主办方：埃及基础与应用科学杂志2（2015）二百六十八完整文章合成水杨酸同系物的抗菌、镇痛、抗氧化和计算机模拟研究及其结构解释Jyotirmaya Sahoo*，Sudhir Kumar Paidesetty药物化学系，药物科学学院A R T I CL EI N F OA B S T R A C T文章历史记录：收到日期：2015年3月26日收到日期：2015年7月25日2015年7月28日接受2015年8月31日在线发布关键词：光谱抗菌分子对接镇痛抗氧化剂通过偶联水杨酸核上的芳胺和杂芳胺官能团，合成了一系列偶氮水杨酸类似物。所有合成的化合物的结构都通过各种现代分析方法进行了确认。对所合成的化合物进行了抗菌、镇痛和抗氧化活性的筛选化合物4e和4h对大多数细菌菌株显示出优异的显着抗菌活性，因为没有化合物对新型隐球菌显示出显着的抗真菌活性。溴取代的分子4 e（4-溴-3-甲基苯基偶氮水杨酸类似物）显示出最高的显著镇痛活性，抑制率为46.10%。体外抗菌和镇痛活性的结果与计算机模拟研究的结果一致。生物学活性的结果进行统计学解释。被安替比林偶氮和4-羧基苯偶氮取代的化合物具有潜在的抗氧化活性。© 2015曼苏拉大学。由Elsevier B. V.制作和托管。这是一个CC BY-NC-ND许可证下的开放获取文章（http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/）。1.介绍希腊医生希波克拉底的著作揭示了柳树的叶子和树皮在早期被用作止痛和这种天然来源的活性成分，后来被确定为水杨苷，含有糖和芳香成分，最初称为spirasure，后来称为水杨酸。水杨酸的从头合成首次在1852年进行，其结构推断为：2-羟基苯甲酸[1]。水杨酸衍生物具有抗氧化、抗增殖[2]和细胞毒活性[3]。偶氮水杨酸衍生物柳氮磺胺吡啶是一种在过去40年中被证明有效的药物，可有效治疗溃疡性结肠炎（炎症性肠病）[4]。由于作为载体的磺胺吡啶部分，副作用增加偶氮键断裂是由于存在于结肠腔部位的细菌酶偶氮还原酶，从而留下5-氨基水杨酸。 偶氮双水杨酸衍生物奥沙拉嗪可能是柳氮磺胺吡啶的较好替代品。*通讯作者。 联系电话： +91 09861433157。电子邮件地址：jjyotisahoo@rediffmail.com（J. Sahoo）。http://dx.doi.org/10.1016/j.ejbas.2015.07.0062314- 808 X/© 2015曼苏拉大学。Elsevier B. V.制作和托管这是CC BY-NC-ND许可证下的开放获取文章（http://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/）。可在www.sciencedirect.com在线获取ScienceDirect杂志主页：http://ees.elsevier.com/ejbas/default.asp埃及基础与应用科学杂志2(201第五章）二百六十八269文献调查支持偶氮水杨酸具有生物活性，并且也是合成抗癌、抗病毒、抗微生物和抗疟疾药物的有用前体[3]。水杨酸盐具有与其他NSAID相似的镇痛作用，可抑制环氧合酶（COX）[5]。NSAID抑制COX-1和COX-2的活性，从而抑制前列腺素和血栓烷的合成[6]。点燃-Ar/杂芳基-NH2 1（a-h）我OOH+Ar/杂芳基-N =N-Cl杂芳基/ArN OiiNOH哦理论支持也表明溴取代的3分子可以显示潜在的镇痛活性[7]。此外，本发明还2（a-h）哦4（a-h）文献调查表明，吡唑啉酮核是关键药效团，并负责各种药理活性，如镇痛[8]和抗微生物活性[9]。N-苯基取代的蒽基同类物也具有镇痛、抗风湿和抗炎活性[10]。上述信息鼓励我们合成一系列新的具有不同芳基和杂芳基官能团的偶氮水杨酸同系物，并研究其抗菌，镇痛和抗氧化活性。结构得到证实，方案1 - 44-磺酰基苯基-（4 b），4-硝基苯基-（4c），4-甲氧基苯基-（4d），4-溴，3-甲基苯基-（4 e），4-（1，5-二甲基-2-苯基）-吡唑-3-酮-（4f），4-羧基苯基-（4g），N-（5-甲基异恶唑-3-基）苯磺酰胺-（4h）。反应：i.）NaNO2/HCl，0-5 °C，重氮化; ii.）10%NaOH，偶联反应。新合成的偶氮水杨酸同系物的结构。光谱表征合成的偶氮水杨酸基因作为配体单独针对靶蛋白（PDB ID：NDM-1的3SPU和COX-2的1CX 2），通过计算，采用分子对接法分别评价其抗菌活性和镇痛活性。