「苯并咪唑类化合物的合成与活性研究」

埃及基础与应用科学杂志5（2018）100完整文章苯并咪唑类化合物的合成及抗菌、抗结核和抗癌活性研究Snehlata Yadava，Balasubramanian Narasimhana，Siong Meng Limb，c，Kalavathy Ramasamyb，c，Mani Vasudevand，Syed Adnan Ali Shahb，e，Abhishek MathurfaMaharshi Dayanand大学药学院，Rohtak 124001，印度bUniversiti Teknologi MARA（UiTM），42300 Bandar Puncak Alam，Selangor Darul Ehsan，Malaysiac协作药物发现研究（CDDR）小组，药物生命科学研究社区，Universiti Teknologi MARA（UiTM），40450 Shah Alam，Selangor Darul Ehsan，MalaysiadQassim大学药学院药理学和毒理学系，Buraidah 51452，沙特阿拉伯eAtta-ur-Rahman Institute for Natural Products Discovery（AuRIns），Universiti Teknologi MARA，Puncak Alam Campus，42300 Bandar Puncak Alam，Selangor D.E.，马来西亚f国家真菌分类中心合作研究组（与环境生物技术&工程公司合作），印度新德里阿提奇莱因福奥文章历史记录：2017年7月8日收到收到修订版2017年10月17日接受2017年11月5日2017年11月14日在线发布保留字：微生物耐药性MCF 7细胞系异柠檬酸裂解酶泛酸合成酶A B S T R A C T合成了一系列苯并咪唑衍生物（1发现化合物10是最有活性的抗菌剂。体外抗M.进一步评估了结核分枝杆菌在小鼠中的体内活性和它们抑制重要分枝杆菌酶的能力，异柠檬酸裂解酶、泛酸合成酶和分支酸脱氢酶。在抗结核评价中，证明对小鼠具有致死性和高毒性的化合物的剂量为5.67 mg/kg，而致死剂量从1.82 23 mg/kg至3.23mg/kg体重的小鼠。发现1.34 mg/kg的剂量对每种动物都是安全的的化合物。所有化合物均抑制分枝杆菌酶，但抑制程度低于用作阳性对照的硫酸链霉素。化合物19对异柠檬酸裂解酶、泛酸合成酶和分支酸脱氢酶的抑制率分别为67.56%、53.45%和47.56%，是所合成的苯并咪唑衍生物中最有效的此外，化合物19还表现为比5-氟尿嘧啶更有效的抗癌剂（IC50 = 0.0013mM），对抗乳腺癌细胞系（MCF 7）。©2017 曼 苏 拉 大 学 。 由 爱 思 唯 尔 公 司 制 作 和 主 持 这 是 一 篇 基 于 CC BY-NC-ND 许 可 证 的 开 放 获 取 文 章（http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/）。1. 介绍自20世纪早期Ehrlich发现抗菌染料以来，化疗彻底改变了感染性疾病的治疗，并为人类健康和长寿的伟大胜利铺平了道路对当前使用的抗菌药物的耐药性的出现导致研究人员对感染性疾病重新产生兴趣，以开发新的化学实体来对抗它们[1结核病（TB）是由结核分枝杆菌（M.结核病），仍然是全世界高死亡率的关键原因，尽管由于基因突变导致分枝杆菌对一线抗结核药物产生耐药性，高效抗结核药物很方便[5]。为了对抗分枝杆菌的耐药性，需要鉴定新的焦油-*通讯作者。电子邮件地址：naru2000us@yahoo.com（B. Narasimhan）。对M来说是独一无二的结核病，这是在人类中不存在的，其阻断将证明对细菌是致命的，或者使其对宿主免疫反应极其敏感[6]。分支酸裂解酶（CM）、异柠檬酸裂解酶（ICL）和泛酸合成酶（PS）是M. 结核病[7]。分支酸盐是重要分子如叶酸、甲基萘醌、分枝杆菌素和芳香族氨基酸的前体。莽草酸途径利用CM作为催化分支酸异构化的关键酶之一，以预苯酸盐用于分枝杆菌中L-苯丙氨酸和L-酪氨酸的生物合成[8，9]。乙醛酸代谢分流采用ICL作为细胞物质生物合成的主要代谢途径中的重要酶，脂肪酸可能是M.结核病在C2物质上生长[10]。PS催化D-泛解酸和b-丙氨酸缩合生成泛酸，用于分枝杆菌中辅酶A和酰基载体蛋白的生物合成[11]。