HRM Master Mix教程：LightCycler®480高分辨率熔解法详解

HRM (High-Resolution Melting) Master Mix是一种专为Roche Applied Science公司的LightCycler 480、LightCycler 96和LightCycler Nano Real-Time PCR系统设计的易于使用的反应混合物，适用于进行SNP（单核苷酸多态性）和甲基化等高分辨率熔解分析。此产品版本为0.6，更新日期为2013年4月，包含足够进行5到100次反应的浓度为20ul的试剂盒，建议存放在15至25摄氏度环境中，避免阳光直射。 该说明书详细介绍了以下几个关键部分： 1. **功能与适用范围**： HRM Master Mix主要作用是在实时PCR过程中实现高分辨率熔解分析，特别适合于科研用途，而非临床诊断。用户可以使用它来处理各种样本材料，如DNA，以及设计合适的引物进行扩增。 2. **使用前准备**： 使用前需要准备样本（包括可能的核酸提取、纯化和浓度测定），特定的引物（确保它们具有适宜的Tm值以配合HRM），以及适量的MgCl2（作为酶促反应的激活剂）。同时，提供一个负对照样本，用于检测潜在的污染。 3. **操作步骤**： - **LightCycler系统指南**：分别给出了针对三种不同仪器系统的具体操作步骤，包括设置参数、预热、PCR反应和HRM分析。 - **PCR混合液制备**：详细解释了如何将HRM Master Mix与其他成分混合，以形成最终的PCR反应混合物。 - **相关程序**：提到了预防交叉污染的措施，确保实验结果的准确性。 4. **结果解读**： 完成实验后，用户需要解析熔解曲线，根据特定的温度梯度观察样品的熔解模式，从而推断出遗传变异或甲基化状态。 5. **问题解决与附加信息**： 提供了一些常见问题的解决方案，并包含关于产品特定注意事项和可能的实验优化建议。 HRM Master Mix的使用涉及样品准备、PCR反应条件设定、实验操作、结果分析以及问题排查等多个环节，确保了研究人员在进行高分辨率熔解分析时能够高效且准确地进行实验。