新合成的偶氮水杨酸同系物的结构H3CCHN32.1.2-羟基-5-（4-氨磺酰基苯偶氮）苯甲酸（4a）深红色粉末;产率75%; Rf 0.8; mp（℃）; 297 - 300;UV-可见光（λmax，乙醇）：366nm;IR（KBr，γ，cm-1）：3374（O-Hstr.），1676（C=O str.），1587（C=C str.），1482（-N=N-）、1331、1160（SO2str.SO NH ） ， 910 （ S-N str. ） ， 1096 （ C-O str. ） ;1H NMR（CDCl，δppm，HOOO2 2 3NNS匪R（400MHz）：7.46（s，2H，50MHz），8.01 -8.10（m，4H，Ar +H），12.10（sb.OONOHN OH2 2NH3COHO1H，COOH），11.69（sb，1H，OH），7.36（d，1H，水杨酸H-3），8.11OH（d，1H，水杨酸H-4），8.34（s，1H，水杨酸H-6）;LC-MS（%面积）; 77.65; m/z ; 320.13（M-1）; C13 H11 N3 O 5 S的分析：计算% C，48.59; H，3.45; N，13.08; S，9.98;实测%：C，48.19; H，3.48; N，13.11; S，9.95。2.材料和方法本研究中使用的所有化学品均为合成级，并购自MerckSpecialties Ltd。（印度孟买）。用各种现代分析技术对水杨酸合成化合物的结构构象进行了研究。FT/IR（使用KBr盘的JASCOFT/IR 4100分光光度计）、使用TMS作为内标的1H NMR（Bruker 1H NMR 400MHz）用紫外-可见分光光度计（JASCO V-630 Spectrophotometer）研究了化合物的溶剂行为。 通过开放毛细管法（Elico）测定熔点并且未校正。采用琼脂扩散法对所合成的配体进行体外抗菌活性评价所选配体的潜在抗菌和镇痛活性的结果通过分子对接得到合理化。芳基/杂芳基偶氮水杨酸类似物的合成是在我们先前报道的工作的基础上进行的[11]（方案1）。2.2.2-羟基-5-（4-氨磺酰基苯偶氮）-苯甲酸（4 b）黄色粉末;产率72%; Rf 0.8; mp（℃）; 328 - 330;UV-vis（λmax，乙醇）：361nm;IR（KBr，γ，cm-1）：3431（O-Hstr.），1671（C=Ostr.），1628（C=C str.），1448 （-N=N-），1389 ，1206（SO2str.SO3H），1127（C-O str.）;1HNMR（DMS0-d6，Sppm，400MHz ）：7.83 -8.34（m，4H，Ar H），11.69（sb. 1H，OH），12.10（sb，1H，COOH），7.28（d，1H，水杨酸H-3），8.08（d，1H，水杨酸H-4），8.34（s，1H，水杨酸H-6）;2.3.2-羟基-5-（4-硝基苯偶氮）-苯甲酸（4c）深 红色 粉末 ; 产 率92%; Rf 0.7; mp （ ℃ ） ; 243-1672 （ C=Ostr.），1610（C=C str.）， 1482（-N=N-），1530，1344（NO2 str.），1106（C-O str.）; 1HNMR（DMS0-d6，Sppm，400MHz ）：7.75 -8.25（m，4H，Ar H），11.75（sb. 1H，OH），12.09（sb，1H，COOH），7.31（d，1H，水杨酸H-3），8.13（d，1H，水杨酸H-4），8.35（s，1H，水杨酸H-6）;270埃及基础与应用科学杂志2(201第五章）二百六十八2.4.2-羟基-5-（4-甲氧基苯基偶氮）-苯甲酸（4d）黑色粉末;产率95%; Rf 0.8; mp（℃）; 238- 240;UV-可见光（λmax，乙醇）：374nm;IR（KBr，γ，cm-1）：3464（O-Hstr.），2926（CH2 str.），1667（C=O str.），1596（C=C str.），1491（-N=N-），1111(C-O str.）; 1HNMR（DMS0-d6，Sppm，400MHz）：7.054H，Ar H ），3.83 （s ，3H ，ArOCH3 ），11.37 （sb.1H ，OH），12.13（sb，1H，C 00H），7.37（d，lH，水杨酸H-3），8.11（d，lH，水杨酸H-4），8.27（s，lH，水杨酸H-6）;%：C，61.86; H，4.34; N，10.19。