Pet系统操作手册
Pet系统操作手册是Novagen公司出品的一份专业的手册,旨在指导用户正确地使用Pet系统进行蛋白表达和纯化。该手册涵盖了Pet系统的基本概念、系统组成、克隆策略、蛋白表达调控、宿主菌选择、抗生素抗性等方面的知识。
一、系统介绍
Pet系统是一种常用的蛋白表达系统,由Novagen公司开发。该系统基于大肠杆菌宿主菌,使用T7 RNA polymerase启动子和lac操作符来调控蛋白表达。Pet系统的优点在于可以高效地表达蛋白,并且可以在大肠杆菌中进行蛋白纯化。
二、系统组成
Pet系统由多个组成部分组成,包括:
* pET载体:用于克隆目的基因的载体,具有T7启动子和lac操作符。
* pLysS和pLysE宿主菌:用于表达蛋白的宿主菌,具有lacI蛋白酶缺陷,可以表达T7 RNA polymerase。
* T7 RNA polymerase:用于启动蛋白表达的RNA polymerase。
* lacI蛋白酶:用于调控蛋白表达的蛋白酶。
三、克隆策略
Pet系统提供了多种克隆策略,包括:
* LIC(Ligation Independent Cloning)方法:一种快速、可靠的克隆方法,不需要连接反应。
* 融合标签克隆方法:可以将目的基因与融合标签连接,提高蛋白表达效率。
四、蛋白表达调控
Pet系统可以通过多种方式调控蛋白表达,包括:
* T7启动子:用于启动蛋白表达的启动子。
* lac操作符:用于调控蛋白表达的操作符。
* pLysS和pLysE宿主菌:可以调控蛋白表达的宿主菌。
五、宿主菌选择
Pet系统提供了多种宿主菌选择,包括:
* pLysS宿主菌:用于表达蛋白的宿主菌,具有lacI蛋白酶缺陷。
* pLysE宿主菌:用于表达蛋白的宿主菌,具有lacI蛋白酶缺陷。
* pETcoco™系统:一种特殊的宿主菌系统,用于表达蛋白。
六、抗生素抗性
Pet系统提供了多种抗生素抗性选择,包括:
* Ampicillin抗性:用于抗抗生素的抗性。
* Kanamycin抗性:用于抗抗生素的抗性。
七、CE6噬菌体
Pet系统提供了CE6噬菌体,用于清洁和纯化蛋白。
八、诱导对照
Pet系统提供了诱导对照,用于检测蛋白表达的效率。
九、建立原核表达体系的基本知识
Pet系统提供了多种基本知识,包括:
* pET系统操作流程:用于指导用户正确地使用Pet系统。
* 生长培养基:用于培养大肠杆菌的培养基。
* 菌株保存:用于保存大肠杆菌的菌株。
* 制备载体:用于制备pET载体的方法。
* 制备插入片段:用于制备目的基因的插入片段。
十、目的片段克隆
Pet系统提供了多种目的片段克隆方法,包括:
* 连接反应:用于连接目的基因和pET载体的方法。
* 转化:用于将目的基因转化到大肠杆菌中的方法。
十一、操作小诀窍
Pet系统提供了多种操作小诀窍,包括:
*铺板技术:用于快速和高效地克隆目的基因的方法。
Pet系统操作手册提供了详细的指导和知识,旨在帮助用户正确地使用Pet系统进行蛋白表达和纯化。