共聚焦显微镜下的荧光团共定位提升生物样品检测能力

【学术干货共聚焦显微镜中荧光团共定位】 本文深入探讨了在生物学研究和细胞成像领域中至关重要的共聚焦显微镜技术，特别是荧光团共定位现象。共定位是指在多标记荧光样本中，当两个或多个荧光团紧密相邻时，它们的发射光谱可能会在显微镜观察下出现重叠。这通常发生在像骨骼肌动蛋白和黏着斑蛋白这样的分子上，通过特定的荧光染料如AlexaFluor 488和Cy3进行标记。 在共聚焦显微镜中，样品被转化为三维的多维度数字图像，每个像元对应于一个特定的空间位置。例如，AlexaFluor 568（激发波长543nm）和AlexaFluor 488（激发波长488nm）在图像中表现为红色和绿色贡献的像素，形成混合颜色，如橘红色。为了确保准确的共定位分析，荧光团的发射光谱需要有良好的分离性，这意味着滤色片的选择和设置至关重要，以避免光谱串色，这是共定位分析中必须避免的误导现象。 选择合适的荧光团是共聚焦实验成功的关键，因为它们需要与激发光源的光谱相匹配，以最大化激发效率，同时保持足够的光谱间隔。图1展示了骨骼肌动蛋白和黏着斑蛋白在激光扫描共聚焦显微镜下的共定位实例，揭示了它们在细胞内的具体交互位置，如肌动蛋白纤维的起始点和细胞结构间的连接点。 图2进一步详细地展示了如何通过选择和配置适当的荧光探针来实现精确的共定位，这对于理解分子间的相互作用和细胞内部的动态过程具有重要意义。共聚焦显微镜结合高特异性荧光标记和数字图像处理技术，极大地推动了生物学研究中复杂样本的可视化和分析能力。