2.5.5-（4-溴-3-甲基苯基偶氮）-2-羟基苯甲酸（4 e）棕色粉末;产率85%; Rf 0.8; mp（℃）; 288 - 290;UV-可见光（λmax，乙醇）：361nm;IR（KBr，γ，cm-1）：3451（O-Hstr.）， 2937（CH str.），1661（C=O str.），1587（C=C str.），1489（-N=N-），1147(C-Ostr. ） ， 748 （ C-Br str ） ; 1H NMR （ CDCl3 ， δppm ，400MHz）：7.54- 7.557.72 1H NMR（400MHz，DMS0-d6）δ 1.44（m，3H，Ar =H），2.44（s，3H，Ar =H3），11.49（sb.1H，0H），11.87(sb，1H，COOH），6.86（d，1H，水杨酸H-3），7.86（d，1H，水杨酸H-4），8.28（s，1H，水杨酸H-6）;2.6.5-（（1，5-二甲基-3-氧代-2-苯基-2，3-二氢-1H-吡唑-4-基）偶氮）-2-羟基苯甲酸（4f）棕色粉末，产率85%; Rf 0.7; mp（℃）; 256 - 260，UV-vis（λmax，乙醇）：368nm;IR（KBr，γ，cm-1）：3410（O-Hstr.）， 2926（CH str.），1662（羧基的C=O链），1606（C=C链），1486（-N=N-），1153（C-O str）; 1H NMR（DMSO，δppm，400MHz）：6.85-（s，3H，-N-CH3），11.65（sb.1H，OH），12.17（sb，1H，COOH），7.32（d，1H，水杨酸H-3），7.41（d，1H，水杨酸H-4），7.87（s，1H，水杨酸H-6）;2.7.5-（4-羧基苯偶氮）-2-羟基苯甲酸（4g）黑色粉末;产率95%; Rf 0.7; mp（℃）; 286 - 290，UV-vis（λmax，乙醇）：360nm;IR（KBr，γ，cm-1）：3481（O-Hstr.）， 1692（C=Ostr.），1608（C=C str.），1493（-N=N-），1180（C-O str.）;1HNMR（DMS0-d6，Sppm，400MHz）：8.131H，OH），12.54（sb，1H，COOH），7.33（d，1H，水杨酸H-3），8.11（d，1H，水杨酸H-4），8.29（s，1H，水杨酸H-6）;2.8.2-羟基-5-（（4-（N-（5-甲基异恶唑-3-基）-氨磺酰基）-苯基）偶氮）苯甲酸（4 h）黑色粉末;产率73%; Rf 0.8; mp（℃）; 227 - 230;UV-vis（λmax，乙醇）：370nm;IR（KBr，γ，cm-1）：3461（O-Hstr.），3138（NHstr.），2922（CH2str. ），1668 （C=O str. ），1614（C=Cstr.），1473（-N=N-），1315，1170（SO2 str.SO2NH），928（S-N str.）;1HNMR（DMS0-d6，Sppm，400MHz）：8.02 -8.34（m，4H，Ar + H），11.69（sb.1H，OH），12.11 （sb ，1H，COOH），11.12 （s ，1H，SO2NH），2.30（s，3H，CH3），6.17（s，1H，异恶唑基H-4），7.00（d，1H，水杨酸H-3），7.97（d，1H，水杨酸H-4），8.34（s，1H，水杨酸H-6）;7.89.2.9.微生物评价2.9.1.抗微生物活性以上新合成的偶氮水杨酸同系物在不同的微生物菌株，即。大肠埃希菌（MTCC 614）、肠道沙门氏菌血清型伤寒（MTCC 773），鼠伤寒沙门氏菌（MTCC 98），肠道沙门氏菌副伤寒（MTCC3220），福氏志贺菌（MTCC1457），铜绿假单胞菌（MTCC1035），霍乱弧菌（MTCC 3906），藤黄微球菌（MTCC1809），肺炎克雷伯菌（MTCC 109），环状芽孢杆菌 （ MTCC490 ） ， 缓 症链球菌（MTCC2695 ） ， 黑曲霉（MTCC9933），白色念珠菌（MTCC 3017）、光滑念珠菌、新型隐球菌和红色毛癣菌，来源于印度昌迪加尔的微生物技术和基因库研究所（IMTECH）。