https://doi.org/10.1016/j.ejbas.2017.11.0012314- 808 X/©2017曼苏拉大学。由爱思唯尔公司制作和主持这是一篇基于CC BY-NC-ND许可证的开放获取文章（http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/）。可在ScienceDirect上获得目录列表埃及基础与应用科学杂志杂志主页：www.elsevier.com/locate/ejbasS. Yadav等 /埃及基础与应用科学杂 志 5（2018）100-109101乳腺癌是女性最常见的癌症，占所有女性癌症的23%，据估计，1.15 2002年新增病例100万例。当考虑到两性时，它排名第二。超过一半的病例发生在工业化国家-欧洲约361，000例（占女性癌症的27.3%），北美约230，000例（31.3%）。世界上大多数发达地区的发病率都很高（日本除外，在日本，乳腺癌排在结肠直肠癌和胃癌之后，居第三位），北美的年龄标准化发病率最高（每10万人中有99.4人）。发病率比较适中在东欧、南美洲、南部非洲和西亚，乳腺癌仍然是这些地区妇女最常见的癌症[12]。为了遏制乳腺癌存活者的耐药性增加和负担不起的治疗的威胁，迫切需要新的和成本有效的化疗剂。苯并咪唑，也称为苯乙二恶啉，是现代研究人员选择的杂环部分[13]。咪唑（生物活性药效团）的存在使其成为具有广泛生物活性的多功能杂环，如抗组胺[14]，抗溃疡，抗结核[15]，抗氧化剂[16]，抗HIV[17]，抗炎[18]，肛门炎[19]，抗氧化剂[19]。gesic[19]，抗菌剂[20]，抗原虫，抗旋毛虫病[21]，降压[22]，抗癌[23日]DNA结合[24]和抗菌活性[25]。根据上述发现，并在继续我们对苯并咪唑衍生物的研究[26]中，我们在此报告了一系列新的苯并咪唑衍生物的合成、抗微生物、抗结核和抗癌评价2. 实验2.1. 材料和方法分析级的化学品购自商业来源，并且不经进一步纯化而原样使用。用于抗微生物活性的培养基获自Hi-media公司。用于抗微生物活性的微生物型细胞培养物（MTCC）购自IMTECH，Chandigarh。使用KBr压片法在Bruker 12060280，软件：OPUS 7.2.139.1294分光光度计上记录红外（IR）光谱，并以cm-1表示。质子核磁共振（1HNMR）和13CNMR谱在BrukerAvanceIII600核磁共振仪（分别在600和150MHz）上在氘代DMSO低场至四甲基硅烷标准物中记录，化学位移记录为d（百万分率）.熔点通过开放玻璃毛细管法测定，并且未校正。通过在硅胶-G板上进行的TLC确认反应进程，并在碘室中观察斑点。LCMS数据记录在印度 Panjab 大 学 的 Waters Q-TOF 微 质 量 （ ESI-MS ） 上 。 在CHNN/CHNS/O分析仪（Flash EA 1112 N系列，Thermo finnigan，意大利）上进行合成衍生物的元素分析2.2. 合成2.2.1. 用于合成2-（1H-苯并[d]咪唑-2-基硫基）乙酸乙酯的通用程序将含有2-巯基苯并咪唑（0.03 mol）、氢氧化钾（0.03 mol）和60 ml乙醇的混合物搅拌并在78-90 ℃下加热10-15 min。然后一次性加入氯乙酸乙酯（0.03 mol），由于放热反应导致温度升高至30-40 ℃。在室温下搅拌24小时后，将反应混合物加入到冰（100克）中并进一步搅拌半小时，保持温度在0-10 ℃。如此获得的闪亮的白色沉淀物被填充。使用抽吸进行处理，并通过用水反复洗涤使其不含氯化物。干燥的产物最后用乙醇重结晶。2.2.2. 用于合成乙基-2-（1H-苯并[d]咪唑-2-基硫基）乙酰肼的通用程序将2-（1H-苯并[d]咪唑-2-基硫基）乙酸乙酯（0.01mol）和水合肼（0.06mol）的精馏酒精溶液在水浴上温和搅拌3-4 h，得到乙基-2-（1H-苯并[ d ]咪唑-2-基硫基）乙酰肼通过TLC确认反应的进程。将溶液浓缩并在冰箱中保持过夜。将形成的乳白色沉淀过滤、干燥并从水中重结晶。2.2.3. 用于合成苯并咪唑衍生物（1- 20）的一般程序将乙基-2-（1H-苯并[d]咪唑-2-基硫基）乙酰肼（0.01mol）的溶液倒入适当的芳醛（0.01mol）在沸腾乙醇中的溶液中，并使用1-2滴冰醋酸作为催化剂回流适当的时间用薄层色谱法监测反应进程反应完成后，通过蒸馏除去过量的溶剂，并将浓缩物放在一边进行沉淀。