高效表达与纯化：家蚕表皮膜蛋白N141的多角体融合策略

本文主要探讨了多角体融合的家蚕表皮膜蛋白N141的高效表达与纯化技术。家蚕表皮膜蛋白N141作为生物膜功能的关键执行者，其结构和功能研究对于深入理解膜蛋白至关重要。然而，由于膜蛋白通常附着于生物膜上且表达量有限，传统的纯化方法往往面临挑战。为了克服这一难题，研究者们采用了一种创新策略。 首先，研究团队从家蚕跨膜蛋白cDNA文库中成功分离出一个基因，命名为N141。接着，他们利用DNA重组技术将多角体蛋白Polh基因与N141基因结合，构建了原核表达载体pET-28a，利用多角体蛋白基因的强大启动子驱动融合蛋白Polh-N141在大肠杆菌中的高效表达。多角体蛋白的溶解度特性被巧妙地利用，作为纯化融合蛋白的关键，通过Western blotting和肽指纹图谱确认了该融合蛋白带有多聚组氨酸标签。 此外，研究人员还采用了Bac-to-Bac杆状病毒表达系统，构建了融合的Polh基因重组杆状病毒vPolh-N141，并将其转染至家蚕细胞BmN中。当细胞发病后，证明了融合蛋白Polh-N141已经成功表达。这种方法不仅提高了膜蛋白的表达水平，还简化了纯化过程，为后续的结构和功能研究奠定了坚实的基础。 这项研究的成果不仅对于家蚕生物反应器技术平台的构建有重要意义，也为生物膜蛋白的高效表达与纯化提供了一种新的策略，有助于促进膜蛋白领域的研究进展。整个研究过程涉及了分子生物学、家蚕生物学、膜蛋白特性、多角体蛋白应用以及两种不同的表达系统——大肠杆菌和杆状病毒系统的结合，展现了跨学科合作在解决复杂生物学问题上的价值。