金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌菌株hswx 88[12]在Utkal大学药物科学系药物生物技术部门分离。使用新鲜传代培养的微生物。氨苄西林和氟康唑作为参照抗生素。使用无菌熔融营养琼脂（抗菌活性）和沙氏葡萄糖琼脂（抗真菌活性），通过琼脂孔扩散法测定新型偶氮水杨酸同系物（4a-将固化的培养基接种并打入直径为6 mm的孔中。向每个孔中加入一定体积的供试品和参比化合物储备液（浓度为1 μg/μL对显示出对大多数细菌菌株的显著活性的化合物进行其对不同真菌菌株的活性的研究使用Hi-Antibiotic Zone Scale（Hi-Media）测量抑菌圈直径。2.9.2.最低抑菌浓度（MIC）使用10%DMF溶液制备1毫克/毫升的合成化合物和参考抗生素的储备溶液。此外，通过连续稀释法制备了5种不同浓度（500将不同浓度的相应测试化合物加载到在细菌接种培养基上制备的孔中，并在37 °C下孵育18MIC定义为抑制琼脂培养基上可见生长的测试化合物孵育后，测定最小抑制浓度[14]。2.10.药理活性2.10.1. 动物在这项工作中，使用了180-200 g的雌性Wistar大鼠实验在动物实验控制和监督埃及基础与应用科学杂志2(201第五章）二百六十八271并 由 机 构 动 物 伦 理 委 员 会 批 准 ， 注 册 号 为1171/C/08/CPCSEA，参考号为60/SPS/IAEC/SOAU。2.10.2. 急性毒性研究对雌性Wistar大鼠进行急性经口毒性研究遵循OECD指导原则No.420（2000）急性经口毒性-固定剂量程序（观察研究和主研究），为期14天，以研究动物的急性毒性症状和行为变化。2.10.3. 醋酸扭体模型将适当体重的任一性别的白化小鼠保持在受控的光照和温度条件下。将动物分为10组，每组6只动物。第1组作为对照组，第2组作为阳性对照组，其中给予标准乙酰水杨酸，剂量为50mg/kg体重（腹膜内）。分别以50和100 mg/kg体重的剂量水平经口向第3 - 10组动物提供试验（4 e、4f、4g和4 h第2组乙酰水杨酸给药后30分钟和第3-10组试验药物给药后1小时观察到开始出现扭体。最后计算镇痛活性百分比。%镇痛活性平均扭体次数对照组$治疗组<$平均扭体次数对照组<$100次。反应时间表示为平均值± SEM。统计学分析通过单因素方差分析，然后进行Dunnett2.10.4. DPPH模型抗氧化活性测定用DPPH法测定了新偶氮水杨酸类似物（4 e2.11.计算机模拟研究在生物信息学的计算方法中，利用对接技术，从蛋白质数据库（PDB）中检索到一个特定的靶标，即K. pneumoniae的环氧合酶-2（PDB ID：3SPU作为细菌靶蛋白[16]）和小家鼠的环氧合酶-2（PDB ID：1CX 2作为镇痛靶蛋白[7]）用于对接研究 。 通 过 使 用 Chem Draw ultra 10.0 制 备 合 成 的 化 合 物（4e、4f、4g和4h）的结构，并将其从.mol文件格式转换为PDB格式用于对接。使用Arugus Lab 4.0对接软件分别研究新合成化合物（4 e、4f 、4g和4 h）的计算机模拟Theprotein–ligand通过分子对接获得的所得分数预测最强的粘合剂。2.12.统计分析对抑制区的观察数据进行单因素方差分析。通过Dunnett. statsdodo.com/SSizAOV_Pgm.php）。在5%的第一类错误水平下进行显著性检验。研究假设为“ 供试化合物的抑菌圈高 于 参 比 抗 生 素 ， 而 无 差 异 假 设 （ 无 效 假 设 ） " 表 明供试化合物和参比抗生素的抑菌圈之间无显著差异。2.13.样本量确定采用1型错误概率（d）= 0.05，把握度（1-β）= 0.8，组内组数13，SD = 2，计算出最小样本量为5。然而，研究中针对每种化合物对每种菌株的样本量为6。修改[13]。 将合成的玉米淀粉和玉米淀粉的反应混合物，取不同浓度的等份试样，用甲醇将体积调节至3mL向该混合物中加入1mL的DPPH在甲醇中的0.1mM溶液将混合物在黑暗中保持30分钟。 并与标准的丁基羟基甲苯（BHT）进行了清除自由基活性的比较.在517 nm处测量光密度并计算抑制浓度。将1毫升0.1 mM DPPH甲醇溶液和3 mL甲醇视为对照。%抑制率测试100其中，A =对照品的吸光度，A=供试品的吸光度测定提供50%抑制的样品浓度（IC50）。所有实验一式三份进行，IC50值表示为平均值± SD。3.