过滤所得产物，然后用稀乙醇洗涤并用乙醇重结晶。2.2.4. 苯并咪唑衍生物的光谱数据（12.2.4.1. 2-（1H-苯并[d]咪唑-2-基硫代）-N-O-（2-甲氧基亚苄基）乙酰肼（1）。桃红色结晶粉末; mp 145 - 147 ° C;产率94.08%; Rf 0.54（苯：氯仿6：4）; IR（cm-1）：对于2 °酰胺为3425 N A H str.，对于咪唑为2838 N A H str.，对于2 °酰胺为1669 C@O str，对于硫醇为745 C A S str，656酰胺的OCN变形; 1 HNMR（DMSO，d）：3.85（s，甲氧基的3H），4.98（苯并咪唑的s，NH），7.12 - 7.77（m，8H，芳香族），8.13（s，2 °酰胺的NH）; 13 C NMR（DMSO，d ） ： 39.90 CH2 脂 族 ， 55.54 CH3 脂 族 ， （ 112.59 ， 119.90 ，121.37，130.18，132.24，158.71）苯的C，苯并咪唑的（120.54，123.01，139.29，149.83）C，142.52 CH脂族基团，酰胺的168.97 C;EIMS m/z 341 [M +1]+;肛门计算值对于C17H16N4O2S的分析计算：C，59.98; H，4.74; N，16.46; S，9.42。实测值：C，59.97; H，4.72;N，16.47; S，9.40。2.2.4.2. 2-（1H-苯并[d]咪唑-2-基硫基）-N'-（3-甲氧基亚苄基）乙酰肼（2）。黄色结晶粉末; mp 158 - 160 ° C;产率94.08%; Rf 0.41（苯：氯仿6：4）; IR（cm-1）：2 °酰胺为3431 N A H str.，咪唑为3047 N AH str.，2 °酰胺为1668 C@O str.，芳烷基醚为1052 C A O A Cstr.，硫醇为750 C A S str.; 1HNMR（DMSO，d）：3.79（s，甲氧基的3H），4.59（苯并咪唑的s，NH），7.12 - 8.00（苯并咪唑的m，8H），8.18（s，2 °酰胺的NH）; 13 C NMR（DMSO，d）：40.03 CH2脂肪族，55.18 CH3脂肪族，（116.26，119.97，121.30，129.97，135.15，159.48）苯的C，（115.73，122.25，140.74，149.81）苯并咪唑的C，143.38 CH脂族基团，169.84酰胺的C; EIMS m/z 341 [M +1]+;肛门计算值对于C17H16N4O2S的分析计算：C，59.98; H，4.74; N，16.46; S，9.42。实测值：C，59.96;H，4.73; N，16.45; S，9.41。2.2.4.3. 2-（1H-苯并[d]咪唑-2-基硫代）-N-O-（4-甲氧基亚苄基）乙酰肼（3）。棕色粉末; mp 208-对于咪唑，1651 C@ O str对于2°酰胺，1104 CA OA C str的芳烷基醚，728 CA S str的硫醇;1HNMR（DMSO，d）：3.81（s，3 H的甲氧基），6.927.98（s，2°酰胺的NH）;13 C NMR（DMSO，d）：39.90 CH2脂族，55.18 CH3脂族，（114.05，127.76，127.87，153.58，159.90）C芳族，140.59 CH脂族，170.21酰胺的C; EIMSm/z341 [M + 1]+; Anal.计算值对于C17H16N4O2S的分析计算：C，59.98; H，4.74; N，16.46; S，9.42。实测值：C，59.97; H，4.71; N，16.45; S，9.39。102S. Yadav等 /埃及基础与应用科学杂 志 5（2018）100-1092.2.4.4. 2-（1H-苯并[d]咪唑-2-基硫基）-N-O-（2，4-二甲基亚苄基）乙酰肼（4）。桃红色粉末; mp 206产率65.76%;Rf0.51（苯）; IR（cm-1）：对于2°酰胺为3439 NAHstr.，对于2°酰胺为3019 NA H str.