脑膜炎感染的菌株所特有的。然而，这是否是一个因果关系是未知的.最后，应用抑菌物质，如芳香精油、多酚和源自probiotics的材料也可能是解决克罗诺巴杆菌多药耐药菌株问题的新策略。致谢我们衷心感谢中国国家重点研发计划的资金支持，（2017 YFC1601202 和 2017 YFC 1601200 ） ; 中 国 博 士 后 科 学 基 金 （ 2021M690854）国家自然科学基金项目（31671951和31972175）;广东省珠江人才工程地方创新研究团队项目（2017 BT 01 S174）和中央高校基础研究基金（JZ 2020 HGQA 0151）。遵守道德操守准则Na Ling、Xiuting Jiang、Stephen Forsythe、Danfeng Zhang、Yiz-hong Shen、Yu Ding、Juan Wang、Jumei Zhang、QingpingWu和Yingwang Ye声明他们没有利益冲突或财务冲突需要披露。N. 凌，X。Jiang，S.Forsythe等工程12（2022）128136图五、寄生虫引起的宿主细胞屏障和免疫应答GSDMA：gasdermin A; NT：N-末端; ASC：含有C-末端胱天蛋白酶募集结构域的凋亡相关斑点样蛋白; NLRP 3：含有NOD样受体家族pyrin结构域的蛋白3; BCL：B细胞淋巴瘤; BAX：BCL 2相关X蛋白; IL：白细胞介素; ZO：闭合带; TNF：肿瘤坏死因子; IFN：干扰素。引用[1] Forsythe SJ.更新Cronoptera属。Ann Rev Food Sci Technol2018;9：23-44.[2] Iversen C，Mullane N，Mccardell B，Tall BD，Lehner A，Fanning S，etal.Cronoblagen. nov.，一个新的属，以容纳坂崎肠杆菌的生物群，并提出了坂崎克罗诺杆菌新属，组合11月，丙二酸克罗诺杆菌，新种，图里克罗诺杆菌，新种，穆氏克罗诺杆菌，都柏林克罗诺杆菌，Cronopteragenomomospecies1和3个亚种，Cronopteradublinensissubsp. 都柏林亚种11月，都柏林克罗诺杆菌亚种洛桑亚种nov.和都柏林克罗诺杆菌（Cronobacter dublinensissubsp.乳杆菌亚种Nov.Int J Syst Evol Microbiol 2008;58（6）：1442-7.[3] 张文良，张文良，张文良. 1961-2018年婴儿早期的食品安全和侵入性克罗伊氏菌感染急诊感染疾病2020;26（5）：857-65。[4] Alsonosi A，Hariri S，Kajsík M，Oriešková M，Hanulík V，Röderová M，et al.ThespeciationandgenotypingofCroneclampsiaisolatesfromhospitalisedpatients. 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