结果和讨论3.1.化学通过在10%氢氧化钠溶液存在下将8种不同芳基和杂芳基胺衍生物的重氮盐与水杨酸偶联来合成一系列偶氮水杨酸类似物（方案1）。在亚硝酰氯存在下进行重氮化，并通过加入尿素来破坏过量的亚硝酸。将粗产物从无水乙醇中重结晶所合成的化合物的结构经FT/IR、1HNMR、UV、LC-MS水杨酸同系物（4a化合物4h表现出较强的吸收272埃及基础与应用科学杂志2(201第五章）二百六十八图化合物4c的11668、1315、1170、928和3138 cm-1处的谱带是由于ν C=Ostr. ν S-N海峡和VNH str.分别在1473和2922 cm-1处的中振动带表明化合物4 h中的甲基是ν -N=N-和ν CH2。化合物4c在1482、1530和1344 cm −1处显示出中等吸收带，分别归因于ν -N=N-和ν NO2str.的存在（图1）。新合成的5-杂芳基/芳基偶氮水杨酸同系物的1 H NMR数据进行了分析，在CDCl3和DMSO d6。所有化合物均在δ12.08-12.06 ppm和δ 11.09-11.65 ppm处显示两个宽单峰，分别表明水杨酸的羧基质子和酚羟基质子的存在。在所有同系物中均观察到水杨酸H-6质子的存在，在δ 8.29-8.37 ppm范围内具有尖锐的单线水杨酸的其他芳香质子在δ 6.86-7.36 ppm和δ 7.86-8.13 ppm范围内出现两组双峰信号除了上述光谱数据之外，化合物4e在δ 2.44 ppm处出现三个类似的环境质子，这归因于甲基质子的存在化合物4f在δ处出现两个尖锐的单重峰，δ 3.15ppm，可能分别是由于N-CH3和=C-CH3的存在。所述化合物中的芳香族多重峰信号出现在δ 6.85-7.30 ppm范围内。化合物4 h在δ 6.17 ppm异恶唑H-4处出现单峰信号。化合物4e和4a的1H NMR数据报告于图1B中。 二、3.1.1.溶致变色行为用紫外-可见分光光度计研究了产物的溶致变色行为。研究了新合成的5-杂芳基/芳基偶氮水杨酸同系物（4a-4 h）在不同溶剂中的吸收光谱根据表1中所示的数据，与其他极性溶剂相比，除了化合物4a之外，所有合成的化合物在DMSO和DMF中相对于λmax在水杨酸的C-5位引入4-硝基苯偶氮取代基，与其他偶氮水杨酸类似物相比，产生最大的红移。含水杨酸的分子（4c）上的吸电子取代基NO2引起更深的变色。图2埃及基础与应用科学杂志2(201第五章）二百六十八273表1-新合成的偶氮水杨酸类似物（4a -4 h）的UV-可见光谱数据（λ max）。化合物。λmax（乙醇）λmax（DMSO）λmax（DMF）λmax（二恶英）λmax（乙腈）4a262,366393272,396354263,3954b264,361380271,381306301,3654c273,388281,4284303664094d3743833833583734e361386389290,3543764f368383381368296,3754g360392401342265,340,3904h370399410359258,383在所有溶剂中与具有给电子甲氧基取代基的化合物4d所有合成的化合物在所有溶剂中在306-396 nm范围内观察到的λmax化合物4h在所有溶剂中和所有合成的化合物在DMF中的溶剂化变色效应在图1中示出。3 .第三章。3.1.2.LC–MS通过LC-MS 证实了合成化合物的预测分子量具有m/z 值320.13、321.08、286.12、273.21、333.03、353.07、284.98的化合物4a、4 b、4c、4d、4 e、4f、4g和4 h和403.04分别强有力地揭示了它们的分子式。化合物4g的LC-MS在图3A中给出。 四、DSC热分析图报告了化合物4c的尖锐和窄的吸热峰，证明了对应于其熔点的峰温度（245.39 °C）。 五、3.2.微生物3.2.1.抗微生物活性大部分合成的水杨酸同系物都具有较好的抗菌活性。通过单向分析比较了每种细菌菌株的抑菌圈平均值±方差和得到的p值。发现不同化合物之间的平均抑制区存在显著差异，p值为0.00。新合成的化合物与标准品相比的抗菌活性结果（以平均值±SD表示）报告于表2中。报道的结果显示，化合物2-羟基-5-（（4-（N-（5-甲基异恶唑-3-基）氨磺酰基）苯基）二氮烯基）苯甲酸（4 h）和5-（（4-溴-3-甲基苯基）二氮烯基）-2-羟基苯甲酸（4 e）与标准品相比对大肠杆菌显示出优异的显著抗菌活性。 