对于咪唑，2°酰胺为1653 C@ Ostr，芳烷基醚为1273 CAOAC str，平面外弯曲为888 CAH，硫醇为743 CAS str;1HNMR（DMSO，d）：6.64-苯的（161.49）C，苯并咪唑的（115.87，126.48，136.24）C153.60 CH脂族基团，170.15 C的酰胺; EIMSm/z371 [M + 1]+;计算值对于C18H18N4O3S的分析计算：C，58.36; H，4.90; N，15.12; S，8.66。实测值：C，58.34; H，4.92; N，15.09; S，8.62。2.2.4.5.2-（1H-苯并[d]咪唑-2-基硫代）-N'-（3，4，5-三甲氧基亚苄基）乙酰肼（5）。桃红色晶体; mp 152-醚，硫醇的761 CA S链; 1HNMR（DMSO，d）：3.82（s，亚甲基的2 H）， 4.61（苯并咪唑的s，NH），6.96-计算值对于C19H20N4O4 S的分析计算：C，56.99; H，5.03; N，13.99; S，8.01。实测值：C，56.98; H，5.01; N，13.96;S，8.00。2.2.4.6. 2-（1H-苯并[d]咪唑-2-基硫基）-N'-（4-羟基亚苄基）乙酰肼（6）。 芥末黄色粉末; mp 104 -106°C;产率92.28%;Rf0.19（苯：氯仿6：4）;IR（cm-1）：对于苯酚为3621OAHstr，对于2°酰胺为3368NAHstr，对于2°酰胺为2884NAHstr。对于咪唑，2°酰胺为1593 C@ Ostr ， 面 外 弯 曲 为 832 CA H ， 硫 醇 为 735CA S str; 1HNMR（DMSO，d）：3.97（s，亚甲基的2 H4.56（s，苯并咪唑的NH），6.95计算值对于C17H17N4O2S的分析计算：C，58.88; H，4.32; N，17.17; S，9.82。实测值：C，58.86; H，4.29;N，17.16; S，9.83。2.2.4.7.2-（1H-苯并[d]咪唑-2-基硫代）-N'-（2-氯亚苄基）乙酰肼（7）。黄色结晶粉末; mp 113-140.25 CH脂族基团，161.11 C的酰胺; EIMSm/z346 [M + 1]+;计算值对于C16H13ClN4 OS的分析计算：C，55.73; H，3.80; N，16.25; S，9.30。实测值：C，55.70; H，10.27; N，16.24; S，9.28。2.2.4.8.2-（1H-苯并[d]咪唑-2-基硫基）-N'-（4-氯亚苄基）乙酰肼（8）。暗黄色粉末; mp 210 - 213 ° C;产率71.63%; Rf 0.26（苯：氯仿6：4）; IR（cm-1）：3466 N A H str.（2 °酰胺），3074 N A H str.（咪唑），1622 C@O str（2 °酰胺），822 C A H面外弯曲，733C A Cl str的一氯代芳族化合物，669 C A S str的硫醇; 1HNMR（DMSO，d）：6.95 - 7.85（m，8H芳香族），8.01（s，2 °酰胺的NH）; 13 C NMR（DMSO，d）：40.05 CH 2脂肪族，苯的（109.42，129.01，129.96，132.23）C，（119.95，122.24，134.18，153.45）苯并咪唑的C，139.40 CH脂族基团，168.14酰胺的C; EIMS m/z 346 [M +1]+;肛门计算值对于C16H13ClN4 OS的分析计算：C，55.73; H，3.80; N，16.25; S，9.30。实测值：C，55.72;H，3.77; N，16.23; S，9.29。2.2.4.9.2-（1H-苯并[d]咪唑-2-基硫基）-N'-（4-氟亚苄基）乙酰肼（9）。浅棕色晶体; mp 174-对于2°酰胺，3258 NA H str.对于咪唑，3056CA H芳族str，对于2°酰胺，1638 C@O str，1010 CAF str的一氯代化合物，799 CA S str的硫醇;1HNMR（DMSO，d）：4.14（s，亚甲基的2 H），6.91计算值对于C16H13FN4 OS的分析计算：C，58.52;H，3.99; N，17.06; S，9.77。实测值：C，58.50; H，3.97; N，17.03; S，9.76。2.2.4.10. 2-（1H-苯并[d]咪唑-2-基硫基）-N'-（4-溴亚苄基）乙酰肼（10）。柠檬黄色粉末;熔点182 - 185 ° C;产率70.54%; Rf 0.43（苯：氯仿6：4）; IR（cm-1）：3452 N A H str.