家蚕杆状病毒BmNPV多角体基因启动子结合蛋白的筛选与功能研究

"这篇论文是关于应用酵母单杂交技术筛选家蚕杆状病毒（BmNPV）多角体基因启动子结合蛋白的研究，由李佳、高珍等作者完成，受到多项科研基金支持。研究目的是揭示BmNPV多角体基因高效转录过程中的关键调节因子。通过实验，他们建立家蚕五龄虫组织的基因表达文库，并设计了多角体基因启动子的关键序列，成功筛选出与启动子相互作用的两个蛋白因子，分别是宿主的核糖体蛋白RPSA和病毒来源的DNA结合蛋白DBP。这些蛋白对多角体基因的转录具有正向调控作用。通过RNAi干扰实验，证实RPSA和DBP对多角体基因转录水平有下调效应。这项研究为理解杆状病毒启动子转录机制提供了分子层面的见解。" 在本文中，作者运用酵母单杂交技术，这是一种常用于识别DNA结合蛋白的技术，它允许研究人员在酵母细胞中检测特定DNA序列与蛋白质的相互作用。在这个案例中，目标是找到能够与BmNPV多角体基因启动子结合的蛋白质，从而影响基因的转录效率。研究人员首先提取了感染BmNPV的家蚕五龄虫脂肪体组织的总RNA，用RT-PCR技术构建了基因表达文库。接着，他们设计了多角体基因启动子的关键序列，并利用酵母单杂交系统筛选出与这些序列相互作用的蛋白。 经过筛选，研究人员发现了12个阳性克隆，其中包含两种不同的蛋白质：RPSA和DBP。RPSA是宿主核糖体蛋白，而DBP是BmNPV的核型多角体病毒DNA结合蛋白。为了验证这两个蛋白对多角体基因启动子活性的影响，他们将RPSA和DBP基因插入瞬时表达载体并转染到BmN细胞中，随后观察荧光素酶表达量的变化。实验结果显示，RPSA和DBP都能增强多角体基因的转录活性。 此外，通过RNA干扰(RNAi)技术，研究人员进一步确认了RPSA和DBP在多角体基因转录过程中的功能。干扰这两个基因的表达后，多角体基因的转录水平显著下降，这表明它们是多角体基因高效转录的重要调节因子。 这项研究揭示了BmNPV多角体基因转录调控的新机制，RPSA和DBP作为关键的结合蛋白，对于理解家蚕杆状病毒的生命周期和潜在的防治策略具有重要意义。这项工作不仅为BmNPV的研究提供了新视角，也为其他杆状病毒的启动子转录机制研究提供了参考。