coli、S. ser.typhi，伤寒沙门氏菌S. 鼠伤寒沙门氏菌（S. 副伤寒，S. 弗莱 克斯内里河谷 cholera，K. 肺炎支原体（M. luteus，S.缓症链球菌和B.枯草芽孢杆菌对水杨酸的抑制作用可能是由于水杨酸的C-5位上分别含有5-甲基异恶唑基和4-溴-3-甲基苯偶氮基的结构共轭所致。化合物5-（（4-羧基苯基）二氮烯基）-2-羟基苯甲酸（4g）对沙门氏菌（S. flexneri，K. 肺炎，B. circulans和S.金黄色葡萄球菌的致病机理可能是水杨酸C-5位上的4-羧基苯偶氮结构共轭所致。水杨酸类似物（4 e-4h）对S. flexneri和B. 枯草芽孢杆菌的数量在图中给出。第六章水杨酸同系物4g和4h<对A. 尼日尔、黑胸草T. rubrum和C.光滑可能是由于偶氮键轴承结构的存在图 3-化合物4h在不同溶剂中的溶剂化变色效应（A）和水杨酸类似物（4a-4h）在DMF中的溶剂化变色效应（B）。274埃及基础与应用科学杂志2(201第五章）二百六十八图4取代基如4-羧基苯偶氮和5-甲基异恶唑偶氮。化合物4e显示出良好的显著抗真菌活性（p0.05<）.白色念珠菌和C. 表3. 化合物5-（（4-溴-3-甲基苯基）二氮烯基）-2-羟基苯甲酸（4 e）和2-羟基-5-（（4-（N-（5-甲基异恶唑-3-基）氨磺酰基）苯基）二氮烯基）苯甲酸（4 h）分别与标准品相比的显著抗微生物活性的图解说明示于图1中。第 七章3.2.2.最低抑菌浓度评价以MIC（μg/mL）测定水杨酸同系物的抑制特性研究测试类似物针对不同细菌菌株的MIC值以确定化合物能够发挥其活性的最低浓度水平（表4）。所有水杨酸同系物均表现出潜在的抑菌活性，其中水杨酸同系物4h和4e对细菌生长有抑制作用。图5埃及基础与应用科学杂志2(201第五章）二百六十八275表2-偶氮水杨酸类似物（4a-4h）的抗菌活性，抑菌圈（mm）。化合物。E. coli S. 伤寒沙门氏菌鼠伤寒沙门氏菌副伤寒S. 福氏P. 铜绿诉霍乱4a–12 ± 0.63––4b–13.17 ± 0.98––4c13.17 ± 1.17 8.83 ± 1.17 13.17 ± 0.98* 8.5 ± 0.8414.17 ± 1.612.33 ± 1.37–4d10.5 ± 0.55 8.83 ± 1.17 13.5 ± 1.23* 8.83 ± 1.1712.33 ± 1.379.67± 2.8811.5± 1.234e20.17 ± 0.75* 18.67 ± 1.21* 18.5 ± 1.38* 19 ± 2.1*21.5± 1.76*–25 ± 1.1*4f––––4g10 ± 1.6715 ± 1.27*––4h22 ± 1.55* 18.33 ± 1.51* 16.67 ± 1.37* 18 ± 0.63*31.33 ± 1.03*–30.33 ± 0.82*RA（氨苄青霉素）12.67 ± 1.51 12 ± 0.89 10 ± 1.1 14 ± 2.2813 ± 0.6315 ± 2.115 ± 2.1化合物。K. 肺炎支原体卢特斯 湾circulansS. 缓症B. 枯草S. 金黄色4a20 ± 0.63*–8.33± 0.52–4b11.67 ± 1.03 9.67 ± 1.0312.67 ± 1.219.33± 2.16–4c–9.5± 0.848.83± 1.17–4d–9 ± 1.19 ± 1.2711.5± 1.764e21.17 ± 1.33* 18.67 ± 1.21* 25.83 ±0.7522.33 ± 1.03*22.67 ± 1.37*–4f18 ± 0.63* 8.5 ± 0.849.17± 0.9810.33 ± 1.37–4g20 ± 1.1* 8.83 ± 1.17 18 ± 1.1*12 ± 011.67 ± 1.5115.17 ± 1.17*4h25 ± 1.1* 16 ± 1.41*32.5± 1.52*22.17 ± 1.94*–RA（氨苄青霉素）15.33 ± 1.97 13.17 ± 2.56 15.67 ± 1.2114 ± 0.6315 ± 1.2713 ± 1.67结果以平均值± SD表示，n = 6。* p 0.05（与RA相比具有统计学显著性–, no zone ofE. coli-大肠杆菌、S. 