（2 °酰胺），3157 N A Hstr.（咪唑），1650 C@O str.（2 °酰胺），817 C A H面外弯曲，738 C A S str. （ 硫 醇 ） ， 604 C A Br str 芳 香 族 ; 1 HNMR（DMSO，d）：4.17（s，亚甲基的2H），6.99 - 7.99（m，8H芳香族），8.19（s，2 °酰胺的NH）; 13 C NMR（DMSO，d）：40.04 CH 2脂肪族，苯的（122.25，131.73，131.97，133.26）C，（120.04，123.08，139.61，149.51）苯并咪唑的C，142.37CH脂族基团，169.13酰胺的C; EIMS m/z 390 [M +1]+; EIMS m/z390 [M +1]+;计算值对于C16H13BrN4 OS的分析计算：C，49.37; H，3.37; N，14.39; S，8.24。实测值：C，49.36; H，3.35; N，14.38;S，8.23。2.2.4.11.2-（1H-苯并[d]咪唑-2-基硫基）-N'-（4-硝基亚苄基）乙酰肼（11）。 砖红色结晶粉末; mp 208°C;产率83.57%，Rf0.39（苯：氯仿6：4）; IR（cm-1）：3338 NAH str.用于2°酰胺，2946 NA H str.用于咪唑，1641 C@ O str用于2°酰胺，1564 NO2 str.芳硝基的1452 CA C str，芳环的1330NO2 str芳香族硝基的737 CA S 链，硝基化合物的577 CNO 弯曲;1HNMR（DMSO，d）：4.18（s，亚甲基的2 H），7.01-8.05（m，8H芳香族），8.16（s，2 °酰胺的NH）; 13 C NMR（DMSO，d）：40.03 CH 2脂族，苯的（123.96，132.20，140.25，149.58）（122.25，123.83，138.67，147.67）苯并咪唑的C，142.05 CH脂族，169.48酰胺的C; EIMSm/z356 [M + 1]+;计算值对于C16H13N5O3S的分析计算：C，54.08; H，3.69; N，19.71; S，9.02。实测值：C，54.06;H，3.67; N，19.70; S，9.01。2.2.4.12.2-（1H-苯并[d]咪唑-2-基硫基）-N'-（4-羟基-3-甲氧基亚苄基）乙酰肼（12）。浅橙色结晶粉末; mp 102-2 °酰胺的C@O str为1652，1，3，5-三取代苯环的C A H面弯曲为868，硫醇的C A S str为612;（DMSO，d）：3.80（s，亚甲基的2H），6.95 - 7.93（m，7H芳香族），8.09（s，2 °酰胺的NH）; 13 C NMR（DMSO，d）：39.96 CH2脂肪族， 56.04 OCH3脂肪族，苯的（ 115.38， 119.86， 122.27，126.52，148.13，149.98）C，苯并咪唑的（115.55，123.48，141.60，147.60）C，脂族CH 144.01，酰胺170.42 C;EIMS m/z 357 [M +1]+;计算值对于C17H16N4O3S的分析计算：C，57.29; H，4.52; N，15.72; S，9.00。实测值：C，57.27; H，4.51; N，15.71; S，9.01。2.2.4.13.2-（1H-苯并[d]咪唑-2-基硫基）-N'-（3-乙氧基-4-羟基-亚苄基）乙酰肼（13）。深棕色晶体; mp 176-S. Yadav等 /埃及基础与应用科学杂 志 5（2018）100-10910313CNMR（DMSO，d）：14.74 C of OCH2 CH3，39.88 CH2脂肪族，OC H2 CH 3脂肪族的63.80 C，（111.41，115.55，123.25，125.48 ， 150.05 ） C 芳 族 ， 147.06 CH 脂 族 ， 160.55 C 酰 胺 ;EIMSm/z371 [M + 1]+;分析。计算值对于C18H18N4O3S的分析计算：C，58.36; H，4.90; N，15.12; S，8.66。实测值：C，58.35; H，4.91;N，15.10; S，8.64。2.2.4.14. 2-（1H-苯并[d]咪唑-2-基硫基）-N'-（4-甲酰基亚苄基）乙酰肼（14）。