家蚕多角体蛋白融合BmSMG9高效表达与纯化策略

该研究论文探讨了"基于家蚕多角体蛋白融合的BmSMG9蛋白高效表达及快速纯化"这一主题。SMG9蛋白是一个关键的内质网膜相关蛋白，它作为蛋白激酶复合体SMG1C的组成部分，在细胞功能中发挥重要作用。研究人员从构建的家蚕蛹cDNA文库中发现了一条与人类SMG9基因有40%同源性的基因，被初步命名为BmSMG9，表明了在家蚕系统中可能存在类似的功能蛋白。 研究团队采用了一个创新的方法，将BmSMG9基因与家蚕多角体蛋白基因（Polh）融合，通过将融合基因克隆到表达载体pET-32a(+)的多克隆位点，并插入了烟草蚀纹病毒（TEV）蛋白酶的核酸序列。这种策略使得在大肠杆菌(E.coli) BL21Star(DE3)中进行诱导表达时，BmSMG9的表达量显著提高，达到35%。多角体蛋白的特性使其能在碱性溶液中溶解，从而为后续纯化提供了便利。 通过调节蛋白缓冲液的pH值，研究人员成功地利用这个性质纯化得到了融合蛋白Polh-BmSMG9，达到了91%的纯度，且收率高达70%，显示出这种方法的高效性和简便性。进一步通过TEV酶进行酶切，结合亲和层析技术，分离出了目标SMG9蛋白。这项研究不仅揭示了家蚕生物反应器在SMG9蛋白表达中的应用潜力，也为SMG9蛋白的生物学研究和可能的药物开发提供了新的途径。 论文的研究背景涵盖了生物化学与分子生物学领域，特别关注于家蚕生物技术的利用，以及多角体蛋白在基因工程中的应用。关键词包括“生物化学与分子生物学”、“家蚕”、“BmSMG9”、“多角体蛋白”和“荧光定量PCR”，这些关键词反映出研究的焦点和技术路线。整个研究过程体现了对蛋白质工程和大规模生产技术的深入理解，具有较高的学术价值和实践意义。