伤寒沙门氏菌（Salmonella enterica ser.typhi）、伤寒沙门氏菌（S. 鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella enterica typhimurium）、鼠伤寒沙门氏菌（S. 副伤寒沙门氏菌 福氏志贺菌（Shigellaflexneri）、福氏志贺菌（P. 铜绿假单胞菌（Pseudomonasaeruginosa）、V. 霍乱-霍乱弧菌，M. 藤黄微球菌（Micrococcusluteus）、-K. 肺炎- 肺炎克雷伯氏菌，B.环状芽孢杆菌（Bacillus circulans）、S.缓症链球菌（Streptococcus mitis）、缓症链球菌（B. subtilis-枯草芽孢杆菌（Bacillussubtilis）、S.金黄色浓度为31.25 μg/mL时，大多数微生物生长其次是4-羧基苯偶氮取代水杨酸同系物4g，浓度为31.25 μg/mL。参比抗生素（氨苄青霉素）能够显示其对所有细菌菌株的MIC为31.25μg/mL。3.3.药理学3.3.1.镇痛活性供试化合物在高达2000 mg/kg体重时是安全的无中毒症状、大体行为改变和死亡观察了在文献报道的基础上，对取代的4-溴-3-甲基苯偶氮（4e）、吡唑偶氮（4f）、4-羧基苯偶氮（4g）和异恶唑偶氮（4h在对照组中，醋酸产生的平均83.5观察10 min内扭体次数为± 2.40次。乙酰水杨酸50 mg/kg对小鼠扭体反应的抑制率为66.07% ，扭体反应为28.33 ±1.89*，而新合成的5-杂芳基/芳基偶氮水杨酸同类物（4 e，4f，4g和4 h）的扭体反应抑制率分别为46.10%，16.97%，31.13%，图 6-水杨酸类似物（4 e-4 h）对（A）S. flexneri和B. 枯草芽孢杆菌。276埃及基础与应用科学杂志2(201第五章）二百六十八表3-偶氮水杨酸类似物（4 e、4g和4 h）的抗真菌活性，抑制区（mm）。化合物。A. 尼日尔T. 缢虫C. 白色C. 光滑C. 新生4e19 ± 2.7612.17 ± 0.9823.33 ± 1.51*20 ± 2*13.67 ± 1.974g21 ± 0.63*18.5± 1.52*21.67 ± 2.4221.83 ± 2.56*17.17 ± 0.754h19.83 ± 1.84*18.5± 1.52*21 ± 2.8320.33 ± 2.07*21.17 ± 0.98RA（氟康唑）17 ± 0.6313 ± 1.4119.33 ± 4.6815 ± 1.7924 ± 1.67结果以平均值± SD表示，n = 6。* p 0.05（与RA相比具有统计学显著性–, no zone ofA. niger-黑曲霉（Aspergillus niger）、黑曲霉（T. 红色毛癣菌（Trichophyton rubrum）白色念珠菌光滑假丝酵母（ 新生隐球菌（Cryptococcusneoformans）在100 mg/kg体重的剂量下，分别抑制16.76%（表5）。在剂量下观察到的扭体反应100 mg/kg体重时，化合物（4 e，4f，4g和4 h）的最大吸收剂量分别为45 ± 4.86*，69.33 ±5.23，57.5 ± 5.60** 和69.5 ± 4.12。带有4-溴、3-甲基苯基和4-羧基苯基取代基的偶氮水杨酸同系物（4 e和4g）在100 mg/kg体重剂量下报告的抑制率分别最高（46.10%和31.13%）（表5）。化合物4 e和4g在50和100 mg/kg体重的剂量下均显示出显著的镇痛活性（扭体反应），但化合物4 e在100 mg/kg体重的剂量下显示出最高的显著镇痛活性45 ± 4.86*（p 0.001），这可能是由于水杨酸的C-5位存在唑啉化的4-溴，3-甲基苯基的结构3.3.2.体外抗氧化剂筛选标题化合物的结构鉴定表明存在酚基。一般来说，酚类化合物和含氮杂环具有清除自由基的活性。DPPH自由基接受有机分子的氢原子或电子，可以形成稳定的抗磁性分子。新合成的5-杂芳基/芳基偶氮水杨酸同系物（4 e、4f、4g和4 h）在一定浓度下的清除作用显示50%的抑制（IC50）水平的47.47 ±0.02， 37.34 ± 0.02， 39.3± 0.05和分别为59.7 ± 0.03 μg/mL，而标准品BHT显示为33.5 ± 0.05μg/mL（表6）。包括用于评价其抗氧化活性的化合物的抑制百分比的结果显示，测试化合物4g显示与标准品相比，化合物4f在10 μg/mL的浓度下显示出显著的DPPH清除活性（>20%），而化合物4f在60 μg/mL的浓度下显示出显著的DPPH清除活性（>79%）。合成的类似物4e、4f、4g和4h的自由基清除活性在图1中提及。八、偶氮水杨酸类似物4f的IC50最低，这可能是由于水杨酸C-5位上存在4-安替比林偶氮官能团所致。4.计算机模拟研究对接技术在现代药物发现过程中有着广泛的应用，是一种利用蛋白质-配体复合物的结合能快速准确预测生物分子构象的有效工具。分子对接工作的目的是寻找针对单个靶蛋白即NDM-1和COX-2的有效合成化合物（表7）。配体4 e-4 h分别与K.肺炎。水杨酸同系物的对接能为负值，其中4 h和4 e是β-内酰胺酶-1的有效抑制剂化合物4 h针对NDM-1的蛋白质-配体4 h与NDM-1蛋白的氨基酸如ASP34、ARG 52、GLN 53、TRP 59、ARG 81、TRP104，GLU 108，ILE 109。配体4 e-化合物4 e和4 h是环氧合酶-2的配体4e与氨基酸结合图7表4-偶氮水杨酸类似物（4a-4h）对不同细菌菌株的最小抑制浓度MIC（μg/mL）。化合物E. 杆菌 S. ser.typhiS. 鼠伤寒S. 副伤寒S. 福氏P. 铜绿诉霍乱M. 藤黄K. 肺炎B. circulansS. 缓症B. 枯草S. 金黄色4a–12525012562.5–––31.25––250–4b–250125250125––250125–31.25125–4c125250250125125125––––125250–4d250250125250125>500125–––250>5001254e31.2531.2531.2531.2531.25–31.2531.2531.2531.2531.2531.25–4f–––––––25031.25–125250–4g250–––31.25––12531.2531.2512525031.254h31.2531.2531.2531.2531.25–31.2531.2531.25–31.2531.25–RA（氨苄青霉素）31.2531.2531.2531.2531.2531.2531.2531.2531.2531.2531.2531.2531.25–, no zone ofE. coli-大肠杆菌、S.伤寒沙门氏菌（Salmonella enterica ser.typhi）、伤寒沙门氏菌（S.鼠伤寒沙门氏菌（Salmonella enterica typhimurium）、鼠伤寒沙门氏菌（S.副伤寒沙门氏菌（Salmonella entericaparatyphi）、副伤寒沙门氏菌（S.弗氏志贺菌-弗氏志贺菌，铜绿假单胞菌-铜绿假单胞菌，霍乱弧菌-霍乱弧菌，M.藤黄微球菌（Micrococcus luteus）、- K.肺炎克雷伯氏菌（Klebsiella pneumoniae）、B.环状芽孢杆菌（Bacillus circulans）、S.缓症链球菌（Streptococcus mitis）、缓症链球菌（B. subtilis -枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）、S.金黄色图偶氮水杨酸类似物与标准丁基羟基甲苯（BHT）的8277埃及基础与应用科学杂志2（2015）268278埃及基础与应用科学杂志2(201第五章）二百六十八文献综述表明溴取代分子具有镇痛作用[7]。水杨酸同系物的镇痛活性的结果还显示，取代的溴-化合物4 e（4-溴-3-甲基苯基取代的偶氮水杨酸）具有最高的显著镇痛活性。偶氮水杨酸同系物（4 e-4 h ） 的 计 算 机 研 究 还 预 测 ， 4 -溴 - 3 - 甲 基 苯 偶 氮 取 代 的 水 杨 酸 类 似 物 （ 4 e ） 具 有最 高 的 结 合 能 ， 即 ，-12.00 kcal/mol，这也支持乙酸诱导法获得的结果5.结论COX-2蛋白，即VAL 295、TRP 387、HIS 388、LEU 391、PHE395、PHE 404、PHE 407、LEU 408。化合物4 e对COX-2的蛋白质-配体相互作用报告于图1B 中。第九章对具有显著抗菌镇痛作用的水杨酸同系物（4 e水杨酸同系物与选择性受体β-内酰胺酶-1的对接结果K. pneumoniae和M.肌肉的数量见表6。配体受体与化合物4h和4 e分别在
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