姜黄黄色结晶粉末; mp > 30 0 °C;收率69.64%;Rf0.37（苯）;IR（cm-1）：3271 NA H str.表示2°酰胺，2948 NA H str.表示咪唑，1619 C@ O str表示2°酰胺，1345 CA CHO骨架醛基团，936CA H平面弯曲的醛基，748 CA S str的硫醇; 1HNMR（DMSO，d）：3.99（s，亚甲基的2 H），6.98计算值对于C17H14N4O2S的分析计算：C，60.34; H，4.17; N，16.56; S，9.48。实测值：C，60.35;H，4.15; N，16.55; S，9.47。2.2.4.15.2-（1H-苯并[d]咪唑-2-基硫基）-N0-（（E）-3-苯基亚丙基）乙酰肼（15）。柠檬黄色; mp 202-153.09 C的酰胺; EIMSm/z337 [M + 1]+;分析。计算值对于C18H16-N4OS的分析计算：C，64.26; H，4.79; N，16.65; S，9.53。实测值：C，64.23; H，4.76; N，16.64; S，9.51。2.2.4.16.2-（1H-苯并[d]咪唑-2-基硫基）-N'-（2-羟基亚苄基）乙酰肼（16）。淡黄色粉末; mp 178 - 180 ° C;产率87.04%; Rf 0.35（苯：氯仿6：4）; IR（cm-1）：苯酚为3698 O A H str，2 °酰胺为3373 NA H str，咪唑为2861 N A H str，2 °酰胺为1669 C@O str，二取代苯环的749 C A H平面弯曲，硫醇的666 C A S应力; 1HNMR（DMSO，d）：4.18（s，亚甲基的2H），6.98 - 7.77（m，8H芳香族），8.32（s，2 °酰胺的NH）; 13 C NMR（DMSO，d）：39.87 CH2脂肪族，苯的（116.12，118.54，121.36，130.88，132.23，162.84）C，苯并咪唑的（115.94，126.46，141.15，147.36）C，141.34 CH脂肪族，168.71 C的酰胺; EIMSm/z327 [M + 1]+;分析。计算值对于C16H14-N4O2S的分析计算：C，58.88; H，4.32; N，17.17; S，9.82。实测值：C，58.85; H，4.30; N，17.15; S，9.81。2.2.4.17.2-（1H-苯并[d]咪唑-2-基硫代）-N0-（4-（二甲基氨基）亚苄基）乙酰肼（17）。亮黄色粉末; mp 175 - 178 ° C;产率47.16%;Rf 0.48（苯）; IR（cm-1）：3515 N A H str.表示2 °酰胺，3089 N AH str.表示咪唑，1601 C@O str表示2 °酰胺，1359 C A N str表示芳基叔胺，766 C A S str表示硫醇; 1HNMR（DMSO，d）：4.11（s，亚甲基的2H），7.11 - 7.89（m，8H芳香族），8.05（s，2 °酰胺的NH）; 13 C NMR（DMSO，d）：40.04 CH 2脂肪族，（39.70，39.71）N处的脂族CH 3，苯的（111.65，119.90，128.12，128.42，151.93）C，苯并咪唑的（111.72，121.52，129.44，147.80）C，144.39 CH脂族基团，酰胺的168.42 C; EIMS m/z 354 [M +1]+;肛门计算值对于C18H19N5OS的分析计算：C，61.17; H，5.42; N，19.81; S，9.07。实测值：C，61.17; H，5.41; N，19.79; S，9.05。2.2.4.18. 2-（1H-苯并[d]咪唑-2-基硫基）-N'-（4-（二乙基氨基）亚苄基）乙酰肼（18）。桃红色粉末; mp 220-（DMSO，d）：39.85 CH2脂肪族，56.04 C CH2 CH3，18.50 C CH2-CH3，（115.75美元，124.98,130.05,（153.43）C的苯，（115.48，124.96，141.42，147.46）苯并咪唑的C， 144.01 CH脂族，172.09 C的酰胺; EIMSm/z382 [M + 1]+;分析。计算值对于C20H23-N5OS的分析计算：C，62.97; H，6.08; N，18.36; S，8.41。