第3 3 卷 第 4 期 上海师范大学学报(自然科学版) Vol.33,No.4
2004年12月 JournalofShanghaiNormalUniversity(NaturalSciences) 2 0 0 4 , D ec .
花特异表达启动子的克隆
及花色调节基因 Lc表达载体的构建
刘 佳, 王 忠,李建粤
(上海师范大学 生命与环境科学学院, 上海 200234)
摘 要: 克隆了矮牵牛花特异表达基因 CHSA 启动子,并定向插入到已含有花色调节基因 Lc
的质粒 pB I121 中,取代原有的 CaM V 35S 启动子.所构建的新表达载体可用于花色改良研究.
关键词: 查尔酮合成酶基因启动子(PCHS);克隆;表达载体;花色调节基因 Lc
中图分类号:
Q943
文献标识码:
A
文章编号:
1000-5137(2004)04-0070-04
收稿日期: 2004-05-27
基金项目: 上海市科技发展基金(023112027).
作者简介: 刘佳(1979-),女,上海师范大学生命与环境科学学院硕士研究生;李建粤(1958-),女,上海师范大学生
命与环境科学学院副教授.
尽管多年来花卉育种学家利用传统杂交育种及定向选择育种,已培育出了大量花卉新品种,但这种
育种方法有其局限性,主要表现在远源杂交不亲合,难以打破物种生殖隔离;多种优良性状有时难以组
合在一个后代中;育种周期长等
[1 ~3]
.近年来,生物技术的发展对花卉园艺业也产生了较大的影响,特别
是基因工程技术在花卉育种中的应用,极大地推动了花卉在花色、抗虫、抗病等方面的改良研究.
由于花卉花色的表现,主要局限在花器官上.因此,花色改良的基因工程与其他抗虫、抗病基因工程
相比,对于控制外源目的基因表达的启动子具有特殊的要求:即花特异表达启动子.
据报道
[4]
,矮牵牛查尔酮合成酶基因的 CH S A 启动子是光依赖性的,并在花器官中特异表达.在这
个启动子作用下,植物花色的变化易观察,能够更有利于对其控制的下游基因的功能进行研究.本试验
的主要工作就是以矮牵牛为材料分离克隆查尔酮合成酶 CH S A 启动子,并成功地将 CH S A 启动子与可
控制花色调节的 Lc 基因融合,构建成能够在不同植物中进行遗传转化研究的表达载体.本研究可为今
后利用基因工程技术改良花卉花色研究奠定基础.
1 材料与方法
1.1 植物材料及主要试剂
矮牵牛( P etunia hybrida ) 种子购于花市.D N A Ladder1000( SM 0383) ,pU C m -T 载体,PC R 扩 增专用
试剂,PCR 产物回收试剂盒,Taq DNA 聚合酶,T4 D N A 连接酶及各种限制性内切酶(除 X bal I)等试剂
均购自上海生工生物工程公司,Xbal I限制性内切酶和 DN A M arker D L15,000 购于 Takara 公司.
pBI121(含有 35S 启动子启动的 Lc 基因)由中科院上海植物生理研究所曹湘玲老师提供.
1.2 方 法
(1) 参照文献[4]报道的花特异表达启动子序列设计引物,由上海生工生物工程公司合成.引物
序列为: