慢性丙型肝炎中CK 18-M30与活动度和肝纤维化相关

例如，《生物多样性和生物多样性科学杂志》2（2015）153e158主办方：完整文章慢性丙型肝炎患者细胞角蛋白18-ApoptosenseM30与活动度及肝纤维化Walid Ahmed El-Sherbinya，*，Raghda El-SayedFaraga，Azza Abd El-Baky El-Baiomyb，RaniaAhmed El-Erianaa埃及曼苏拉医学院热带医学系b埃及曼苏拉医学院临床病理学系A R T I C L E I N F O文章历史记录：收到日期：2015年2月3日收到日期：2015年2015年4月28日接受2015年5月20日在线发布保留字：HCV血清CK 18-M30肝纤维化METAVIR评分AB S T R A C T丙型肝炎病毒（HCV）是一种进行性疾病，可导致慢性活动性肝炎、肝硬化和肝细胞癌。细胞角蛋白（CK）18是一种在肝细胞中表达的中间丝蛋白，在肝损伤期间被蛋白水解裂解。细胞角蛋白18的M30表位（CK 18-M30）在不同水平上参与细胞凋亡途径。本研究旨在探讨细胞角蛋白18-降钙素M30片段（CK 18-M30）作为肝纤维化无创性评估方法的诊断准确性及其与METAVIR评分的相关性。用酶联免疫吸附试验（ELISA）测定了168例慢性丙型肝炎患者（男112例，女56例）血清CK 18-M30浓度。结果显示，血清CK 18浓度从A0到A3、从F0到F4呈阶梯式升高，与肝纤维化分期（r<$0.881 p0.001）和活动度分级（r< $0.881 p0.001）呈高度正 相 关 。 <&<& 此 外 ， 血 清 CK18 与 血 清 转 氨 酶 水 平 呈 正 相 关 （ r< 0.355 p<0.05）。<&CK18与病毒水平呈正相关（r<0.3，p <0.05）。<&结果表明，慢性HCV感染患者血清CK 18-M30水平升高，并与炎症程度、肝纤维化分期、ALT水平和病毒载量显著相关。这些发现可能使CK 18-M30成为肝纤维化和疾病活动性的非侵入性标志物。版权所有2015年，曼苏拉大学。由Elsevier B. V.制作和托管。这是一个CC BY-NC-ND许可证下的开放获取文章（http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/）。*通讯作者。El Galaa Street，El Mansoura，Mansoura，Dakahlia 12345，埃及联系电话：电话：01009092903电子邮件地址：raghda. yahoo.com（R.E.- S. Farag），azzabaiomy23@yahoo.com（A.A.E.- B. El-Baiomy），drrania494@yahoo.com（R.A.El-Erian）。由曼苏拉大学负责进行同行审查。http://dx.doi.org/10.1016/j.ejbas.2015.04.0052314- 808 X/版权所有2015年，曼苏拉大学。由爱思唯尔公司制作和主持 这是一篇CC BY- NC-ND许可证下的开放获取文章（http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/）。可在www.sciencedirect.com在线获取ScienceDirect杂志主页：http://ees.elsevier.com/ejbas/default.asp154埃及生物多样性和应用科学杂志2（2015）153e1581.介绍丙型肝炎病毒（HCV）是一种进行性疾病，可导致慢性活动性肝炎、肝硬化和肝细胞癌。据估计，全国有超过2亿人感染，约80%的人进展为慢性形式[20]。埃及是世界上丙型肝炎病毒（HCV）流行率最高的国家，估计全国为14.7%[15]。细胞角蛋白（CK 18）是肝细胞中主要的中间丝它通过细胞凋亡和坏死在肝细胞中表达，细胞凋亡和坏死是炎症状态、再生和肝纤维化的触发因素[1]。细胞凋亡途径分为内源性和外源性两条通路。在细胞凋亡的最后一个共同步骤中，肝细胞表达的CK18被切割，导致其M30片段暴露，并且由于肝脏是高灌注器官，其在慢性肝病（包括HCV感染）患者的循环中非常迅速地积累[5，23]。人Apoptosense M30是一种基于ELISA的单克隆抗体[13]。该抗体特异性结合切割的CK18片段，但不结合未切割的片段，为肝细胞死亡提供了一种非侵入性、简单和定量的检测方法[8，11]。肝活检是诊断、评估肝损伤严重程度以及监测治疗的金标准方法，尽管它有许多并发症[7]。因此，非常需要无创、简单和低成本的检测方法[9]。血清细胞角蛋白18-Apoptosense M30将定义凋亡过程[23]，并且通过发现其与炎症严重程度、纤维化分期的相关性，它将取代肝活检，使得在许多情况下不需要提供用于诊断肝损伤和治疗监测的血清生物标志物。本研究的目的是评估慢性HCV感染患者血清中CK-18的Caspase切割片段的水平，并评估其与肝细胞凋亡的相关性以及与纤维化阶段和炎症分级的相关性2.患者该研究涉及2013年1月至2014年1月期间从曼苏拉大学医院热带医学部招募的168名慢性丙型肝炎患者（112名男性和56名女性），年龄范围为23至56岁。从纳入研究的所有患者获得知情同意书。3.2.慢性HCV诊断基 于 抗 HCV 抗 体 的 存 在 ， 使 用 第 三 代 检 测 试 剂 盒（ Axysm HCV EIA 检 测系 统 ） 、逆 转 录 酶定 量 HCVRNA（Stratagene Mx3000 P实时PCR系统，检测限为15IU/ml）和肝活检显示慢性肝炎，诊断慢性丙型肝炎。3.3.腹部超声腹部超声检查以研究肝、脾的大小、类型、有无腹水以及肝细胞癌的排除3.4.超声引导下肝活检及组织学评价所有患者均行超声引导下肝活检，显示慢性肝炎。对于经皮入路，患者仰卧。肝脏的边界通常通过叩诊或超声可视化来确定。在大多数情况下，然后用局部麻醉剂浸润腋中线的肋间隙，并通过真皮做一个小切口然后将活检患者在呼气时屏住呼吸根据APASL肝活检建议（2009）进行活检的后续程序根据METAVIR纤维化分级系统对肝组织学进行分级和分期，该系统将纤维化分为5个阶段（F0和 F4），将活动分为4个等级（A0和 A3）[16]。3.5.采血在相同的肝活检设置下从所有受试者中获得血液样本。用日立902型全自动生化分析仪测定血清丙氨酸氨 基 转 移 酶 （ ALT ） 、 天 门 冬 氨 酸 氨 基 转 移 酶（AST），同时检测乙肝表面抗原（HBsAg3.6.细胞角蛋白-18凋亡检测M30水平血清人Apoptosense M30用Glory Sience公司提供的ELISA检测，Ltd（USA）.加入用纯化的人Apoptosense M30抗体 和 标 记 有 抗 Apoptosense M30 的 马 红 过 氧 化 物 酶（HRP）包被的固相微孔，形成Ab-（Ageab酶复合物），洗涤微孔并加入与样品中M30浓度成比例的底物四甲基联苯胺（TMB），得到蓝色，其在与硫酸溶液和板停止反应通过分光光度法在波长450 nm下读取，3.方法3.1.常规实验室检查进行了以下检查：CBC、肝功能检查、凝血酶原时间、INR、血糖检查、肾功能检查、自身免疫谱和血脂谱。结果从Apoptosense M30标准曲线内插[5]。3.7.统计分析使用社会科学统计软件包（Windows 7版本，USA）（SPSS17软件）计算数据可变155例如，《生物多样性和生物多样性科学杂志》2（2015）153e158正态分布，以平均值±标准差表示。在这些变量中，对组间差异进行T检验。非参数数据表示为中位数。检验数据均呈正态分布.对于相关性分析，使用双尾P值计算Spearman相关系数认为P 0.05的值具有显著性[14]。<4.结果根据纤维化分期，研究组的人口统计学数据见（表1）。结果发现，26例（15.5%）患者的纤维化分期为0期，40例（23.8%）患者的纤维化分期为0期。纤维化1期，40例（23.8%）患者患有纤维化2期，36例(21.4%）的患者患有3期纤维化，26例（15.5%）的患者患有4期纤维化。通过研究CK18与包括纤维化阶段、炎症等级（活动性）、ALT水平和病毒载量在内的参数之间的相关性，如（表2）所示。CK-18和CK-18之间呈极显著正相关，与F1期相比，F0期CK-18水平极显著降低（p≤ 0.001）。此外，与F2期组相比，F0期CK-18水平高度显著降低（p≤ 0.001）。与F3期相比，F0期CK-18极显著降低（p0.001）。<此外，与F4期的这些水平相比，F0期CK-18水平分别显著降低（p≤ 0.001）（表3）。与F2期的这些水平相比，F1期CK-18水平高度显著降低（p≤ 0.001）。与F3期相比，F1期CK-18水平显著降低（p≤ 0.001）。此外，与F4期相比，F1期CK-18水平高度显著降低（p≤ 0.001）。然而，与F3期和F4期相比，F2期的CK-18水平分别显著降低（p≤ 0.001和p≤ 0.001）。与F4期相比，F3期的CK-18水平高度显著降低（p ≤0.001）（表3），并且从F0至F4期，CK-18-的血清浓度以逐步方式显著增加，如图（图3）所示。①的人。纤维化分期（r= 0.881 p≤ 0.001）。&此外，一个非常积极的CK-18与活性之间具有相关性（r≤ 0.881 p≤ 0.001）。&另一方面，当比较CK-18和ALT水平时，获得了显著的正相关性（r¼ 0.355 p 0.05）。<&此外，当比较CK-18与 病 毒 载 量 时 ， 获 得 了 显 著 的 正 相 关 性 （ r< 0.3 p<0.05）。<&CK18水平与纤维化分期之间的显著相关性如图2所示。此外，CK18水平和炎症（活动）等级之间的显着相关性（图1）。 3）。 如图所示，CK18- M30分别与血清ALT和病毒载量呈正相关。根据纤维化分期和CK-18水平进行患者之间的比较，使用单因素ANOVA检验表1e根据研究组的纤维化阶段的人口统计学数据没有平均值±SD年龄y岁最小最大性别男女F02630.88 ±5.292340188F14044.65 ±6.3934563010F24043.37 ±3.2739492812F33645.02 ±1.8242481818F42649.40 ±0.994851188表2e CK-18水平与其他参数之间的相关性相关对相关系数（r）P值CK-18纤维化&0.881≤0.001K-18活性&0.844≤0.001CK-18病毒水平&0.300≤0.05CK-18肝酶&0.355≤0.055.讨论该研究显示，与纤维化水平较低的患者相比，显著纤维化患者血清中的CK18水平显著较高这些结果与Akl等人的结果一致，他们报道，在慢性HCV病例中发现CK18的表达增加，这些慢性HCV病例具有进展为肝硬化的较高阶段的纤维化，特别是在METAVIR F4阶段[2，3]。从A0到A3，血清CK18水平以逐步方式显著增加，因为该结果表明血清CK18水平与炎症等级相关。这些数据支持细胞凋亡在疾病发病机制中的核心作用，并且该发现与许多研究报告的结果相似[12，16，18，19]。Valva et al.报告，与较低级别慢性炎症相比，较高级别慢性炎症肝细胞内CK18表达增加这表明肝细胞凋亡率与炎症的严重程度相关，并且在重度丙型肝炎病例中增加[10，12，21]。本研究发现血清CK18水平与ALT水平密切相关。然而，ALT水平正常的慢性丙型肝炎患者的CK18水平低于ALT水平升高者。这一结果对于转氨酶水平正常的患者可能很重要。因此，慢性丙型肝炎患者血清中凋亡的CK18与ALT水平升高和肝组织学损害有关这与许多研究一致，这些研究发现ALT水平高的慢性肝炎患者血清细胞凋亡CK18水平升高[18，22]。我们通过定量PCR分析丙型肝炎病毒血症，发现病毒载量相对于血清CK18水平存在显著差异。这一发现与Asselah和Bieche的数据不一致，他们发现细胞凋亡与HCV载量无关[1，4]。156埃及生物多样性和应用科学杂志2（2015）153e158图1e根据纤维化阶段和CK18水平比较患者图2eCK18水平与纤维化分期之间的相关性图3eCK18水平与炎症等级（活动性）之间的相关性157例如，《生物多样性和生物多样性科学杂志》2（2015）153e158图4e CK18水平与肝酶（ALT）水平的相关性图5e CK18水平与病毒载量之间的相关性6.结论血清CK 18-M30升高，作为肝细胞凋亡增强的指标，在慢性HCV患者中显著增加，并与炎症严重程度、纤维化阶段、转氨酶水平和病毒载量显著相关。这些发现可能使CK 18-M30成为肝纤维化和疾病活动性的非侵入性标志物表3e根据纤维化阶段和CK-18水平比较患者纤维化分期CK18最小范围最大平均值±SDp中文（简体）2.8020.1014.59± 4.52≤0.001中文（简体）12.2032.1026.25± 4.52中文（简体）23.1039.8031.45± 4.31中文（简体）20.5043.6035.62± 5.83中文（简体）40.0052.0045.70± 3.31158埃及生物多样性和应用科学杂志2（2015）153e158引用[1] Abdel-HaleemH，Zayed N，Abdel-Hafez H，Fouad A，Akl M，Hassan M.血清和组织中凋亡细胞角蛋白18对慢性丙型肝炎的诊断价值阿拉伯胃肠病学杂志2013;14（2）：68e 72。[2] 放大图片作者：Akiko E，Wree 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