实测值：C，62.95; H，6.06; N，18.34; S，8.39。2.2.4.19.2-（1H-苯并[d]咪唑-2-基硫基）-N0-（（4-羟基萘-1-基）亚甲基）乙酰肼（19）。芥末黄结晶粉末;熔点188-对于咪唑，1668 C@ O str对于2°酰胺，841萘并苯，704 CA S str的硫醇;1HNMR（DMSO，d）：4.25（s，亚甲基的2 H），6.98-143.02 CH脂族基团，168.24 C的酰胺; EIMSm/z377 [M + 1]+;分析。计算值对于C20H16N4O2S的分析计算：C，63.81; H，4.28; N，14.88; S，8.52。实测值：C，63.80; H，4.26; N，14.86; S，8.50。2.2.4.20. 2-（1H-苯并[d]咪唑-2-基硫代）-N'-（呋喃-2-基亚甲基）乙酰肼（20）。棕色晶体; mp 158 - 160 ° C;产率66.98%; Rf 0.49（苯：氯仿6：4）; IR（cm-1）：对于2 °酰胺为3350 N A H str.，对于呋喃为3103 C A H str.，对于咪唑为2973 N A H str.，对于2 °酰胺为1595C@O str，对于硫醇为755 C A S str; 1HNMR（DMSO，d）：6.96 - 7.83（m，7H芳香族），7.89（s，2 °酰胺的NH）; 13 CNMR （ DMSO ， d ） ： 39.93 CH2 脂 肪 族， 呋 喃 的 （ 109.42 ，110.53 ， 127.97 ， 153.62 ） C ， （ 115.05 ， 122.24 ， 132.23 ，148.02）苯并咪唑的C ，141.78 CH 脂肪族，172.01酰胺的C。EIMSm/z301 [M+ 1]+;计算值对于C14H12N4O2S的分析计算：C，55.99; H，4.03; N，18.65;S，10.68. 实测值：C，55.97; H，4.04; N，18.64; S，10.65。2.3. 体外抗菌评价2.3.1. MIC测定合成的苯并咪唑衍生物的体外抗微生物潜力通过试管稀释法针对大肠杆菌MTCC 1652（革兰氏阴性细菌）、枯草芽孢杆菌MTCC 2063、金黄色葡萄球菌MTCC 2901（革兰氏阳性细菌）、白色念珠菌MTCC227和尼日尔MTCC 8189（真菌菌株）[27]进行评估，分别使用头孢羟氨苄和氟康唑作为标准抗细菌和抗真菌药物。在二甲基亚砜中制备各供试品和标准药物的100mg/ml浓度贮备液。然后将其连续稀释于用于细菌的双浓度营养肉汤I.P.和用于真菌的沙氏葡萄糖肉汤I.P.中[28]。将细菌培养物在37 ± 2 °C下孵育24小时。C.白色念珠菌在37 ± 2 °C下培养48h，A. 黑尼日尔在25 ± 2 ℃下生长7d。以最低抑菌浓度（MIC）测定抗菌活性。2.3.2. MBC/MFC的测定合成的苯并咪唑衍生物的最小杀菌浓度（MBC）和杀真菌浓度（MFC）通过将来自每个管的100 mL培养物（其在MIC测定中显示无生长）继代培养到含有新鲜琼脂培养基的无菌培养皿上来测定。培养培养皿并目视分析微生物生长[29]。2.4. 体外抗结核活性评价化合物的抗分枝杆菌活性在新德里国家真菌分类中心（NCFT）的三级安全实验室中与HIHT联合104S. Yadav等 /埃及基础与应用科学杂 志 5（2018）100-109大学，Jolly Grant，Dehradun（英国）。Middle brook 7H10琼脂（ Becton Dickinson Company （ DifcoTM ） ， 7 Loveton Circle ，Sparks，Maryland，USA;批号8175150）补充油酸-白蛋白-过氧化氢酶（OADC）（Becton Dickinson Company批号8136781）用于复苏和培养分枝杆菌以进行敏感性测试。药物即链霉素（S）（500 mg）作为礼品样品从Shalina Laboratories Pvt. Ltd.获得，新孟买，马哈拉施特 拉 邦 。 Alcohol 蓝 染 料 （ Accumed International ， WestlakeOhio）、微量滴定板（Falcon，3072：Becton Dickinson，LincolnPark NJ）、无菌玻璃器皿、带反压气体系统的UV柜。对M.