家蚕BmSCF膜蛋白多角体融合表达与组织转录及相互作用研究

本文主要探讨了多角体蛋白融合的家蚕膜蛋白BmSCF的表达和研究。BmSCF，即家蚕干细胞因子凋亡相关蛋白，是家蚕生物学领域中一个新兴且未被广泛报道的研究对象。研究团队利用逆转录PCR技术从家蚕组织cDNA中成功克隆并扩增了BmSCF的基因序列，这在基因工程中是一项关键步骤，因为它允许科学家们获取目标蛋白的遗传信息。 为了实现BmSCF的高效表达，研究人员构建了一种重组pET-32a(+)载体，该载体将多角体基因与BmSCF基因连接在一起，并插入了TEV蛋白酶切割位点，以便于后续的蛋白质纯化过程。他们选择Rosseta表达菌株进行诱导表达，经过溶菌酶处理、离心和PBS洗涤，得到了60%纯度的粗提蛋白。进一步通过亲和层析法（NTA-Ni）纯化，成功获得了90%纯度的重组蛋白。 通过Western Blotting技术验证了目的蛋白的纯度和特性，这是一项常用的蛋白质检测方法，用于确认蛋白的表达和是否存在。实验证明，BmSCF在五龄家蚕的不同组织中具有转录活性，气门、脂肪体和丝腺组织的转录量相对较高，而头部和皮组织的相对较低，这揭示了BmSCF在不同组织中的功能调控可能有所差异。 此外，研究人员还利用Biacore 3000平台对BmSCF的蛋白相互作用进行了深入分析。Biacore 3000是一种生物传感器技术，能测定蛋白质间的相互作用，结果显示在家蚕BmN细胞中存在与BmSCF互动的未知蛋白，这为理解BmSCF的功能网络提供了新的线索。 总结来说，这篇首发论文详细介绍了如何通过基因工程手段表达并研究家蚕膜蛋白BmSCF，以及该蛋白在不同组织中的转录特性和潜在的蛋白质相互作用，这对于理解家蚕的发育和生理过程，以及可能的应用如疾病模型构建具有重要意义。