构建与表达：pEGFP-Nl/PDX1真核载体的转录因子研究

该研究论文于2008年发表在《暨南大学学报(医学版)》第29卷第2期，主要探讨了PDX1（胰腺十二指肠同源框蛋白1）转录因子真核表达质粒的构建与表达。PDX1是一种关键的转录因子，在胰腺发育和维持中起着重要作用，尤其在胰岛素分泌细胞的分化过程中。 研究团队首先从人胚胎胰腺组织的基因组RNA中通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术扩增出PDX1基因编码序列。接着，他们将这个扩增片段精确地克隆到了真核表达载体pEGFP-N1的多克隆位点上，从而构建出pEGFP-N1/PDX1融合质粒。这种融合质粒允许PDX1基因与绿色荧光蛋白(GFP)融合，使得目的基因的表达可以通过观察GFP的荧光信号进行直观评估。 研究人员将构建的pEGFP-N1/PDX1质粒转入HEK2细胞中，采用多种方法来验证目的基因的表达。RT-PCR结果显示PDX1 mRNA在HEK2细胞中成功表达，证明了基因的转录活动。随后，通过免疫组化和间接荧光法进一步确认，PDX1蛋白主要定位在细胞核内，这与PDX1作为转录因子的角色相符合。最后，Western Blot分析也证实了在细胞核内检测到了PDX1的蛋白质产物。 该研究不仅构建了人PDX1基因的真核表达载体，而且成功地在HEK2细胞模型中实现了高效表达，这为后续深入研究PDX1的功能、调控机制以及在疾病治疗中的潜在应用提供了重要的实验工具。这项工作对于理解PDX1在细胞生物学过程中的作用以及基因工程策略在遗传疾病研究中的应用具有重要意义。