肺结核使用对链霉素（S）、异烟肼（H）、利福平（R）和吡嗪酰胺（PZA）-H37 Rv（NCFT/TB/537）敏感的分枝杆菌来评价化合物的抗分枝杆菌活性2.4.1. 药物/化合物稀释液将每种合成的化合物溶解在DMSO中以获得50mg/ml的浓度，并进一步稀释至25mg/ml和12.5mg/ml的浓度。类似地，为标准抗结核药物链霉素制备浓度为50mg/ml的储备溶液，并稀释至25mg/ml以检查抗结核活性。2.4.2. 生长培养基通过将脱水培养基（19 g）加入到含有甘油（15 ml）的纯化水（900 ml）中制备。将混合物充分搅拌以溶解并在121°C下高压灭菌10分钟。在冷却至45 °C后，将油酸-白蛋白过氧化氢酶（100 ml）无菌添加至培养基中。未对pH值进行调整。2.4.3. 药敏试验接种物制备保 存 的 M. 肺 结 核 对 S 、 H 、 R 和 PZA-H37 Rv 敏 感 的 分 枝 杆 菌（NCFT/TB/537）在Middle brook 7 H10琼脂上复苏，然后进行抗结核药敏试验。从Middle brook 7H10平板上新鲜生长的集落（三周龄）刮 下 细 胞 ， 并 引 入 盐 水 （ 10 ml ） 中 。 通 过 用 盐 水 稀 释 制 备0.5McFarland标准浊度相当于10 -8CFU的细菌悬液。将混合物在含有玻璃珠的玻璃瓶中涡旋30 s，并使颗粒沉降[30]。2.4.4. 随机筛选分离的化合物的抗结核活性（Alamar-blue测定）使用微孔板亚甲蓝测定（MABA）[31]，针对对S、H、R和PZA-H37 Rv（NCFT/TB/537）敏感的分枝杆菌评估化合物的抗分枝杆菌活性。 该方法无毒，使用热稳定试剂，适用于抗分枝杆菌活性的随机筛选。简言之，将200μL无菌去离子水加入无菌96孔板的所有外周孔中，以使孵育期间试验孔中培养基的蒸发最小化。96孔板接受100μLMiddlebrook7 H9肉汤（具有满环的细菌接种物-108CFU），并直接在板上制备相应化合物的不同稀释液。所测试的化合物的最大浓度为50mg/ ml。将板用石蜡膜覆盖并密封，并在37°C下孵 育5天。 此后，将25μL新鲜制备的阿利兰试剂和10%吐温80的1：1混合物加入平板中并孵育24小时。将孔中的蓝色解释为无细菌生长（抗分枝杆菌活性），将粉红色评分为生长。2.4.5. 通过孔扩散法使用孔扩散法测定磁化率[30，32]。改良了琼脂孔扩散法[33]。中间使用Brook7H10琼脂培养基进行细菌培养。用分别悬浮于Middlebrook 7H10肉汤中的菌环接种培养培养基在琼脂中打孔直径为8 mm的孔，并分别用50mg/ ml的测试化合物和25mg/ml的标准药物填充每个孔。然后将培养皿置于通风橱中过夜以允许药物扩散，然后用二氧化碳可渗透胶带密封。然后将其在37°C下在二氧化碳培养箱中在高度灭菌的室中用阿拉玛蓝染料淹没孔，并进一步脱色以观察抑制区。通过使用毫米刻度测量孔周围的抑制区的直径来确定菌株对化合物的敏感性2.4.6. 亚甲蓝法测定最低抑菌浓度将化合物连续稀释，以使用微量滴定板法测定药物在Middlebrook 7H9培养基中的最小抑制浓度[30，34，35]。用上述两种方法在最大浓度为50mg/ml时发现令人满意的化合物，进一步稀释至浓度分别为25、12.5、6.25、3.125和1.56 mg/ml。同样，将链霉素进一步稀释至25μ g/ml，以检查抗结核活性。在微量滴定板中通过亚甲蓝测定法进行有效化合物的MIC。将板用石蜡膜覆盖并密封，并在37 ° C下孵育5天。 此后，将25μL新鲜制备的亚甲蓝试剂和10%吐温80的1：1混合物加入平板中并孵育24小时。将孔中的蓝色解释为无细菌生长（抗分枝杆菌活性），将粉红色确定为生长。MIC定义为防止颜色从蓝色变为粉红色的最低药物浓度。2.5. 体内抗结核活性评价在 感 染 分 枝 杆 菌 H37Rv 的 小 鼠 模 型 中 ， 通 过 伦 理 许 可 号 ，NCFT/EC/16/2313分配给印度新德里NCFT合作研究组（CRG）2.6. 抗结核活性测定在体内评价中发现有效的化合物对分枝杆菌酶的抑制作用，异柠檬酸裂合酶、泛泛酸合成酶和分支酸合成酶。2.6.1. 分枝杆菌异柠檬酸裂解酶测定异柠檬酸裂解酶活性根据Dixon和Kornberg报道的方案（乙醛酸苯腙形成）[36]在10mM浓度的化合物下测定。异烟肼用作阴性对照（抑制率为0%），硫酸链霉素（25mg）用作阳性