家蚕BmSNMP基因多角体表达与纯化研究

"该研究主要探讨了家蚕感觉神经元膜蛋白基因BmSNMP的多角体融合表达、纯化及表达分析，旨在深入理解该基因在家蚕嗅觉识别中的作用。" 本文的研究对象是家蚕感觉神经元膜蛋白基因BmSNMP，它在昆虫的气味识别过程中起着关键作用，属于CD36基因家族的一员，是这个家族中罕见地在神经元中发现的基因。研究团队首先从家蚕蛹cDNA文库中筛选并鉴定出BmSNMP基因，通过生物信息学分析证实其与其他物种的SNMP蛋白具有高度同源性。 接下来，科研人员采用PCR技术扩增BmSNMP基因，并将其插入原核表达载体pET-32a-polh-tev-BmSNMP中，成功转化到大肠杆菌BL21(DE3)中进行高效表达。利用多角体蛋白的特性，通过调整pH值、离心和阴离子交换层析等方法对重组融合蛋白进行了纯化。纯化后的蛋白经过TEV酶切，以期得到目标蛋白。 进一步，研究者运用Bac-to-Bac系统构建含有多角体和BmSNMP融合基因的重组病毒vBmpolh-BmSNMP，该病毒成功感染了家蚕BmN细胞。Western blotting分析显示，多角体融合的BmSNMP蛋白在家蚕细胞中得以表达，其分子量略大于理论预测，暗示可能发生了翻译后修饰。 同时，为了验证BmSNMP的定位，科研人员构建了重组病毒vBmpolh-BmSNMP-EGFP，EGFP（增强型绿色荧光蛋白）的加入使得在感染家蚕细胞后可以通过荧光显微镜观察到绿色荧光，结果显示BmSNMP在细胞膜附近表达，确认其为膜蛋白。 通过荧光定量PCR分析，发现在五龄幼虫的不同组织中，BmSNMP基因的转录水平存在显著差异，最高表达在脂肪体和气门，而表皮中的表达量最低，这为了解BmSNMP在家蚕嗅觉感知和生理功能中的具体作用提供了重要线索。 关键词涉及的领域包括家蚕生物学、膜蛋白研究、BmSNMP基因的功能解析、多角体融合表达技术、纯化方法以及表达分析，这些都为昆虫嗅觉识别机制的研究提供了新的视角和实验基础。