在ABI7500实时荧光定量PCR系统中,如何正确设置TaqMan探针,并选择合适的荧光和粹灭荧光标签以及曲线颜色?
时间: 2024-11-14 07:32:28 浏览: 18
当使用ABI7500实时荧光定量PCR系统进行实验时,正确设置TaqMan探针及其对应的荧光和粹灭荧光标签是至关重要的,以确保实验数据的准确性和可靠性。为了帮助你完成这一过程,建议参考《ABI7500软件操作指南:AdvancedSetup与实验配置》。
参考资源链接:[ABI7500软件操作指南:AdvancedSetup与实验配置](https://wenku.csdn.net/doc/6i9ibs76s7?spm=1055.2569.3001.10343)
首先,开启ABI7500仪器和计算机,待仪器电源指示灯变绿后,打开软件并进行连接。在主界面的Design Wizard中选择Advanced Setup选项,以进入高级配置模式。
接下来,在实验设置中填写必要的信息,包括实验名称、仪器型号(如ABI7500)和反应程序类型。填写完毕后,进入Plate Setup环节,选择探针类型为TaqMan探针。TaqMan探针是一种常用的荧光探针,它能够在PCR反应中通过荧光信号的变化来监测特定DNA序列的扩增。
在荧光选择阶段,选择报告荧光为FAM,这是因为FAM发出的荧光波长适合大多数实验条件。至于粹灭荧光,它将抑制FAM的荧光,直到TaqMan探针被切割。通常情况下,选择TAMRA作为粹灭荧光标签,因为它与FAM组合使用时,能够提供良好的荧光信号和背景比。如果你的实验需要,也可以选择其他适合的粹灭荧光,如BHQ,或者在没有特别选项时选择none。
除了荧光和粹灭荧光的设置,用户还需要指定样品名称,以及为每个样品选择曲线颜色。这有助于在分析实验结果时区分不同样品的数据。
最后,不要忘记保存这些设置,以便在将来的实验中快速调用。点击Saved Target,然后选择AddSaved...以保存当前的设定。这样,在进行新的实验时,你可以通过加载已保存的配置来简化实验准备过程。
通过遵循上述步骤,并参考《ABI7500软件操作指南:AdvancedSetup与实验配置》,你可以确保ABI7500实时荧光定量PCR系统中的TaqMan探针被正确设置,并且选择了合适的荧光和粹灭荧光标签,从而为精确的基因表达分析打下坚实的基础。
参考资源链接:[ABI7500软件操作指南:AdvancedSetup与实验配置](https://wenku.csdn.net/doc/6i9ibs76s7?spm=1055.2569.3001.10343)
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